导图社区 中级职称检验-临床化学
这是一篇关于中级职称检验-临床化学的思维导图,总结了脂代谢及高脂血症、肾功能、肝胆疾病、糖代谢素乱及糖尿病检查等。
编辑于2023-12-21 00:20:53临床化学
绪论
分光光度计法
T
吸光率
A
吸光度
离子选择电极法
K
缬氨霉素膜电极
不影响的因素
标本稀释度
生化分析仪样本量和实际量的设置
可以更改试剂盒说明书的设置
PH计中的电极
玻璃电极
自动化应用
不包括
准确度最高
固定时间法
有助于解决
特异性问题
准确检测微量元素的方法
原子吸收分光光度法
酶类活性的检测方法
紫外可见分光光度法
谷草转氨酶的首选方法
连续监测法
光源能量降低对单色光影响最大的波长
340nm
糖代谢紊乱及糖尿病检查
糖代谢简述
糖的无氧酵解途径
过程
葡萄糖磷酸转化成葡萄糖-6-磷酸
不可逆
已糖激酶
果糖-6-磷酸转化成1,6-果糖二磷酸
不可逆
6磷酸果糖激酶
需要Mg(镁)和ATP
磷酸烯醇式丙酮酸转化成烯醇式丙酮酸
不可逆
丙酮酸激酶
1,6果糖二磷酸折半分解
醛缩酶的催化下
分解成2分子磷酸丙糖
磷酸二羟丙酮
3-磷酸甘油醛
在磷酸丙糖异构酶下可相互转换
1mol六碳糖裂解为2mol三碳糖
1分子葡萄糖可生成
2分子的ATP
糖分解成乳酸
体内糖代谢最主要的途径
参与无氧酵解的酶
丙酮酸激酶
1,3-二磷酸甘油酸及磷酸烯醇式丙酮酸的代谢物
提供高能磷酸键
使ADP生成ATP
丙酮酸不会堆积的原因
可为3-磷酸甘油醛脱氢反应中生成的NADP+的受氢体
生理意义
红细胞获得
没有线粒体所有无法有氧氧化
糖的有氧氧化途径
过程
第一阶段
糖酵解
第二阶段
线粒体内
丙酮酸转化为乙酰COA
通过丙酮酸脱氢酶
第三阶段
线粒体内
三羧酸循环(TCA循环)
乙酰CoA和草酰乙酸
缩合成柠檬酸到草酰乙酸的再生
一次循环过程
唯一的底物水平磷酸化
琥珀酰CoA生成琥珀酸的反应
特点
柠檬酸的合成到α-酮戊二酸的氧化过程
不可逆
整个过程不可逆
在循环转运时
其中每一成分既无净分解也无净合成
移去和增加某一成分
影响反应速度
氧化乙酰CoA的效率取决于草酰乙酸的浓度
每次循环产生的NADH和FADH2都可通过相应的呼吸链
产生ATP
ATP含量增加的同时
糖酵解受抑制
巴斯德效应
Pasteur效应
有氧氧化抑制糖酵解
限速步骤
异柠檬酸脱氢酶
别构酶
ADP
激活剂
ATP和NADH
抑制剂
线粒体中有两种呼吸链
NADH呼吸链
琥珀酸呼吸链
彻底氧化成水和二氧化碳
生理意义
糖氧化功能的主要方式
供给ATP36-38个
每摩尔葡萄糖氧化释放的能力为
2840KJ
脂肪酸合成原料乙酰CoA从线粒体转移到胞质的途径
柠檬酸-脂肪酸循环
糖原的分解
肝糖原
含有葡萄糖-6-磷酸酶
水解生成葡萄糖
肌糖原
缺乏葡萄糖-6-磷酸酶
仅能通过糖酵解
含糖原总量最高的器官
主要化学键
1,4-糖苷键
糖原的合成、分解反应
开始部位
非还原性末端
合成时
每增加一个葡萄糖单位
消耗高能磷酸键
2个
调节的主要方式
磷酸化和去磷酸化调节
磷酸化酶是糖原分解的限速酶
磷酸化酶加上磷酸后具有活性
磷酸化
磷酸化酶去掉磷酸为无活性
去磷酸化
糖原贮存病
最常见的
由于酶系统先天性缺陷所致
糖原在细胞中过多贮存或糖原分子异常
I型
Von Gierke病
最常见
III型
缺少
脱支酶
IV型
缺少
分枝酶
糖异生
非糖物质转变成葡萄糖的过程
丙酮酸、甘油、乳酸、生糖氨基酸
软饼干
ruan
ru
乳酸
an
氨基酸
饼
丙酮酸
干
甘油
促进糖异生作用的物质
ATP
单糖合成的唯一途径
是糖酵解的逆反应
已糖激酶、6磷酸果糖激酶、丙酮酸激酶
不可逆,需有替代酶
已糖激酶
葡萄糖-6-磷酸酶
6磷酸果糖激酶
果糖-1,6-二磷酸酶
丙酮酸激酶
丙酮酸羟化酶、磷酸烯醇式丙酮酸激酶
过程
乳酸、氨基酸、丙酮酸
通过丙酮酸羟化酶
草酰乙酸
通过磷酸烯醇式丙酮酸激酶
磷酸烯醇式丙酮酸
Cori循环
肌肉内的葡萄糖经糖酵解生成乳酸
乳酸经血液循环至肝内糖异生为葡萄糖后供外周组织利用
主要器官
肝脏
磷酸戊糖途径
6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏时
磷酸戊糖途径被抑制,导致磷酸戊糖缺乏
红细胞容易遭到氧化剂的破话
易发生溶血性贫血
蚕豆病(蚕豆是重要的氧化剂)
关键酶
6-磷酸葡萄糖脱氢酶
特有的物质
6-磷酸葡萄糖酸
在胞质中进行
提供5-磷酸核糖
用于核苷酸和核酸的生物合成
糖代谢与核糖的联系
提供2分子NADPH形式的还原力
参与多种代谢
合成脂酸、胆固醇
脂酸如果+甘油变成甘油三酯
所以糖吃多了会发胖
维持谷胱甘肽的还原能力
抗氧化
糖醛酸途径
生成有活性的葡糖醛酸(UDP葡糖醛酸)
生物转化中重要的结合剂
与代谢产物(胆红素、类固醇等)、药物、毒物结合
葡糖醛酸的供体
葡糖醛酸
蛋白聚糖的重要组成成分
如透明质酸、肝素、硫酸软骨素
合成糖原时
葡萄糖的直接供体
生成NADPH+H+
各血糖代谢途径的中间代谢产物
6-磷酸葡萄糖
血糖的来源和去路
血糖的来源
糖类消化吸收
血糖最主要的来源
肝糖原
短期饥饿
糖异生
长期饥饿(饥饿1天)
血糖的去路
氧化分解
为细胞代谢提供能量
主要作用
合成糖原
以糖原的形式储存
转化成非糖物质
转化为氨基酸
合成蛋白质
血糖和尿糖
空腹血糖
3.89-6.11mmol/L
尿糖
超过8.9-10mmol/L
尿液中出现葡萄糖
血糖增高性糖尿
血糖>8.9-10mmol/L
疾病
糖尿病
甲状腺功能亢进
甲状腺激素
肾上腺皮质功能亢进(库欣综合征/Cushing病)
皮质激素
肢端肥大症
生长激素
造成血糖升高的原因
血糖正常性糖尿
血糖3.89-6.11mmol/L或<8.9mmol/L
临床意义
近端肾小管重吸收葡糖糖能力异常
原发性肾性糖尿(家族性糖尿)、继发性肾性糖尿(肾病综合征、妊娠后期、慢性肾小球肾炎)
血糖浓度的调节
激素的调节作用
降低血糖
胰岛素
β细胞产生
促进肌肉、脂肪组织摄取葡萄糖
促进糖原合成
促进糖转变成脂肪、抑制脂肪分解
加速糖的氧化分解
阻止糖异生
升高血糖
胰高血糖素
最重要的激素
通过提高靶细胞内CAMP含量来调节
糖皮质激素、生长激素
刺激糖异生作用
肾上腺素、甲状腺素
肝的调节作用
维持血糖恒定
关键器官
获得能量的主要代谢途径
脂肪酸氧化
双向调控
降血糖
肝糖原的合成
升血糖
肝糖原的分解
糖异生
糖的氧化
不能把葡萄糖转化为其他单糖
高血糖症和糖尿病
高血糖症
>7.0mmol/L
原因
生理性
高糖饮食后1-2h、运动、紧张
病理性
各型糖尿病
胰岛素减少或功能不足
甲状腺功能亢进
甲状腺激素升高
肾上腺皮质功能亢进(库欣综合征)
糖皮质激素升高
肢端肥大症
生长激素升高
疾病应激状态
颅脑外伤、颅内出血等引起颅内压升高
肾上腺素升高
脱水
血浆呈高渗状态
高热、呕吐
不会出现
胃切除术
糖尿病分型
DM
糖、脂肪、蛋白质、水电解质代谢紊乱的临床综合征
临床表现
三多一少
多食、多饮、多尿、体重减轻
水肿
不是黏液性水肿
高脂血症
微血管神经病变
胰岛α细胞
胰高血糖素
分型
I型糖尿病
自身免疫性疾病
胰岛β细胞毁坏
细胞介导的自身免疫损伤
特点
好发青少年
存在自身抗体
胰岛素表面抗体(ICAs)
胰岛素抗体(IAA)
胰岛细胞抗体(ICA)
胰岛素绝对不足
胰岛素或C肽绝对缺乏
治疗依靠胰岛素
多基因遗传易感性
HLA-DR3
DR4
II型糖尿病
成年发病DM
不能像正常胰岛β细胞产生正常的两相脉冲式分泌
仅产生第二相的分泌
胰岛素抵抗
肝脏和外周脂肪组织、肌肉等对胰岛素的敏感性降低
糖刺激后
胰岛素延迟释放
胰岛素分泌障碍
后期胰岛累死了
特点
肥胖的中老年人
胰岛素绝对值不低
相对不足
无自身抗体
对胰岛素治疗
不敏感
辅助诊断II型糖尿病是否进行性发展为I型糖尿病
谷氨酸脱羧酶自身抗体
诊断标准
有糖尿病症状+随机血糖≥11.1mmol/L
OGTT
2h≥11.1mmol/L
口服75g无水葡萄糖的水溶液
空腹血糖(FVPG)≥7.0mmol/L
空腹
禁止热卡摄入至少8h
糖尿病代谢紊乱
急性变化
分解甘油三酯和脂肪酸
合成酮体
因为胰岛不足
所以无法通过葡萄糖获取能量
分解脂肪细胞获取能量
产生酮体
酮体进入外周血导致酸中毒
慢性变化
微血管和小血管病变
糖尿病视网膜病变
糖尿病白内障
山梨醇脱氢酶减少
山梨醇不能代谢而溢出晶状体
导致蛋白质沉淀
糖尿病肾病
大血管病变
心血管
脑血管病
末梢神经病变
尿微量白蛋白
糖尿病肾病早期诊断的较好指标
糖尿病急性并发症
低血糖
瞳孔散大、心跳快、出汗、神志模糊、昏迷
血糖<2.78mmol/L
尿糖
阴性
糖尿病酮症酸中毒
轻度脱水、Kussmaul呼吸(深大呼吸)、呼吸烂苹果味
血糖16-33.6mmol/L
尿糖(++++)
酮体(+)
非酮症性高血糖高渗性糖尿病昏迷
明显脱水、血压下降、有神经系统体征、多昏迷
血糖>33.6mmol/L
尿糖(++++)
酮体(-)
乳酸酸中毒
面色潮红、呼吸快、血压低、意识障碍、昏迷
乳酸>5mmol/L
AG>18mmol/L(阴离子间隙)
白细胞增高
高血糖引起的高渗利尿
血细胞容(HCT)升高
血细胞比容
男性42%-49%
女性37%-48%
都在50%以下
新生儿47%-67%
实验室检查
空腹血糖
至少8小时
参考值
3.89-6.11mmol/L
餐后2小时
口服75g无水葡萄糖或100g馒头
参考值
<7.8mmol/L
血糖测定
样本
血浆
氟化钠
防止糖酵解
最好样品
血清
立刻分离
全血比血浆或血清低
12%-15%
1小时内分离
室温下
每小时下降
5%-7%
静脉血<毛细血管<动脉血
方法
酶法
葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法(GOD-POD)
尿糖也是这个方法
第一步
GOD
只有葡萄糖反应
第二部
过氧化物酶(POD)
有还原性物质
结果会偏低
显色底物
4-氨基安替比林(4-AAP)
红色
邻联甲苯胺(OT)
蓝色
终点法
波长
505nm
最广泛的常规方法
原推荐方法
酶促偶联法对血糖测定准确性高于缩合法
酶的特异性、灵敏度高
线性测定范围宽
已糖激没(HK)法
公认的参考方法
最特异的
波长
340nm
葡糖糖氧化酶-氧速率(GOD-OR)法
电极法/糖电级/酶电级
检测原理
是一个东西
尿糖测定
简单的过筛试验
不能作为诊断依据
OGTT
了解胰岛β细胞功能和机体对糖的调节能力
方法
75g葡萄糖溶于250ml的温开水
5min内饮入
妊娠孕妇
用量100g
方法
检测30min、60min、90min、120min血糖水平
诊断
隐形糖尿病
无糖尿病症状
随机或空腹血糖异常者
无糖尿病症状
一过性或持续性糖尿
无糖尿病症状
明显糖尿病家族史
有糖尿病症状
随机或空腹不够诊断标准
妊娠期、甲状腺功能亢进、肝病、感染、出现糖尿者
分娩巨大胎儿的妇女或有巨大胎儿史的个体
不明原因的肾病或视网膜病
糖化蛋白
葡萄糖通过非酶促糖基化反应与蛋白质结合
不要酶
与血糖浓度呈正比
蛋白质降解后才能释放
糖化血红蛋白(GHb)
红细胞寿命120天
半衰期60天
反应6-8周(2-3个月)
血糖控制水平
参考方法
高压液相色谱法(HPLC)
HbA1c
4%-6%
糖尿病治疗
<7%
临床意义
红血病、贫血、慢性失血、尿毒症者
红细胞寿命缩短
导致GHb降低
血红蛋白增加
真性红细胞增多症
导致GHb增加
糖化血清蛋白
主要测定糖化血清白蛋白/清蛋白
白蛋白=清蛋白
清白
白蛋白
半衰期17-19天
近期控制的灵敏指标
比糖化血红敏感
测定方法
硝基四氮唑蓝法
胰岛素释放实验
测定空腹、进食后的胰岛素水平
胰岛β细胞
前胰岛素原
胰岛素原
在胰岛β细胞内切割
等分子的胰岛素+C肽
分泌入血的
胰岛α细胞
胰高血糖素
胰岛素
由a、b两条肽链通过二硫键相连而构成的蛋白质
作用机制
与细胞膜上特殊蛋白受体结合
C肽
无胰岛素活性
胰岛素原
有3%的胰岛素活性
参考值
空腹胰岛素
4.0-15.6U/L(化学发光法)
17.8-173pmol/L(电化学发光法)
C肽
250-600pmol/L(电化学发光法)
临床意义
不属于诊断标准
胰岛细胞瘤
血糖明显下降
C肽释放实验
优点
与外源性胰岛素无抗原交叉
用胰岛素治疗的患者
了解胰岛β细胞的分泌功能
首选C肽
低血糖症
生理低限以下<2.78mmol/L
交感神经
兴奋
心慌、手抖、出汗等
中枢神经系统
异常
对低血糖最敏感的
脑组织
因为不储存糖,随拿随用
分类
空腹低血糖
反复出现
胰岛β细胞瘤(胰岛素瘤)
反应性低血糖
适当刺激后诱发
进食后血糖就低
特发性餐后(功能性)低血糖
餐后低血糖症状
无昏迷和癫痫
半小时自行恢复
OGTT
空腹和1h血糖正常
2-3h过低
以后恢复正常
饥饿试验
耐受
无低血糖发作
胰岛素水平及胰岛素/血糖
正常
低糖、高蛋白饮食
有效
无糖尿病、胃肠手术等病史
营养性低血糖
II型糖尿病或糖尿量受损伴有的低血糖
脂代谢及高脂血症
血脂
游离胆固醇酯
胆固醇酯
磷脂
甘油三酯
糖酯
游离脂肪酸
甘油三酯
生物合成的第一个中间产物
磷酸酯
肝、脂肪组织及小肠
肝脏的合成能力强
脂肪动员
限速酶
甘油三酯脂肪酶
存储在脂肪细胞中的脂肪被脂肪酶逐步分解
游离脂肪酸及甘油释放入血
供其他组织氧化利用
生成过程
肝细胞及脂肪细胞
甘油二脂途径
甘油三酯
葡萄糖
糖酵解
3-磷酸甘油
转酰酶作用下+2分子脂酰CoA
磷脂酸
磷脂酸磷酸酶及转酰酶
甘油三酯
胆固醇
最直接前体(原料)
乙酰CoA
脂类物质化合物
辅酶Q、磷酸酯、维生素E、脂蛋白
分型
中性脂肪
总胆固醇(TC):游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)(70%) 甘油三酯(TG)
脂溶性
类脂
磷脂(PL)、糖脂(GL)、游离脂肪酸(FFA)、固醇
水溶性
脂蛋白
脂溶性不能直接进入组织细胞
必须与特殊蛋白结合
组成亲水性的球状巨分子

超速离心法
按密度来分的
脂类越多、密度越低
甘油三酯越多密度低
脂类的含量由多到少的排列
CM、VLDL、IDL、LDL、HDL
密度最低(上层)
CM
原理
根据颗粒在重力场中移动的速度和颗粒的密度大小及形态有关
又与重力场的强度和特体的粘度有关
作用
分离亚细胞成分
分离大分子蛋白质
电泳法
电荷量大小及分子量大小
蛋白质是负电荷,从阴极向阳极泳动
脂类燃料
苏丹黑B或油红O
进行预染
从负极到正极
CM、LDL、VLDL、HDL
如果IDL多了
宽β
迁移速度最快的
HDL
载脂蛋白(Apo)
功能
构成并稳定脂蛋白的结构
维持脂蛋白的物理特征
让其变成水溶性
脂蛋白受体的配体
参与脂代谢相关酶活性调节
酶活性的调节
ApoA I
LCAT(卵磷脂胆固醇脂酰转移酶)辅助因子、激活活性
代表HDL水平,正相关
ApoA II
抑制LCAT活性
ApoC II
LPL(脂蛋白脂肪酶)辅助因子、激活活性
促进CM和VLDL分解代谢
ApoC III
抑制LPL活性
Apo(a)
抑制纤溶酶活性
以为与纤溶酶原结构相似产生竞争
ApoB
代表LDL水平,正相关
方法
免疫透射比浊法
常用方法
脂代谢常规检查项目
不包括
ApoE
脂蛋白代谢
乳糜颗粒(CM)
从食物中摄取TG
小肠粘膜合成CM
淋巴入血
运输外源性TG
TG含量最高
水解的关键酶
LPL(脂蛋白脂肪酶)
清除器官
肝脏
空腹12h
无CM
VLDL、IDL、LDL
三姐妹,逐渐形成的过程

肝脏合成VLDL
含TG
经LPL一部分变成IDL
含TG、CE
经HTGL/HL(肝脏脂酶)变成LDL
含CE
向外周组织输送CE
VLDL
肝脏合成
含量最多的
TG
运输内源性TG
LDL
将内源性胆固醇转运到外周组织
血浆中胆固醇含量
最多
糖尿病合并脂代谢异常
LDL增高
肾病综合征
LDL增高
因为患者三高一低
包括高血脂
有跨膜结构域
对氧化性LDL有亲和力
可特异识别含ApoB或ApoE的脂蛋白
LDL-C计算法
Friedewald公式
LDL-C=TC-(HDL-C+TG*0.2)
条件
空腹血清不含CM
TG浓度在4.6mmol/L以下
III型高脂蛋白血症除外
与动脉粥样硬化
正相关
HDL
过程

小肠与肝细胞合成
未成形HDL
从外周组织摄取游离脂肪酸
在LCAT(卵磷脂胆固醇酯酰转移酶)合成HDL
含CE
运送到肝脏代谢
功能
胆固醇逆向转运
与动脉粥样硬化
负相关
总结
更准确的预报冠心病发生
TC(总胆固醇)
HDL-C
糖尿病合并脂代谢异常表现
LDL增高
Lp(a)
独立的脂蛋白
与LDL结构相似
含载脂蛋白a
Apo(a)和纤溶酶原有同源性
延缓纤维蛋白的破坏
与血栓形成有关
增加动脉粥样硬化和动脉血栓的危险
水平个体之间变异大
水平与人种有关
不能转化为其他脂蛋白
检验内容
标本
禁食12h
24h前不饮酒、不做剧烈运动、不处于应激状态
前2周保持平时的饮食习惯
血脂或脂蛋白异常
间隔2周复查一次
总胆固醇(TC/CHOL/CHO)
包括
胆固醇酯(CE)、游离胆固醇(FC)
合成器官
肝脏
限速酶
羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG·CoA还原酶)
功能
胆汁酸的唯一前体
胆固醇代谢变成胆汁酸
代谢的主要终产物
结合胆汁酸
类固醇激素的前体
性激素、肾上腺皮质激素
维生素D3的前体
参考值
合适水平
<5.18mmol/L
升高
>6.22mmol/L
O、我要发、622
临床意义
升高
梗阻性黄疸
糖尿病
肾病综合征
甲状腺功能低下
慢性肾功能衰竭
妊娠末三个月
产后恢复
降低
肝硬化
恶性肿瘤
营养吸收不良
巨细胞性贫血
女性月经期
甘油三酯(TG)
参考值
合适水平
<1.7mmol/L
升高
>2.2mmol/L
滚(G)、小气(1.7)太二(2.2)
酶法测定
测定是血清中的
游离甘油和甘油三酯
LDL-C
参考值
合适水平
<3.37mmol/L
升高
大于4.14mmol/L
低(L)3下4
HDL-C
参考值
1.04-1.55mmol/L
高(H)要(1)要我(1.5)
检测方法
高速离心法
血清静置试验
CM
表面“奶酪”
VLDL、IDL
浑浊
带TG的都浑浊
LDL
清澈
高脂蛋白血症分型
动脉粥样硬化(AS)
致病因素
高脂血症、高血压、吸烟、性别、内分泌
早期病变
最早进入动脉内膜的细胞
巨噬细胞
同型半胱氨酸(HCY)增加
生成同型半胱氨酸内脂化合物
加速动脉粥样硬化
与LDL正相关
糖化LDL、B型LDL、氧化LDL、乙酰LDL
不包括A型LDL
胆固醇在外周组织内沉积
抗AS因素
HDL
高脂蛋白血症
CM、VLDL、LDL中的一种或几种浓度过高
WHO分型
I
IIa
IIb
III
IV
V
总结
从V往上与高速离心法一样
最上面是CM
IIb和V多一个VLDL
IIa型
LDL受体异常
IIb型
病因不明确
脂肪肝
主要原因
肝内脂肪运出障碍
血浆蛋白质
蛋白质
血浆中含量最多
组成蛋白质的氨基酸在自然界
无差异
不在肝内代谢的氨基酸
支链氨基酸
亮氨酸
异氨酸
缬氨酸
支链氨基酸/芳香族氨基酸的比值
3.0-3.5
苯丙氨酸二羧基氨基酸
所利用的载体运转蛋白
酸性氨基酸载体
除γ球蛋白以外(不包括CRP)
肝脏几乎合成所有的蛋白质
γ球蛋白就是免疫球蛋白
功能和临床意义
前白蛋白(PA)
肝脏合成
半衰期
