第一章：血液样本采集和血涂片制备1

初级临床医学检验技师考证必备知识点，知识点包括：血液生理概要、采血方法、抗凝剂选择、血涂片制备等。

第一章 血液样本采集和血涂片制备

• 血液生理概要
  • 血液的理化性质
    • 血量：成人约4-5L，约占体重的6%-8%
    • 颜色
      • 动脉血：鲜红色（氧合血红蛋白）
      • 静脉血：暗红色（还原血红蛋白）
      • 严重贫血：红色变浅
      • CO或氰化物中毒：樱红色
    • 酸碱度：7.35-7.45
    • 血浆渗透压：290～310mOsm/（kg·H20）
  • 血液特性：悬浮稳定性、黏滞性（纤维蛋白原、球蛋白）、凝固性
  • 血液组成
    • 血细胞45%
      • 红细胞
      • 白细胞
      • 血小板
    • 血浆55%
      • 水90%-92%
      • 血浆蛋白
        • 清蛋白
        • 球蛋白
        • 纤维蛋白原
    • 全血
  • 血液标本类型
    • 全血：临床血液学检查
    • 血浆：全血+抗凝剂+离心
      • 内分泌激素、血栓、止血等检查
    • 血清：全血+离心（静置）
      • 临床化学、免疫学检查
    • 血清缺凝血因子
      • I（纤维蛋白原）、II（凝血酶原）、V、VIII
• 采血方法
  • 静脉采血
    • 肘部静脉
    • 为避免血小板激活，使用塑料注射器和硅化处理后的试管或塑料试管
    • 操作方法：准备→检查→选择→消毒→扎压脉带→穿刺→抽血→放血与混匀
    • 操作注意事项
      • 消毒：先用30g/L碘酊—顺时针—75%乙醇
      • 穿刺：针头与皮肤呈30°角刺入皮肤，以5°角向前穿破静脉壁进入静脉腔
      • 抽血：只能外抽不能内推
      • 放血与混匀：取下注射器针头沿试管壁缓慢注入，避免溶血和产生气泡
  • 皮肤采血（毛细血管采血法）
    • 手指（成人）、耳垂、拇指或足跟（婴幼儿）
    • 操作方法：准备→按摩→消毒→针刺→拭血→吸血→稀释
    • 注意事项
      • 所选择采血部位无烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症等
      • 一人一针一管，避免交叉感染，最好用一次性器材。
      • 皮肤消毒后，应待75%乙醇挥发后采血，否则流出的血液扩散而不成滴。
      • 因第1滴血混有组织液，应擦去。 如血流不畅切勿用力挤压，以免造成组织液混入，影响结果的准确性。
      • 进行多项检查时，采血的顺序依次为血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数等
  • 真空采血
    • 真空采血容器
      • 盖子颜色 添加抗凝剂 注意事项 用途 红色 无 凝块形成约30min 化学、血清学、血库 紫色 EDTA 须颠倒混匀6～8次 全血细胞计数（CBC） 淡蓝色 枸橼酸钠 须颠倒混匀；血液与抗凝比例为9:1 凝血检查（PT、APTT、因子测定） 绿色 肝素钠、肝素锂、肝素铵 根据实验需要，选择不同类型的肝素 化学 灰色 氟化钠、草酸钾 不能用于其他化学检查 葡萄糖、糖耐量、乙醇浓度 黄色 多茴香脑磺酸钠 须颠倒混匀8次 血培养 黑色 枸橼酸钠 血液与抗凝剂比例为4:1 血沉
    • 采血
      • 止血带结扎时间应小于1分钟 如超过2分钟，大静脉血流受阻而使毛细血管内压增高，使分子质量＜5000的物质逸入组织液，或缺氧引起血液成分的变化，使检查结果增高或减低。
    • 溶血
      • 因容器不洁、接触水、强力振荡、操作不慎等可引起溶血，使红细胞计数、血细胞比容、血浆或血清化学成分（如钾、镁、转氨酶、胆红素）等多项指标检验结果发生变化。
• 抗凝剂选择
  • 乙二胺四乙酸盐EDTA
    • 钠盐（EDTA-Na2·H2O）、钾盐（EDTA-K2·2H2O）
    • 抗凝原理：螯合钙离子。
    • 适用范围：
      • 对血细胞形态、血小板计数影响很小
      • CBC（全血细胞计数）抗凝剂用EDTA-K2·2H2O。
    • 不适于：凝血检查、血小板功能试验。
  • 草酸盐
    • 抗凝原理：草酸钙沉淀。
    • 双草酸盐
      • 适用范围： 血细胞比容、CBC、网织红细胞计数等检查，
      • 不适于： 血小板计数、白细胞分类计数
  • 肝素
    • 抗凝原理：加强抗凝血酶（AT）灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，并阻止血小板聚集等作用，从而阻止血液凝固。
    • 适用范围：红细胞渗透脆性试验
    • 不适于：CBC、细胞形态学检查
  • 枸橼酸盐
    • 抗凝原理：螯合钙离子
    • 使用方法：配成109mmol/L的浓度。 　　1:9------凝血 　　1:4------红细胞沉降率
    • 适用范围：凝血、红细胞沉降率、输血保养液。
• 血涂片制备
  • 要求
    • ①厚薄适宜 ②头体尾明显 ③细胞分布均匀 ④血膜边缘整齐 ⑤并留有一定空隙
  • 制备
    • 手工推片法25°～30°夹角
    • 影响因素：血滴大小、推片与载玻片间夹角、推片速度、血细胞比容
  • 厚血膜涂片法：疟原虫、微丝蚴等
• 血细胞染色
  • 瑞氏染色法
    • 染料组成：酸性染料伊红（E-） 钠盐 阴离子、碱性染料亚甲蓝（M＋） 氯盐 阳离子
    • 甲醇的作用：一是溶解亚甲蓝和伊红；二是固定细胞形态
    • 染色原理;
    • pH值的影响：磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8），保证细胞受色时恒定最佳pH条件
    • 注意事项：冲洗时应以流水冲洗，不能先倒掉染液，以防染料沉着在血涂片上
• 方法学评价
  • 瑞氏染色法：最经典、最常用。对于细胞质成分、中性颗粒等可获得很好的染色效果，但对细胞核的着色能力略差。
  • 吉姆萨染色法：对细胞核、寄生虫（如疟原虫等）着色较好，结构更清晰，但对细胞质成分的着色能力略差
  • 瑞-吉姆萨复合染色：使细胞胞质、颗粒、胞核等均获得满意的染色效果
  • 新鲜配制的染料偏碱，须在室温或是37℃下贮存一定时间，待亚甲蓝逐渐变为天青B，贮存时间愈久，染色效果愈好。
• 质量控制
  • 血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快，血膜愈厚，反之则愈薄
  • 血细胞比容增高、血液黏度较高时，应采用小血滴、小角度、慢推；血细胞比容减低、血液较稀时，应采用大血滴、大角度、快推。