导图社区 蛋白质与氨基酸思维导图
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第14章DNA的生物合成读书笔记
蛋白质和氨基酸含量测定
概述
组成
基本结构单位:氨基酸
食品中作用:食品的重要质量指标、重要氮源之一
蛋白质分析的意义
凯氏定氮法
原理
样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出,而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏,使氨蒸出,用硼酸吸收后再用标准酸滴定,根据标准酸消耗量可计算出样品中蛋白质含量。
步骤
消化:样品前处理后,加入浓硫酸、硫酸钾(提高沸点)、硫酸铜(催化剂、终点指示剂)
蒸馏与吸收:加碱(NaOH,400g/L),蒸出氨,用硼酸(20g/L)吸收
滴定:0.05mol/L标准酸或硫酸(溶液由蓝色变微红色)
数据处理(粗蛋白)
注意事项
结果为粗蛋白
适合F值
硫酸要过量,防止氨过量
蛋白质快速测定方法
双缩脲法
两份脲在180℃下缩合为双缩脲,在碱性环境中与硫酸铜反应,生成紫红色配合物
标准蛋白质溶液
考马斯亮比色法
考马斯亮G-520与蛋白质结合,形成有色复合物,在595nm处有最大吸收峰
标准溶液:牛血清蛋白标准液
紫外分光光度法
蛋白质快速测定仪
质谱检测法
近红外光谱检测法
氨基酸的定量测定
甲醛滴定法
氨基酸含有酸性的-COOH和碱性的-NH2,它们互相作用使氨基酸成为中性内盐,当加入甲醛时,-NH2与甲醛结合,其碱性消失,使-COOH基显示出酸性,可用NaOH标液滴定。
电位滴定法
根据氨基酸的两性作用,加入甲醛以固定氨基的碱性,使羧基显示出酸性,将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同时插入被测液中构成电池,用NaOH标液滴定,依据酸度计指示的pH值判断终点。
茚三酮比色法
茚三酮→水合茚三酮→还原茚三酮+水合茚三酮→蓝紫色化合物