2-5天
比白蛋白短
作为组织修补材料
参考值
200-400mg/L
早期反应敏感
反应肝脏合成功能最敏感的指标
在醋酸纤维素薄膜电泳中
显示在清蛋白的阳极侧
反应营养不良
比白蛋白敏感
运载甲状腺素(T3的亲和力大)、维生素A
急性炎症时
水平下降
清蛋白/白蛋白(ALb)
含量最多的蛋白质
57%-68%
肝脏合成功能评价指标
不可通过肾小球
功能
营养蛋白
个体营养状态的指标
维持血液PH值
缓冲酸碱物质
血浆PH:7.35-7.45
载体蛋白
运送许多脂溶性或水溶性差的物质
胆红素、胆汁酸、前列腺素、类固醇、金属离子、药物(青霉素)
维持胶体渗透压
在血液中胶体就是白蛋白
白蛋白高,渗透压高,
把细胞的水拉到血管中
白蛋白<28g/L
水肿,血容量下降
组织修补材料
评价肝功能合成功能
特点
等电点(PI)
4.7-4.9
<PH
带负电荷
带负电荷
能结合Ca、Mg、Cu等正离子
半衰期
20天
2-3周
盐析法沉淀蛋白
蛋白质都有水化膜并带有负电荷
所以会相互排斥,疏水作用
加盐后破坏水化膜与负电荷
之后就会相互聚集产生沉淀
常规方法
溴甲酚绿法(BCG)
蛋白质在4.2的缓冲液中带正电荷
与阴离子燃料溴甲酚绿结合
在628nm波长吸收
时间30s
染料结合法
参考值
35-53g/L
临床意义
升高
严重脱水、休克、饮水不足
降低
合成不足
严重肝病
吸收不足
营养不良或吸收不良
丢失
肾病综合征
三高一低
高水肿、高脂血症、高蛋白尿 低蛋白血症
严重烧伤、急性失血、组织炎症
分解代谢增加(消耗性疾病)
恶性肿瘤、甲亢、重症结核
分布异常
门静脉高压腹水
肝硬化-门静脉高压-白蛋白从血管漏出-白蛋白降低-胶体渗透压降低-腹水
移动性浊音
结合珠蛋白/触珠蛋白(Hp)
能与自由形式的血红蛋白结合
结合能力1000mg/L
超过就形成血红蛋白尿
结合后体积变大
不可通过肾小球
保护血红蛋白
保护铁
临床意义
血管内溶血
下降
因为给用完了
α2巨球蛋白(α2-MG/AMG)
分子量最大的蛋白质
临床意义
肾病综合征
升高
蛋白丢失,导致胶体渗透压升高,造成水肿
为平衡,α2巨球蛋白增多,因为太大漏不出去
属于代偿机制
铜蓝蛋白/铜氧化酶(Cp/CER)
含铜的糖蛋白
呈蓝色
α2-球蛋白区带
具有铁氧化酶作用
能将Fe2+氧化为Fe3+
协助诊断Wilson病(肝豆状核变性)
角膜色素环本病的重要体征
转铁蛋白(TRF/Tf)
临床意义
缺铁性贫血
Tf
升高
转铁蛋白饱和度
下降
铁粒幼细胞贫血
Tf
正常
转铁蛋白饱和度
上升
分子量
79500
铁蛋白
恶性肿瘤患者
伴随肿瘤抗原长高的蛋白质
铁蛋白
β2微球蛋白
存在所有有核细胞表面
血液、尿液、脑脊液
小分子蛋白质
自由通过肾小球
被近曲小管重吸收
临床意义
尿β2微球蛋白
反应肾小管重吸收功能
肾移植后的排斥反应
血β2微球蛋白
反映肾小球滤过功能
受损会升高
炎症或肿瘤
脑脊液β2微球蛋白
中枢神经系统白血病
升高
C反应蛋白(CRP)
γ球蛋白
但由肝脏合成
例外
特点
五个单体聚合而成
与肺炎链球菌的C多糖结合
急性炎症
剧增
心血管
最强有力的预测指标
CRP与超敏CRP是一个东西
超敏CRP检测下限0.1mg/L
检测方法
血清总蛋白(TP)
白蛋白+球蛋白
清蛋白与球蛋白比值=A/G:1-2/1
方法
双缩脲比色法
推荐、常用、首选方法
有色物质
紫红色
波长546nm
凯氏定氮法
参考方法
最经典的方法
1g氮=6.25g蛋白质
蛋白质平均含氮量
16%
酚试剂法
利用色氨酸和酪氨酸残基
与试剂发生反应
有色物质
蓝色
最大吸收峰
745-750nm
参考值
60-80g/L
总留疤(总68) 留疤是用总蛋白质留的
临床意义
升高
血液浓缩
合成增加
球蛋白合成增加
多发性骨髓瘤
巨球蛋白血症(IgM)
清蛋白
溴甲酚绿法
参考值
35-53g/L
为了清白扇我到我扇
血清蛋白电泳分析
醋酸纤维素薄膜电泳、琼脂凝胶电泳
PH为8.6的巴比妥缓冲液
蛋白质都带负电荷
从正极到负极
白蛋白
α1球蛋白
α2球蛋白(α2巨球蛋白)
β球蛋白(β2微球蛋白)
γ球蛋白(免疫球蛋白)
最快的
白蛋白
仅有单一蛋白质的区带
白蛋白
最深的
白蛋白
最慢的
γ球蛋白
最宽的
最浅的
α1球蛋白
主要是HDL
AFP
α1-抗胰蛋白酶
最主要的蛋白质
C3、C4
β-球蛋白区
临床意义
肝硬化型
慢性活动性肝炎、肝硬化
ALb降低
γ增高
A/G倒置
出现β-γ桥

肝脏纤维增生
IgA增高
肾病性
急慢性肾炎、肾病综合征、肾衰
Alb降低
α2和β增高

A/G倒置
多发性骨髓瘤
主要为IgG或IgA
在β-γ之间出现狭窄的区带
M区带

定量分析
灵敏度最高
化学发光法
急性时相反应蛋白(APR)
急性心梗、外伤、炎症、手术、肿瘤
正向
有问题
升高
α1抗胰蛋白酶(AAT)、α1酸性糖蛋白(AAG)、结合珠蛋白(Hp)、铜蓝蛋白(CER)、C4、C3、纤维蛋白原、C反应蛋白
负向
有问题
下降
前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白(可作为营养不良的检测指标)
背这个
不属于
α2-MG(α2-巨球蛋白)
β2-MG(β2-微球蛋白)
酶学
形成酶-底物复合物时
酶的构象发生变化
分类
特异性酶
组织细胞合成
释放到血浆中发挥催化作用的酶
胆碱酯酶(ChE)
脂蛋白脂肪酶(LPL)
铜氧化酶/铜蓝蛋白(CP/CER)
非特异性酶
浓度很低
无活性
转氨酶
催化氨基在氨基酸与α-酮酸间转移的酶
外分泌酶
消化腺、其他外分泌腺合成
释放到肠内发挥作用
胰淀粉酶
胰脂肪酶
胰蛋白酶
胃蛋白酶
细胞酶
细胞内合成
在细胞内发挥作用
生理变异或病理机制
生理变异
性别
CK和GGT
男性高于女性
年龄
碱性磷酸酶(ALP3)
与骨生长有关
1-5岁
10-15岁
绝经期后
进食
酗酒
GGT升高
慢性酒精中毒
最敏感指标
运动
剧烈运动
CK、LD、AST
升高
妊娠或分娩
妊娠9个月
ALP达到峰值
ALP可存在于胎盘中
病理机制
酶合成异常
肝功能异常
胆碱酯酶(ChE)
假性胆碱酯酶(pChE)
细胞酶释放
细胞内外浓度差异
酶在细胞内的定位和存在
ASTm(m-AST)
线粒体AST
在细胞器中
肝细胞病变严重、细胞坏死
ASTS(c-AST)
胞质AST
肝损伤
早期
CK先释放
损伤小
LD后释放
无聚体
损伤严重
活性测定方法
定时法(两点法)
连续监测法(速率法)
最常用、最准确
活性影响因素
酶活性高低
底物浓度
准确且足够大
PH
7.4
温度
37℃
酶反应动力学
米氏方程
V=Vmax*[S]/Km+[S]
V
任意时刻点的反应速度
Vmax
酶被底物饱和时的最大反应速度
[S]
底物浓度
Km
米氏常数
只与酶的结构、底物有关
与酶浓度无关
恒定量
对有多个底物的酶其Km值不同
对同一底物的不用酶Km值不同
表示酶的亲和力
亲和力越大
Km值越小
Km值最小的
天然底物
Km等于Vmax一半时候
Km=[S]
Km等于80%Vmax时候
Km=0.25[S]
单底物酶促反应
当[S]<<Km时
反应速度随底物浓度的加快而加快
当[S]>>Km时
V=Vmax
[S]最好是Km的
10-20倍
进程曲线
延滞期
在过量的底物存在下,底物与酶结合启动时期
初始速率比较慢
反应加快并达到最大
线性期
恒定速率
反应速度不受底物的影响
零级反应期
酶活性的最佳时期
非线性期
速度明显下降
速率与底物呈正比
一级反应期
酶活性浓度单位
试验规定条件下
每分钟催化1umol底物所需的酶
样品与试剂的体积比
1:10
考虑检测灵敏度与测定上限
添加稀释水
稀释水的量在复溶试剂时必须扣除
单位
U/L
Katal单位
每秒内催化1mol底物的酶
国际单位制(SI制)
1U=16.67nKatal
连续监测法
V=底物+血清
ε=摩尔吸光系数=6220
题目给
v=血清量
L比色杯光经
题目给
酶抑制剂
根据在酶分子上结合位置的不同分类
竞非反
左升右降中不变斜对称
工具酶
作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性浓度的酶
多为氧化还原酶
酶偶联反应
第一步
辅助反应
一级反应
要测定的酶反应的
第二步
指示反应
零级反应
工具酶反应的
利用脱氢酶催化的指示体系
波长选择340nm
NAD(P)H在340nm具有特殊性光吸收
NAD(P)+在340nm没有特殊光吸收
子主题
采集要点
不能溶血
影响最大的
LDH
及时分离血清
防止细胞内酶入血
用血清标本
及时测定
反正蛋白变性
低温保存
LDH除外
冷变性,冷冻时会被破坏
同工酶
分子结构、理化性质、免疫学性质不同
但催化相同化学反应的
一组酶
分析方法
电泳法
分布有组织差异和细胞定位差异
同工酶
可对疾病进行诊断和鉴别诊断
酶分类
单纯酶
只有酶蛋白
结合酶(全酶)
酶蛋白+辅因子(辅基+辅酶)
辅因子
与酶功能直接有关的
如转氨酶的辅因子
磷酸吡哆醛(维生素B6)
合成后才具有催化活性
辅基
与酶蛋白结合牢固
透析不能分离
好基友不分离
辅酶
与酶蛋白结合疏松
透析能分离
结合迅速
不专一
在负反应的酶活性测定中
可设置底物耗尽值
规定一个吸光度下限
低于此限,底物太少
如测定杯的吸收率超过ABN(异常吸收率)
苯丙氨酸羟化酶缺陷
儿童智障
延胡索酸乙酰乙酸水解酶缺陷
I型酪氨酸血症
体液平衡紊乱
水的分布
体液(60%)
细胞内液
2/3(40%)
细胞内的水
细胞外液
1/3(20%)
细胞间夜
15%
血浆
5%
随年龄的增长体液的总量
减少
影响因素
血浆与细胞间夜
胶体渗透压
白蛋白构成
白蛋白高=渗透压高
高
可将细胞间液拉到血管中
间液与血浆
细胞间液与细胞内液
晶体渗透压
电解质(钠、氯、葡萄糖、尿素)
Na在外液
渗透压高
水去往外液
细胞之间(间液与内液)
内液
阳离子
K
阴离子
无机磷酸根
外液
阳离子
Na
阴离子
Cl、HCO3
维持细胞外渗透压的主要离子
Na、Cl
浓度差
Na-K泵
Na
130-150mmol/L
K
3.5-5.5mmol/L
5.5我的我,我就是家,家在里面
脱水
细胞外液减少
血容量不足
细胞外液就是血浆
与钠浓度变化
高渗性
Na>150
内液明显减少
因为都吸到血浆里来了,然后通过尿汗等流失
组织间液减少
大量出汗、尿崩症、渗透性利尿、呼吸道蒸发
等渗性
Na130-150
内液正常
胃肠道液体丢失
呕吐
丢胃液
腹泻
丢肠液
外液减少
低渗性
Na<130
内液增多或轻度减少
外液明显减少
体液丢失后只补水没补盐
高渗低渗是从血浆的角度来说的
内液高少低多等不变
钾
功能
参与酸碱平衡
维持细胞内液的渗透压
维持肌肉、神经的应激性
增强神经肌肉兴奋性
降低心肌兴奋性
高钾会引起心脏骤停
参与合成代谢
影响细胞内外分布的因素
糖代谢
脂肪代谢
需要钾的参与
酸碱平衡
肾和呼吸功能
细胞内钾占总量的
98%
血浆中钾占总量的
1.5%
代谢
肠道吸收
肾脏、粪便、皮肤排泄
影响血钾的因素
生理性
肾脏
醛固酮
保钠排钾
促进肾小管Na、K交换的主要激素
细胞内外转移
Na-K-ATP酶
胰岛素
血糖浓度
葡萄糖进入细胞的同时会带一个K离子进入
拉一个家走
病理性
降低
呕吐
随着胃液一起流失
增高
组织破坏
高热
血pH
H-K交换
pH酸性
H+增加
代偿
H+进入细胞内
K+交换出来
K
升高
pH碱性
H+减少
代偿
H+进入血液
K+交换入细胞内
K
降低
临床意义
低钾血症
<3.5mmol/L
摄入不足
丢失过多
严重腹泻、呕吐、出汗
应用肾上腺皮质激素
包括醛固酮(保钠排钾)
利尿剂
使用胰岛素
高钾血症
>5.5mmol/L
输入库存血
血时间太长、细胞中的K释放出来
排泄障碍
肾小管酸中毒
肾小管
代偿
H-Na交换过多
Na多了
Na-K交换减少
K多了
肾小管K分泌减少
K
升高
细胞内钾转移
大面积烧伤、挤压伤
代谢性酸中毒
pH酸性
H+增加
代偿
H+进入细胞内
K+交换出来
K
升高
肾小管
代偿
H-Na交换过多
Na-K交换减少
肾小管K分泌减少
K
升高
方法
参考方法
钾、钠
火焰光度法
阴离子间隙(AG)
未测定阴离子与未测定阳离子之差
阴离子
CL、HCO3、无机酸、有机酸(乳酸、β-羟丁酸、乙酰乙酸)
AG=Na-(CL+HCO3)=有机酸的量
参考值
8-16mmol/L
代谢性酸中毒
AG升高
检测方法
离子选择电极法(ISE)
最简便、准确的方法
电极法所依据的公式是
能斯特公式
火焰分光光度计法
参考方法
H、HCO3、Ca关系
血浆中存在的反应
Ca+CO3
CaCO3
CO3+H
HCO3
HCO3+H
H2CO3
H增高
右进行
CO3减少
左进行
Ca增高
H减低
左进行
CO3增加
右进行
Ca减少
HCO3增加
右进行
H减少
左进行
CO3增加
右进行
Ca减少
HCO3减少
左进行
H增高
右进行
CO3减少
左进行
Ca增加
血气分析
pH
7.35-7.45
PH=pKa+log【HCO3-】/【H2CO3】
pKa=6.1
Bohr效应
PH改变而影响Hb携氧能力的现象
PH计中的测量电极
离子交换电极
功能
缓冲体系
HCO3与H2CO3比值
细胞内外离子交换
H+-K+交换
肺的呼吸
排出CO2
排酸
肾脏
排酸(H+)保碱(HCO3)
二氧化碳分压(PCO2)
参考值
35-45mmHg
临床意义
判断呼吸性酸碱中毒
只看PCO2
慢性支气管炎、肺气肿、肺心病
CO2排出减少
PaCO2升高
呼吸性酸中毒
支气管哮喘
CO2排出增多
PaCO2减少
呼吸性碱中毒
穿不上来气就会使劲呼吸
碳酸氢盐(HCO3-)
参考值
22-27mmol/L
临床意义
判断代谢性酸碱中毒
升高
代谢性碱中毒
减少
代谢性酸中毒
分类
AB
实际碳酸氢盐
包含PaCO2
受呼吸因素影响
SB
标准碳酸氢盐
不包含PaCO2
反应代谢酸碱中毒
最可靠指标
AB>SB
PCO2增多
呼吸性酸中毒
AB<SB
PCO2减少
呼吸性碱中毒
碱剩余(BE)
参考值
-3——+3
原理
标准状态下1L血液滴定到PH7.4所需要的酸、碱量
血液酸性
用碱滴定
负值
血液碱性
用酸滴定
正值
碱剩下了
所以叫碱剩余
临床意义
代谢性碱中毒
正值
增大
代谢性酸中毒
负值
增大
缓冲碱(BB)
血中一系列具有缓冲作用的碱的总和
血浆蛋白
血红蛋白
HCO3-
HPO32-
BB=HCO3+Pr+Hb≈50mmol/L
参考值
45-54mmol/L(全血)
临床意义
同HCO3
降低
代酸或呼碱
升高
代碱或呼酸
BB降低
AB(HCO3)正常
提示Hb或血浆蛋白含量降低
CO2运输
物理溶解
与HCO3结合
最主要
与Hb结合
氨基甲酸血红蛋白
Hb-NHCOO
氧分压(PaO2)
参考值
95-100
反应心肺功能
缺氧程度
敏感指标
氧饱和度(SaO2)
氧饱和度
血氧含量占氧容量的百分比
血氧含量
血红蛋白实际结合氧的量
参考值
动脉血
95%-98%
公式
每克血红蛋白携氧量
1.34ml
每100ml血的含氧量
100ml(血)*1.34ml/g*血红蛋白含量*氧饱和度
Hb结合氧的能力
取决于氧分压
血液中HbO2量与Hb总量(包括Hb和HbO2)之比
HbO2解离曲线
横坐标
PO2
纵坐标
血氧饱和度
P50
血氧饱和度达到50%时相应的PO2
Hb对氧亲和力大小或对氧较敏感的氧解离曲线位置
影响氧运输的因素
PH
降到7.2
P50增高
Hb对氧亲和力下降
解离曲线右移
释放氧增加
升到7.6
P50降低
亲和力增加
曲线左移
Bohr效应
温度
升高
P50增高
对氧亲和力下降
曲线右移
释放氧增加
降低
P50降低
对氧亲和力增加
曲线左移
PCO2
增高
P50增高
亲和力下降
曲线右移
释放氧
降低
P50降低
亲和力增加
曲线左移
2.3二磷酸甘油酸(2,3-GPG)
非红细胞糖酵解旁路的产物
直接导致Hb构象变化
影响对氧的亲和力
浓度降低
P50增高
Hb对氧亲和力下降
解离曲线右移
释放氧增加
浓度升高
P50降低
亲和力增加
曲线左移
代偿机制
代偿性酸碱失衡
PH正常
失代偿性酸碱失衡
PH异常
预计代偿公式
原发性代谢性酸中毒
PCO2=40-(24-HCO3)*1.2±2
代谢性酸
代偿PCO2下降
用40-
原发性代谢性碱中毒
PC02=40+(HCO3-24)*0.9±5
代谢性碱
代偿PCO2上升
用40+
代谢的猛用40
急性呼吸性酸中毒
HCO3=24+(PCO2-40)*0.07±1.5
呼吸性酸
代偿HCO3上升
用24+
急性呼吸性碱中毒
HCO3=24-(40-PCO2)*0.2±2.5
呼吸性碱
代偿HCO3下降
用24-
呼吸的轻用24
括号内的用上升的- 下降的被-
机制
肾脏的排酸保碱功能
PH下降
H+-Na+交换升高
肾小管排出H,回收Na
HCO3重吸收上升
肾小管分泌NH3与H+结合NH4,并排出
酸性含量减少
PH升高
N+-Na+下降
抑制H排出
HCO重吸收下降
肾小管不分泌NH3
肺的调节作用
PH下降
PaCO2上升
呼吸加深加快
排出CO2
酸性含量减少
PH上升
PaCO2下降
抑制CO2排出
酸性含量增加
单纯性酸碱平衡
代谢性
看HCO3(NaHCO3)
代谢性酸中毒
指标变化
原发
HCO3下降
代偿
PCO2下降
已经酸了,呼吸的酸也要下降
阴离子间隙AG升高
代偿机制
呼吸
H升高
刺激呼吸系统
呼吸深大
CO2排出
肾脏
肾小管H-Na交换升高
排出H
分泌NH3
以NH4排出
HCO3的重吸收
升高
细胞内外
H-K交换升高
血清K
升高
纠正酸中毒后要及时补钾
原因
H-K交换,钾进入细胞内
钾从肾脏排出
糖尿病酮症酸中毒
代谢性碱中毒
指标变化
原发
HCO3升高
代偿
PCO2升高
代偿机制
呼吸
H下降
抑制呼吸系统
CO2升高
肾脏
H-Na交换下降
排除H减少
HCO3重吸收
下降
细胞内外
H-K交换降低
血清K
降低
CL
相对下降
低钾低氯代碱中毒
呼吸性
看PCO2(H2CO3)
呼吸性酸中毒
指标变化
原发
PCO2升高
代偿
HCO3升高
代偿机制
呼吸
H升高
刺激呼吸系统
呼吸深大
CO2排出
肾脏
H-Na交换升高
排出H
分泌NH3
排出NH4
HCO3重吸收
升高
细胞内外
H-K交换升高
血清K
升高
呼吸性碱中毒
指标变化
原发
PaCO2下降
代偿
HCO3下降
代偿机制
呼吸
H下降
抑制呼吸系统
CO2排出下降
肾脏
H-Na下降
H下降
分泌NH3下降
HCO3重吸收
下降
吸收CL以排出HCO3
肾脏本身就是排酸保HCO3
现在不吸收HCO3了就必须吸收另一个阴离子CL
血氯
升高
支气管哮喘
综合
PH<7.4
HCO3*PCO3>1000
呼酸
PCO3升高
HCO3代偿性升高
PH<7.4
HCO3*PCO*<1000
代酸
HCO3下降
PCO3代偿性下降
PH>7.4
HCO3*PCO3>1000
代碱
HCO3上升
PCO3代偿性上升
PH>7.4
HCO3*PCO3<1000
呼碱
PCO3下降
HCO3代偿性下降
糖尿病痛症酸中毒
高阴离子间隙型代谢性酸中毒
机体内固定酸增加
HCO3浓度下降
AG升高
腹泻
正常阴离子间隙型代谢性酸中毒
HCO3丢失
伴随CL增高
所以AG不变
持续呕吐
CL响应型代谢性碱中毒
H丢失
肾脏HCO3重吸收减少
CL重吸收增多
因为是HCO3重吸收减少导致的CL重吸收增多
所以是响应
CL排出减少
原发性醛固酮增多症
CL抵抗型代谢性碱中毒
H和K排出增多
HCO3和Na重吸收增多
CL重吸收减少
CL排出增多
排出了所以抵抗
血气分析技术
PH测定
玻璃电极、参比电极
PCO2测定
CO2气敏电极
PO2测定
O2气敏电极
采集
动脉血
肝素抗凝
肝素锂
隔绝空气
否则
PO2、PH升高
PCO2降低
30min内检测
否则
放在冰水中
减少糖酵解
不超过2h
分配系数
一种化合物在互不相溶的两个相中分配的状况
在特定稳定条件下
是一个常数
生物化学技术
免疫技术
免疫固定电泳
鉴别单克隆免疫球蛋白重链和轻链类型的方法
电化学发光免疫分析
根据三联砒啶钌和三丙胺
在电场触发下产生发光的化学反应
特点
通过电场来精确控制整个分析过程
α1-球蛋白区带
荧光强度
荧光物质浓度高时
自熄灭现象
区带最宽的是
γ-球蛋白区
区带最淡的是
α1-球蛋白区
主要是HDL
AFP
α1-抗胰蛋白酶
最主要的蛋白质
补体C3.C4
β-球蛋白区
电泳
移动界面电泳
区带电泳
根据支持体的种类、粒度大小及电泳方式
滤纸、醋酸纤维素薄膜、硅胶、矾土、纤维素
淀粉、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶
琼脂糖凝胶电泳
脂蛋白电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳
分离小片段DNA(5-500bp)
稳态电泳
又称置换电泳
特点
分子颗粒的电泳迁移在一定时间后
达到稳态
包括
等电聚集电泳
等速电泳
层析
基本原理
与固定相相互作用越弱
受阻滞越小
向前移动速度越快
离子交换层析
固定相
离子交换剂
各组分亲和力不同
达到分离目的
亲和层析
固定相
特异性配体
具有特异性亲和力
纯化该大分子物质
具有专一亲和力的
抗原、抗体
抗原与抗体
DNA
DNA与互补DNA或RNA
酶
酶与底物、受体蛋白或竞争性抑制剂
激素
激素与他们的受体
维生素
维生素与结合蛋白
糖蛋白
糖蛋白与植物凝集素
吸附层析
固定相
固体吸附剂
吸附能力不同
达到分离目的
凝胶层析
作用
脱盐
分离提纯
测定高分子物质的分子量
高分子溶质的浓缩
凝胶过滤
分离不同分子质量大小蛋白质的方法
大的溶质分子
较快通过凝胶柱
在流动相中溶解度大的物质
最先被洗脱下来
生物传感技术
原理
待测物质经扩算作用
进入固定化生物敏感膜层
产生信息被化学或物理换能器转变成
可定量或可处理的电信号
经过放大输出
计算待测物质浓度
生物敏感膜
分子识别原件
关键原件
决定传感器的功能与质量
生物芯片
利用介电电泳
提高分离效率
高效液相色普法
分离能力强、灵敏度高
对蛋白质、核酸、氨基酸、生物碱、类固醇和类脂
分离有利
紫外吸收检测
应用最多
灵敏度
ng水平
分类
液-固吸附色谱法
液-液分配色谱法
离子交换色谱法
可见光及紫外光分光光度法
测定计算方法
标准曲线法
对比法
差示法
有色溶液太浓或太稀的方法
多组分混合物测定法
摩尔吸光系数法
朗伯-比尔定律
A(吸光度)
K(摩尔吸光系数)*C(溶液浓度)*L(光径)
同一溶液特定波长下
提高吸光度
增加光径来实现
溶质不变
最大吸收峰波长不变
峰值与浓度呈正比
溶液稀释
峰高降低
波长
260nm和340nm
紫外线光
410nm
黄色可见光
630nm
红色可见光
紫外分光光度计
测定蛋白质
核酸对光吸收有干扰
选择双波长矫正
公示
蛋白质浓度(g/L)=1.45A280nm-0.74A260nm
选择的波长
280nm
原子吸收分光光度法
测定锌
锌元素空心阴极灯
灵敏度、特异性
灵敏度
严重但疗效好的
有一定疗效的特性肿瘤
存在多种可能性,排除某一诊断
普查或定期健康检查
筛选试验
特异性
某种疾病的概率较大
方便确诊
严重但疗效与预后均不好的
严重且根治方法有较大损害
确诊试验
准确度、精密度
三级
决定性方法
发展和评价参考方法
标准品
参考方法
鉴定常规方法和二级标准品
常规方法
分离蛋白质
利用蛋白质的特殊理化性质
盐析法、透析法、电泳、层析及超速离心
不损伤蛋白质高级结构的物理方法
可使蛋白质沉淀而又不变性的沉淀剂
低温下用硫酸铵
绝对不能采用
高温、过酸、过碱、剧烈震荡等
分离酶
盐析法
最常用的方法
无变性
易脱盐
有机溶剂沉淀法
分辨率高
不需脱盐
易失活
低温操作
吸附分离法
去杂质、浓缩酶
粗制品的分离
层析法
电泳法
用于分析和制备
测酶蛋白的等电点
结晶法
易保存
不一定是完全纯化品
超速离心机
30000r/min
645000g
计量
国家计量局
对"量出式”吸量管的标记
TD
对“量入式”吸量管的标记
TC
对“量出式”容量仪器的标记
A
对“量入式”容量仪器的标记
E
DNA
酚提取法获取的DNA大小
>20万
甲酰胺解聚法获取的DNA大小
10万-15万
盐酸胍裂解细胞获取的DNA大小
2万-5万
ROC曲线
一种用于描述二元分类器系统诊断能力的图形工具
横坐标
虚惊概率
纵坐标
击中概率
AUC
曲线下面积
越接近1
诊断准确率越高
不符合真实情况
AUC=0.1
准确性比较低
AUC=0.5
有一定准确性
AUC=0.8
有较高准确性
AUC=0.9
最佳准确性
AUC=1
特点
反映敏感性与特异性的相互关系
曲线位于左上角
该分类器的诊断准确率高
曲线位于右下角
该分类器的诊断准确率低
骨
骨吸收
脱氧吡啶酚
特异性标志物
原因
由胶原自然形成
非生物合成
从尿中排出前不被代谢
骨是主要来源
不受饮食影响
标志物
胶原交联
骨形成
标志物
骨钙素
骨谷氨酰基蛋白
骨碱性磷酸酶
前胶原肽
骨质软化症
常见原因
维生素D缺乏
肾性骨病
导致的原因
缺乏活性维生素D3
继发性甲状腺功能亢进
营养不良
酸中毒
内分泌疾病
激素
发挥作用
通过受体
分类
肽及蛋白质类
下丘脑激素、垂体激素、心肌激素、胃肠激素
类固醇
肾上腺皮质激素、性激素
氨基酸衍生物类
甲状腺激素、肾上腺髓质激素
脂肪酸衍生物类
前列腺激素
APUD细胞
统称
胺原摄取及脱羧细胞
可分泌异源性激素
不受内分泌腺轴调控
自主性分泌
胚胎发育上均起源于
神经嵴外胚层
分化不完全
甲状腺分泌功能紊乱
甲状腺素
降低血液胆固醇水平
甲状腺滤泡上皮细胞分泌
甲状腺素(T4)
三碘甲状腺原氨酸(T3)
直接进入细胞核内,与核受体结合发挥作用
生物合成过程
碘的摄取和活化
酪氨酸的碘化及缩合等
酪氨酸为甲状腺激素的合成原料
分泌调节
下丘脑-垂体-甲状腺轴
反映下丘脑-垂体-甲状腺轴功能的敏感指标
促甲状腺激素(TSH)
促甲状腺激素(TSH)
α和β两个亚基
与α亚基同源性高的激素
hCG
与LH(促性腺激素)、FSH、TSH、hCG
有同源性的亚基结构
参考值
新生儿
1-18mU/L
新生儿增高
首先怀疑
先天性甲状腺功能低下
成人
0.63-4.19uU/ml
运输
T3、T4主要和血浆蛋白结合
甲状腺素结合球蛋白(TBG)结合
游离T3、游离T4
具有生物活性,可进入靶细胞
游离T3
活性更强
检查
临床表现
检验
功能试验检查
游离T4(FT4)、游离T3(FT3)、超敏TSH
首先方案
第一线指标
总T3、总T4
与TBG(甲状腺素结合球蛋白)有关
TBG检查
对总T3、T4检测结果与临床表现不符合有解释作用
总T3(TT3)
早期Grave疗效观察及停药后复发
敏感指标
TSH
由α亚基和β亚基组成
β亚基是功能性亚基
均用免疫化学法
针对β亚基的抗体
单克隆抗体
因为α亚基
与LH(促性腺激素)、FSH、HCG的押金有同源性
假阳性高
应激状态
TSH假性减低
TRH(促甲状腺激素释放激素)兴奋试验
Grave病
T3、T4增高
反馈抑制TSH
不被TRH兴奋
静脉注射TRH
TSH升高
排除Grabve病
TSH正常/降低
支持原发性甲亢诊断
甲状腺摄131I率试验
利用甲状腺的摄碘功能
简介反应合成分泌甲状腺激素的能力
甲亢
摄取速度快
摄取率高
甲减
峰平坦
摄取率降低
对甲亢者
诱发心脏反应的危险
亚急性甲状腺炎
有甲亢症状
甲状腺水平与摄碘能力
分离现象
T3、T4升高、TSH降低
摄取率降低
甲状腺自身抗体试验
促甲状腺(TSH)受体抗体(TRAb)
抑制TSH
早期诊断Grave病
第一线指标
判断病情活动
甲亢康复、愈后复发、治疗后停药
重要指标
包括
甲状腺刺激抗体
TSAb
甲状腺功能抑制性抗体
TFIAb
甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)
长期阳性、滴度较高
提示进展为自身免疫性甲减的可能
桥本病
采血注意
清晨起床前采血
TSH
早晨2-4点是分泌高峰
17-18点是分泌低谷
皮质醇
清晨最高
午夜最低
新生儿
第三天(72h)采血
甲状腺激素
促进神经系统发育
最重要的激素
肾上腺激素代谢
肾上腺种类

肾上腺皮质激素(类固醇激素)
原料是胆固醇
盐皮质激素
醛固酮
球状带
糖皮质激素(GC)
皮质醇、皮质酮
束状带
性激素
雄激素、少量雌激素
网状带
肾上腺髓质激素(儿茶酚胺类激素)
肾上腺素(E)
去甲肾上腺素(NE)
多巴胺(DA)
肾上腺皮质激素特点
类固醇激素
原料为胆固醇
降解部位
肝脏
糖皮质激素
通过
下丘脑-垂体-内分泌轴调控
促肾上腺皮质激素(ACTH)
清晨最高、午夜最低
测定
常用化学发光免疫法、放免法
抽取法、直接法
直接法比较简单
可以用EDTA和肝素抗凝
不能及时测定
冷冻保存
肾上腺皮质功能亢进
库欣综合征(Cushing病)
慢性糖皮质激素增多(皮质醇总额增多)
病因
垂体腺瘤及下丘脑-垂体功能紊乱
原发性肾上腺皮质肿瘤
异源性ACTH(肺燕麦细胞瘤)
不是垂体分泌的
药源性皮质醇增多
临床特点
圆脸/满月脸
向心性肥胖
嗜酸性粒细胞减少
嗜酸与糖皮质醇激素有关
升高血糖
糖皮质醇-糖-血糖
原发性肾上腺皮质功能减退
爱迪生病(Addison病)
病因
自身免疫、结核、真菌感染
肿瘤、白血病、放射治疗
破坏双侧肾上腺的绝大功能导致分泌不足
检查
糖皮质激素(皮质醇、皮质酮)
下降
尿17-羟皮质类固醇、17-酮类固醇
下降
代谢产物
用浓盐酸防腐
血浆ACTH
上升
继发性肾上腺皮质功能减退
病因
下丘脑、垂体的感染
炎症、肿瘤、放射治疗
引起CRH、ACTH分泌减少
检查
糖皮质激素(皮质醇、皮质酮)
下降
尿17-羟皮质类固醇、17-酮类固醇
下降
代谢产物
血浆ACTH
下降
原发上升、继发下降
肾上腺皮质功能紊乱的临床生化诊断
24h尿17-羟皮质类固醇(17-OHCS)
血中皮质醇含量
24h尿17-酮类固醇(17-KS)
血中皮质酮含量
血皮质醇
直接反应糖皮质激素分泌情况
免疫法检测是
总皮质醇
血、尿游离皮质醇
反应真正具有活性的浓度
首选项目
促肾上腺皮质激素(ACTH)兴奋试验
诊断原发或继发性皮质功能减退
静脉注射ACTH
原发性减退
血、尿皮质醇不升高
原发的本身可以刺激增多,所以不需要再多了
继发性减退
延迟反应
晚会才会升高
静脉注射CRH
原发性
ACTH增高
皮质醇不变
地塞米松抑制试验
诊断库欣综合征
地塞米松=人工合成的GC
抑制CRH、ACTH
正常人
CRH、ACTH
下降
GC
下降
任何类型的库欣综合征皮质醇的释放
小剂量地塞米松
不受小剂量地塞米松抑制
因为本身就分泌增多,已经被抑制了,所以不会再抑制了
大剂量地塞米松
肾上腺皮质肿瘤引起的
肾上腺癌性Cushing病、异源性ACTH综合征
血、尿皮质醇变化不大
因为已经被抑制了,所以不会再抑制了
肾上腺瘤性Cushing病
有部分正常的肾上腺皮质
可出现一定的抑制
垂体病变引起的(继发性的)
有一定的抑制作用
血、尿皮质醇下降
抑制率多能>50%
肾上腺皮质腺癌
向心性肥胖、高血压、骨质疏松
伴性激素分泌增多
女性
多毛、痤疮、月经失调、男性化
肾上腺髓质激素
肾上腺髓质激素
嗜铬细胞
具有分泌肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)等儿茶酚胺类激素
嗜铬细胞瘤
肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺
升高
肾上腺素(E)
血压升高、增加心输出量
香草扁桃酸/苦杏仁酸(VMA)
E和NE的代谢产物
因儿茶酚胺无检测方法
用尿中VMA了解肾上腺髓质的分泌功能
嗜铬细胞瘤
VMA、血清E和NE
明显升高
性激素紊乱
性激素(类固醇激素)
雄激素
睾酮
少量脱氢异雄酮
少量雄烯二酮
雌激素
雌激素
雌二醇(E2)
少量雌三醇(E3)
少量雌酮
孕激素
孕酮
生化检查
性腺功能检查
睾酮
男性性功能减退或睾酮分泌不足的诊断
活性形式
5α-二氢睾酮
黄体生成素(LH)
预测排卵和排卵异常
卵泡刺激素(FSH)
促进卵泡成熟
与HCG结构相似
雌二醇(E2)
生活活性最强的天然雌激素
女性早熟的诊断指标之一
GnRH兴奋试验
促性腺激素释放激素(GnRH)兴奋试验
静脉注射GnRH
检查垂体和卵巢功能
鉴别青春期迟缓和性幼稚病因
性早熟
女孩8岁以前
男孩10岁以前
生长激素(GH)紊乱
功能
白天在餐后分泌
3小时
半衰期
20分钟
促进骨骼软骨DNA和RNA合成
与性发育有关
加速蛋白质的合成
加速骨骼和肌肉的生长
促进肝糖原分解
升高血糖的激素
不能促进脑发育
紊乱
生长激素缺乏症
垂体性侏儒症
身材矮小、骨骼发育不全
智力正常
不同于呆小症(甲状腺激素降低)
巨人症
生长发育期GH过度分泌
肢端肥大症
成年后GH过度分泌
前列腺
前列腺增生
每克增生的前列腺组织
PSA升高
0.3ug/L
PSA
复合PSA
半衰期
10天
ACP(酸性磷酸酶)
诊断前列腺癌
胰多肽族分泌的激素
酪神经肽
胰腺癌
CA153
半衰期
8-15天
CA199
半衰期
8.5天
胃癌、肺癌
CA125
半衰期
4.8天
肝癌
AFP
半衰期
4-5天
α1-球蛋白区带
胰腺疾病
外分泌功能
总称
胰液
成分
水、消化酶、碳酸氢盐
消化酶(外分泌酶)
淀粉酶
脂肪酶
蛋白酶
磷脂酶
核糖核苷酸酶
同时促进胰液和胆汁分泌的
胃
检查与临床意义
淀粉酶(AMY)
可以和大分子量的蛋白质形成复合物
特性
只有α-淀粉酶
分子量小
可通过肾小球
唯一能在尿中出现的
血浆酶
胰腺直接分泌的
具有生物活性的酶
不用催化
水解α-1,4糖苷键
耐70℃高温
PH
6.5-7.5
IFCC推荐方法
硝基麦芽七糖法
同工酶
P-同工酶
胰型同工酶
胰腺长的也像一个小P
S-同工酶
唾液型同工酶
影响因素
阴离子有激活作用
Cl、Br(溴离子)
激活性最强
甘油三酯
抑制淀粉酶活性
稀释标本
降低影响
肝素抗凝
Ca是淀粉酶分子的组成部分
EDTA、草酸盐、枸橼酸盐能与Ca结合
抑制淀粉酶不宜应用
测定体系需要Ca
临床意义
急性胰腺炎
淀粉酶、脂肪酶活性升高
腮腺炎
S型升高而P型正常
脂肪酶活性不升高
大量饮酒、消化性溃疡穿孔
S型、P型同时升高,也可任何一型升高
巨淀粉酶血症
血清淀粉酶升高
尿淀粉酶降低
因为太大了,没办法滤过了
注射吗啡
S型升高
36小时恢复正常
脂肪酶(LPS)
临床意义
与淀粉酶基本平行
诊断胰腺炎特异性
高于淀粉酶
腮腺炎伴腹痛时
只表现淀粉酶升高,而脂肪酶正常
作为鉴别诊断
胰蛋白酶
胰液进入肠道首先被激活的酶
总结
急性胰腺炎
病因
暴饮暴食
胰液大量分泌
胰腺管内压力上升
胰泡破裂
胰液进入胰泡之间的间质
临床表现
突发剧烈腹痛
上腹正中或偏左
持续性加重
向背部、肋部放射
剑突下压痛、反跳痛
恶心、呕吐
与钙离子的致病关系
高血钙易发生胰管钙化、结石
钙离子与胰淀粉酶激活无关
但对测定有关系
与胰蛋白酶原激活有关
高血钙促进胰液分泌
高血钙促进胃泌素分泌
出血坏死型胰腺炎
大量脂肪组织坏死(胰液消化的)
分解出脂肪酸
与钙结合成脂肪钙
大量消耗钙
引起低血钙
与临床严重程度平行
血钙<1.75mmol/L
出现手足抽搐
胰腺癌
肿瘤标志物
CEA
CA199
CA50
CA242
胰外分泌功能试验
胰泌素试验
缩胆囊素试验
Lundh试验
粪便脂肪试验
没有淀粉酶测定
Murphy阴性
确定不是胆囊炎
α1-抗胰蛋白酶
蛋白酶抑制剂
缺乏时
蛋白水解酶可作用肺泡壁的弹性纤维
胎儿呼吸窘迫症
青壮年肺气肿
肾功能
肾单位
肾小体
肾小球
肾小囊
肾小囊里面就是原尿
肾小管
肾小球功能
孔径屏障
分子量<40kD
葡萄糖、水-通过
分子量>70KD
血细胞、蛋白质-不通过
电荷屏障
正电荷易通过
滤过功能
物质基础
肾血流量
结构基础
透过膜面积和通透性
动力基础
有效滤过压
有效滤过压=肾小球毛细血管压-(胶体渗透压+肾小囊内压)

肾小管的重吸收
肾脏的基本功能
泌尿功能
肾小球的滤过功能
肾小管的重吸收功能
肾小管的分泌或排泌功能
内分泌功能
1,25-(OH)2-D3
促红细胞生成素(EPO)
血液
肾小球滤过
原尿(180L)
肾小管重吸收
终尿(1-2L/24h)
重吸收占总量的99%
肾小球的滤过功能
肾小球滤过率(GFR)
单位时间内
两肾生成的滤液量
单位
ml/min
电荷屏障受损
中分子蛋白尿
孔径屏障受损
大分子蛋白尿
肾小管的重吸收功能
近曲小管
最重要/主要的部位
葡萄糖、氨基酸、维生素、微量蛋白、水、电解质、HCO3(碱)
不被重吸收的
肌酐
髓袢
逆流倍增
水与溶质都被重吸收
远曲小管和集合管
在抗利尿激素(ADH)和醛固酮的调节下
重吸收水和Na
抗利尿激素(ADH)
对渗透压敏感
大量出汗后可引起ADH升高
醛固酮
对血容量敏感
肾小管的分泌和排泄功能
近曲小管
排出
H+
重吸收
HCO3-
H+-Na+交换
远曲小管和集合管
排出
K+
NH3(氨)
NH3与H+结合成NH4排出
排氨也排氢气(排酸)
重吸收
NaHCO3
K+-Na+交换
肾脏疾病的化学变化
蛋白质及其代谢物异常
氮质血症
尿素、肌酐、尿酸
非蛋白含氮物质
含量显著升高
肾功能衰竭
重要临床表现
氮质血症
内生肌酐清除率较实际肾小球滤过率要高
因为肾小管排泌少量肌酐
蛋白尿
尿蛋白量>150mg/24h
蛋白尿
>3.5g/24h
大量蛋白尿
肾小球滤过严重受损
可累计肾小管
肾病综合征
蛋白标志
肾性
肾小球性蛋白尿
中大分子漏出
白蛋白(主)
转铁蛋白(Tf)
免疫球蛋白
补体(C3)
α2-巨球蛋白
急性肾小球肾炎
肾病综合征
肾小管性蛋白尿
小分子蛋白
溶菌酶
α1微球蛋白
β2微球蛋白
视黄醇结合蛋白(RBP)
肾盂肾炎
间质性肾炎
混合型蛋白尿
慢性肾炎
溢出性
肾前性蛋白尿
血中小分子蛋白
轻链蛋白(M蛋白)
血红蛋白
肌红蛋白
溶菌酶
多发性骨髓瘤
血管内溶血性贫血
肌肉挤压伤
肾脏疾病的代谢变化
肾病综合征
肾小球基膜通透性增加
临床症状
三高一低
高蛋白尿
高度水肿
白蛋白丢失导致胶体渗透压降低
高脂血症
低蛋白血症
血浆中IgG下降
IgM相对增加
α2巨球蛋白增加
因为太大漏不出去
代偿性增加
高凝状态
凝血因子分子量较大
漏不出去
代偿性增加
抗凝血酶III
与白蛋白相近
可以漏出
重要原因
急性肾小球肾炎
病因
A组β溶血性链球菌(化脓性链球菌)
扁桃体炎、上呼吸道感染
1-3周后
III型超敏反应
双侧肾弥漫性的肾小球滤过膜损害
临床特征
急性起病
血尿
高血压
与肾病综合征不同
蛋白尿
水肿
尿常规检查
异性红细胞
红细胞管型
蛋白尿
慢性肾衰竭
慢性肾衰竭
高血磷导致低血钙
PTH(甲状旁腺激素)增生
常见高甲状旁腺素性骨疾病
纤维性骨炎
原因
维生素D生成不足
高钾血症
低钠血症
血清铝升高
抑制骨细胞功能
骨发育不全
类骨质不会增加
β2微球蛋白排泄受损
骨淀粉样变
不会引起成骨细胞受损
因甲状旁腺亢进
成骨细胞活性增高
肾小球功能检查
肾小球滤过率(GFR)
菊粉清除率测定
理想的GFR物质
外源性植物多糖
肾小管不分泌也不重吸收
金标准
血清肌酐(Scr)
肌酸代谢的产物
不被重吸收
酶偶联法
特异性高
碱性苦味酸法(Jaffe法)
常用方法
葡萄糖、丙酮、丙酮酸、肌酐都可发生反应生成红色物质
内生肌酐
在严格控制饮食的情况下
每天内生肌酐生成量(血肌酐)
尿液排出量(尿肌酐)
相等
内生肌酐清除率(Ccr)
一般尿量为24h尿量
需要换算
公式
如血肌酐88.4umol/L,尿肌酐4420umol/L,24h尿量1584ml
参考值
80-120ml/min
尿液
保存液
甲苯
临床意义
氮质血症
内生肌酐清除率较实际肾小球滤过率要高
因为肾小管排泌少量肌酐
慢性肾炎
肾小球滤过功能最先受损
肌酐清除率最先异常
血清尿素(Sur)
蛋白质代谢产物
取决于
蛋白质的摄取量
蛋白质分解代谢速度
肾脏排泄能力
50%被重吸收
肝脏功能
血肌酐更准确的反应肾小球滤过功能
循环血容量
临床意义
尿素升高、肌酐正常
甲状腺功能亢进
大面积烧伤
急性传染病
蛋白质分解增多、尿素合成增强
上消化道出血
血红蛋白被肠道吸收
尿素增强
尿素、肌酐均升高
慢性肾衰竭
方法
直接法
二乙酰一肟(wo)显色法
在热强酸溶液中
红色复合物
酶偶联速率法
尿素酶法/尿素酶-谷氨酸脱氢酶偶联法
反应专一、特异性强
加脲酶后尿素水解
首先产生
CO2和氨
波长
340nm
生化仪
常用
血清尿酸(UA)
嘌呤核苷酸代谢产物
临床意义
痛风
核酸代谢亢进
白血病、多发性骨髓瘤、代谢综合征、恶性肿瘤、真性红细胞增多症
肾功能损害
胱抑素C(Cys C)
可自由透过肾小球
被近曲小管全部重吸收
临床意义
反应肾小球滤过率(GFR)
内源性标志物
糖尿病肾病
高血压肾病
早期损失指标
肾小球屏障功能
尿微量白蛋白(mALb)
30-300mg/24h范围内
常规方法无法检出
免疫学可以检出
临床意义
正常人尿液中可出现
糖尿病肾病(糖尿病肾小球微血管病变)
高血压肾病
肾小球滤过功能损伤
早期诊断指标
尿蛋白选择性指数(SPI)
高度选择性蛋白尿
病变较轻
仅有中大分子蛋白质
以白蛋白为主
非选择性蛋白尿
病情重
大分子蛋白尿
选择与非选择的鉴别是中大分子蛋白的关系 与β-微球蛋白没关系
IgG与转铁蛋白清除率的比值
鉴别点
肾血流量(RBF)
单位时间内流经肾脏的全血或血浆量
方法
对氨基马尿酸清除率试验(PAH清除率)
放射性核素肾图法
常用方法
肾小管功能试验
尿低分子量蛋白质(LMWP)
β2-微球蛋白(β2-MG)
α1-微球蛋白(α1-MG)
视黄醇结合蛋白(RBP)
α1酸性糖蛋白(AAG)
胱抑素C(Cys-c)
β2微球蛋白
存在所有有核细胞表面
小分子蛋白质
可通过肾小球滤过
临床意义
肾移植后排斥反应
尿β2微球蛋白升高
炎症及肿瘤
血β2微球蛋白升高
中枢神经系统白血病
脑脊液β2微球蛋白升高
尿β2微球蛋白
肾小管的重吸收功能
血β2微球蛋白
肾小球的滤过功能
近曲小管排泌功能
酚红排泄试验(PSP)
对氨基马尿酸最大排泄试验
近曲小管损伤检查
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)
在近曲小管细胞中含量丰富
增加
肾小管实质细胞损害
临床意义
早期反应
糖尿病肾病
高血压肾病
肾移植后排斥
灵敏指标
远曲小管功能
尿液浓缩稀释试验
自由水清除率(CH120)
从血浆中清除到尿中不含溶质的水量
灵敏指标
尿比重、尿渗量
尿渗量
参考值
600-1000mOsm/(kg'H2O)
一次性尿渗量
鉴别肾前性少尿和肾小管坏死性少尿
肾前性少尿
浓缩正常
一次性尿渗量
>450
肾小管坏死
浓缩障碍
一次性尿渗量
<350
慢性间质性肾炎
尿渗量
<600
尿肾小管组织蛋白检测
T-H蛋白
髓袢升支和远曲小管
肾特异性蛋白
作为远曲小管病变的
定位标志物
反应肾小管重吸收功能的指标
尿钠与滤过钠排泄分数(FeNa)测定
反应肾小管和集合管酸碱调节功能试验
氯化铵负荷试验
肾小管性酸中毒
I型肾小管酸中毒
远曲小管排泌H障碍引起
II型肾小管酸中毒
近曲小管重吸收HCO3障碍引起
III型肾小管酸中毒
远曲小管近曲小管都有障碍
IV型肾小管酸中毒
醛固酮缺乏或耐受
总排H减少
代谢性酸中毒合并高血钾
H排不出去了,只能和细胞内交换,所以K升高
总结
肝胆疾病
肝脏功能
代谢
参与糖、脂类、蛋白质、维生素的合成、分解和储存
参与激素、胆红素、胆酸和核酸的代谢
排泄功能
对胆红素、胆酸、药物等的运输和排泄
解毒功能
对药物、毒物等氧化、还原、水解、结合作用
调节凝血和纤溶活性
肝脏代谢
糖代谢
调节血糖的主要器官
通过糖原、糖异生等途径
主要形式与作用
有氧氧化以供能量
蛋白质代谢
合成除γ-球蛋白外几乎所有的蛋白质
合成尿素以解氨毒
尿素仅由肝脏合成
血氨清除的主要途径
通过鸟氨酸循环合成尿素
鸟氨酸循环
由于肝细胞内含有精氨酸酶
可催化精氨酸水解
鸟氨酸和尿素
前期也可促进氨基甲酸磷酸
一个氨来自
氨基甲酸磷酸
另一个氨来自
天冬氨酸
肝性脑病
临床症状
意识障碍
行为失常
昏迷
扑翼样震颤
肝性脑病前后、机体各器官有出血倾向
由于凝血酶原合成少
原因
血氨增高
大量消耗脑中的α-酮戊二酸
脂类代谢
合成胆固醇、甘油三酯、磷脂
合成LDL、HDL、卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)
肝脏将胆固醇转化为胆汁酸
分解甘油三酯和脂肪酸
合成酮体
肝脏缺乏利用酮体的酶系,经过血液运输到肝外组织分解功能
肝脏获得能量的主要途径
脂肪酸氧化
导致脂肪肝
不包括VLDL合成过多
磷脂合成原料不足
肝功能受损
糖转变为脂肪过多
肝内脂肪不能及时输出
维生素代谢
储存多种维生素
激素灭活
肝脏激素降解的
主要部位
生物转化
概念
机体对内生及外来非营养物质进行代谢的过程
肝脏是体内生物转化最强的器官
意义
非极性基团
极性基团
脂溶性
水溶性
有利于排泄
非营养物质转换后
毒性减弱或增加
过程
第一相反应
氧化、还原、水解反应
第二相反应
结合反应
最普通结合物
葡萄糖醛酸
胆红素代谢与黄疸
总胆红素(TBIL)=未结合胆红素(IBIL)+结合胆红素(DBIL)+δ-胆红素
结合胆红素
与葡萄糖醛酸基结合
葡萄糖醛酸苷的生成
需要
葡萄糖醛酸基转移酶
以UDPGA(尿苷二磷酸葡萄糖醛酸)为供体
催化葡糖醛酸苷的生成
血红素加氧酶
存在单核巨噬细胞
微粒体
与重氮试剂反应
未结合胆红素
与重氮试剂反应缓慢
必须加入乙醇后才显色
间接反应阳性
结合胆红素
与重氮试剂直接反应
直接反应阳性
δ-胆红素
δ-胆红素=胆红素与白蛋白形成共价键的结合形式
血浆中含量最低
标本避免光照
胆红素分解
胆红素分子构型改变
黄疸
胆红素生成过多或肝脏处理胆红素能力减低
胆红素排泄障碍
隐形黄疸
TBIL:17.1-34.2umol/L
藏起来扇死儿子
显性黄疸
TBIL>34.2umol/L
测定总胆红素中作为加速剂的
Triton X-100(曲拉通 100)
间接溶血胆原高
直接梗阻胆素高
最牛肝性啥都高
胆汁酸代谢
总胆汁酸
胆固醇转化生成胆汁酸
限速酶
7α-羟化酶
反映肝细胞合成、摄取及分泌功能
与胆道排除功能有关
反流入血
分类
胆汁酸
初级胆汁酸
以胆固醇为原料直接合成的
游离型
胆酸、鹅脱氧胆酸
结合型
胆酸、鹅脱氧胆酸、甘氨酸或牛磺酸的结合物
参与生成的氨基酸
甘氨酸
次级胆汁酸
初级胆汁酸进入肠道,在回肠、结肠上段,由肠道菌酶催化
脱去羟基转化而成
如脱氧胆酸(去氧胆酸)、石胆酸、甘氨酸或牛磺酸的结合物
胆汁酸盐
较强的乳化剂
促进脂溶性物质的吸收
抑制胆汁中胆固醇的析出
检查
检测肝细胞损伤
丙氨酸氨基转移酶(ALT)
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)
丙氨酸氨基转移酶(ALT)
肝脏>肾脏>心脏>骨骼肌
肝肾心骨
特异性低
灵敏度高
测定ALT使用的波长
主波长
340nm
副波长
405nm
参考值
ALT<40U/L
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)
心脏>肝脏>骨骼肌和肾脏
心肝骨肾
同工酶
m-AST(线粒体AST)
ASTm
肝细胞轻度损伤
c-AST(胞质AST)
ASTs
肝细胞坏死
参考值
AST<45U/L
AST/ALT:1.15
临床意义
肝细胞损伤程度
ALT、AST
急性病毒性肝炎
ALT
最敏感
急性肝炎中上升较高的
ALT
急性肝炎时肝细胞轻度损害
ALT升高程度>AST
AST/ALT比值降低
重症肝炎早期
ALT明显升高
随病情恶化
肝细胞坏死
ALT下降
胆红素进行性升高
呈现“酶胆分离”
肝坏死的前兆
碱性磷酸酶(ALP)
主要来源
肝脏(主要)和骨骼
妊娠期胎盘、小肠、肾脏
分类
BALP
骨碱性磷酸酶
1-5岁、10-18岁、怀孕9个月、绝经期后
ALP含量增高
6种同工酶
阳级到阴级
ALP1、ALP2、ALP3(骨骼)、ALP4、ALP5、ALP6
连续检测法
以磷酸对硝基酚(4-NPP)为底物
波长405nm
临床意义
肝胆梗阻
阻塞性黄疸
ALP也通过胆道排泄
肝炎、肝硬化、原发或继发肝癌
ALP升高
骨骼系统病变
成骨细胞的标志
ALP3
佝偻病、骨软化性、骨转移癌及骨肉瘤
γ-谷氨酰转肽酶(GGT/γ-GT)
临床意义
恶性肿瘤有无肝转移
肝癌术后有无复发
肝癌
GGT同工酶II与AFP联合检测
原发性肝癌
梗阻性黄疸
胆汁淤积、胆管梗阻
最敏感的指标
诊断慢性酒精中毒
最敏感的指标
急性肝炎恢复期
ALT已经正常
GGT活性持续升高
肝炎未痊愈
与氨基转移有关
同工酶
醋酸纤维素薄膜
r-GT2和r-GT3
含量最高的
肾脏
假性胆碱酯酶测定(pCHE)
真性胆碱酯酶/乙酰胆碱酯酶(ACHE)
假性胆碱酯酶(pCHE)
肝脏合成
最佳指标
参考值
4250-12250U/ml
临床意义
肝功能不全
减低
有机磷中毒
明显减低
肝纤维化标志物
肝纤维化
肝小叶形成
广泛的肝细胞坏死、残存肝细胞结节性再生
结缔组织增生
肝硬化
反应肝纤维化指标
III型前胶原
IV型胶原
层粘连蛋白(LN)
透明质酸(HA)
纤维连接蛋白(FN)
三前四层透明纤
反应肝硬化的酶
单胺氧化酶(MAO)
腺苷脱氢酶(ADA)
也反映结核
普氨酸羟化酶(PH)
原发性肝癌
α-L-岩藻糖苷酶(AFU)
发霉花生产生的毒素
与原发性肝癌关系最为密切
AFP(甲胎蛋白)>300ug/L
肝硬化
肝硬化变患者蛋白电泳出现β-r桥
多是由IgA增加所致
肝脏疾病
肝硬化
血清铁、总铁结合力
降低
铅中毒
血清铁
增高
总铁结合力
降低
肝炎
血清铁、总铁结合力
增高
总结
心肌损伤
冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)
心绞痛-心肌梗死
递进关系
急性心肌梗死(AMI)
临床表现
突然发作、剧烈而持久
胸骨后或心前区压榨性疼痛
向小拇指和后背放射性疼痛
心电图

ST段弓背向上抬高
宽而深的Q波
心肌标志物
理想特征
高灵敏度、高特异性
心肌中含量丰富
其他部位少或没有
检测早期损伤
窗口期长
评估梗死面积大小
评估溶栓结果
测定的样本周转时间(TAT)
提出检验申请到患者拿到报告的时间
1小时内
应用原则
不再将LD、AST、HBDH用于心肌损伤的诊断
急性冠脉综合征患者
不考虑继续使用CK-MB
CTn取代CK-MB成为首选指标
发病6小时后
不再检测Mb
酶学标志物
肌酸激酶(CK)
两种亚基
M亚基(肌型)和B亚基(脑型)
二聚体
CK-BB
脑
CK-MB
心肌
应用最广泛的心肌损伤指标
CK-MM
骨骼肌、心肌
心肌梗死的同工酶
CK-MB
CK含量
骨骼肌>心肌>脑
方法
连续检测法
免疫化学法测定其质量
最理想的方法
参考值
男性80-200U/L
女性60-140U/L
判断心机损伤的
特异最高的酶
乳酸脱氢酶(LD/LDH)
两种亚基
H亚基(心肌型)M亚基(骨骼肌型)
四聚体
LD1(H4)
心脏
红细胞
所以溶血会升高
LD5(M4)
肝脏、骨骼肌
含量
LD2>LD1>LD3>LD4>LD5
阳性到阴性
LD1-LD2-LD3-LD4-LD5
胸腹水LD
鉴别漏出液或渗出液
腹水LD/血清LD>0.4
渗出液
腹水LD/血清LD<0.4
漏出液
应用速率法测定活性
将NADH氧化为NAD
340nm吸光度降低
肝脏疾病(病毒性肝炎)
LD5增高为主
LD5>LD4
α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)
LD1+LD2的活性
蛋白标志物
心肌肌钙蛋白(cTn,cTnT,cTnI)
诊断AMI确定性、特异性最高、首选的标志物
有胸痛但心电图或CK-MB正常
判断有无微小心肌损伤
推荐用于ACS(急性冠状动脉综合征)危险分层的指标
非ST段抬高性心肌梗死患者进行危险分层首选的心脏标志物
无病理性Q波的心内膜下心肌梗死
首选检查
溶栓后再灌注的判断
评估梗死面积
3-6小时升高
持续时间最长的非酶学指标
不能判断再梗死
因为持续时间长
CK-MB/Mb的效果好
肌红蛋白(Mb)
分子量小
最早出现
阴性预测价值
Mb的半衰期短(15min)
胸痛发作后
2-12h不升高
排除急性心梗的较好指标
结合碳酸酐酶III(CAIII)
提高诊断
判断在梗死
较好指标
脂肪酸结合蛋白(FABP)
分子量比肌红蛋白更小
心肌与骨骼肌为主
心肌含量最多
能和脂肪酸结合
在心肌脂代谢中起重要作用
诊断早期AMI
敏感性、特异性
与Mb相近
临床用Mb/FABP比值来诊断AMI
增加特异性和使用价值
心衰标志物
B型钠尿肽(BNP)
N末端B型钠尿肽原
(NT-proBNP)
最佳指标
有很高的阴性预测价值
正常可排除心衰的存在
由心、脑分泌的多肽激素
起排钠、利尿、扩张血管的作用
药物浓度治疗
体内运转的过程
吸收
口服
通过胃肠道黏膜细胞以被动扩散方式吸收
血管内给药
无吸收过程
分布
进入血液循环后
通过各组织间的细胞膜屏障分布到作用部位
转化
对药物进行化学转化和代谢过程
肝脏
把药物的非极性基团被转化为极性基团
第一相反应
氧化、还原和水解
氧化反应
最多见
最重要的酶
加单氧酶
第二相反应
结合反应
最普通和重要的
葡萄糖醛酸
肝脏进行
加单氧酶
存在微粒体中
通过羟化作用参与生物转化
成分
细胞色素P450
与体内许多活性物质的灭活和药物的代谢有关
排泄
肾(主要排泄器官)
肺、皮肤
药物动力学
研究体内药量随时间变化
给药
血管外注射给药
吸收的主要方式
滤过
口服药物
通过胃肠道黏膜吸收的主要方式
被动扩散
消除速度常数
单位时间内机体能消除药物的固定分数或百分数
影响因素
生物利用度
药剂学的范畴
药剂、理化性质、处方辅料、制剂工艺
机体方面
年龄、肥胖、肝肾、心脏、胃肠道、血浆蛋白含量(有一部分药物与血浆蛋白形成复合物,没有活性)、遗传因素、环境因素
治疗药物检测(TDM)
任务
测定血液或其他体液中的药物浓度
临床给药个性化、合理化
避免或减少毒副作用
需要进行TDM检测的药物特点
高血药浓度
安全范围狭窄
治疗指数低
必须明确知道的
不同治疗的目的需不同的血药浓度
开始治疗的时候,长期使用的的药物
肝、肾、心脏、胃肠道疾病
动力学显著变化时
需要进行TDM检测的药物种类
强心苷类(地高辛)
抗心律失常药物
抗癫痫药(苯妥英钠)
抗抑郁药、抗躁狂药
三环类抗抑郁药
存在治疗窗
免疫抑制剂(环孢素)
环孢霉素
必须用全血测定
平喘药(氨茶碱)
β-受体阻断剂
抗生素(氨基糖苷类、万古霉素、氯霉素)
青霉素不用
抗恶性肿瘤药
血药浓度存在治疗窗
三环类抗抑郁药
庆大霉素
不能用肝素抗凝
采集时间
分布期结束(血药浓度达到稳定)
输液后2-4h
地高辛8-12h
多点采集
长期用药
给药前(谷浓度)
血药浓度最低的时候
药物中毒
峰值时取样
常用技术
色谱法
重复性好
内标法定量
高效液相色谱法(HPLC)
推荐方法、参考方法
化学发光免疫测定法
放射免疫法
荧光免疫法
酶免疫法
钙、磷、镁代谢与微量元素
钙、磷、镁
钙盐与磷酸盐含量最高的无机盐
存在骨骼和牙齿中
钙
功能
降低毛细血管和细胞膜的通透性
抑制神经肌肉的兴奋性
但血钙增高可使心率加快
子主题
凝血因子(IV)
就是Ca
可引起肌肉收缩
进入骨骼肌内部、肌丝运动靠Ca
参考值
2.03-2.45mmol/L
代谢及调节
吸收
十二指肠
在维生素D(VitD3)的调节下
主动吸收
影响吸收
肠道PH
酸性促进吸收
葡萄糖酸钙口服液
酸钙
酸性易吸收
食物成分
草酸和植酸
与钙形成不溶性盐
阻止吸收
排泄
80%肠道排出
20%肾脏排出
高钙血症
尿毒症最罕见的电解质紊乱
心率加快
镁
功能
一半沉积在骨中
参与糖酵解
对神经、肌肉的兴奋性
镇静作用/抑制
酶的辅助因子
与ATP、DNA、tRNA、mRNA的生化反应有关
调节钙、磷代谢激素
器官
肠道吸收
骨质的沉积和吸收
肾脏排泄所调节
激素
甲状旁腺激素(PTH)
功能
升高血钙、降低血磷
维生素D
促进1,25-(OH)-D3的形成
肠
促进钙、磷吸收
与维生素D相同
骨
促进溶骨
肾
促进钙重吸收、抑制磷重吸收
最重要的调节激素
1,25-(OH)2-D3
1,25-二羟基-维生素D3(活性维生素D3)
合成的关键酶
1,25-羟化酶
活化部位
肝细胞
催化酶(维生素D3-25-羟化酶)
形成25-(OH)-D3
加一个(OH)
25号位羟化在肝中进行
肾小管
催化酶(25-(OH)-D3α-羟化酶)
形成1,25-(OH)2-D3
再加一个(OH)
1号的羟化在肾中进行
25-(OH)-D3α羟化酶
对1,25(OH)2-D3有负反馈抑制作用
血磷水平有负反馈作用
降钙素有抑制作用
甲状旁腺激素有促进作用
功能
升高血钙、升高血磷
肠
促进钙、磷吸收
骨
溶骨、成骨双重作用
有利于骨的更新和生长
肾
促进钙、磷重吸收
降钙素(CT)
降低血钙和血磷
维生素D
抑制1,25-(OH)-D3的形成
肠
抑制钙、磷的吸收
骨
促进骨盐沉积,促进成骨
骨质酥松吃降钙素
肾
抑制钙、磷重吸收
骨钙素
合成骨钙素的细胞是
成骨细胞
测定方法与临床意义
钙
总钙
钙吸收需要
钙结合蛋白
离子钙
发挥生理活性
复合钙
阴离子+Ca2+
枸橼酸钙
能透过生理半透膜
不能与钙调节蛋白结合
方法
离子钙
选择性电极
参考方法
受PH的影响
PH每改变一个单位
游离钙浓度改变
0.05mmol/L
总钙
原子吸收分光光度法
参考方法
金属复合染料分光光度法-邻甲酚酞络合酮法
常规方法
镁有干扰
8-羟基喹啉可消除Mg干扰
参考值
离子钙
0.94-1.26mmol/L
钙、磷浓度乘积
35-40mg/dL
临床意义
高钙血症
原发性甲状旁腺激素亢进
维生素D中毒
恶性肿瘤骨转移
最常见原因
因为骨转移会破坏骨骼
低钙血症
甲状旁腺功能减退
维生素D缺乏
婴幼儿
佝偻病
磷也下降
胸廓畸形
裂骨串珠、肋膈沟、鸡胸、漏斗胸
O形或X形腿
慢性肾功能衰竭
肾实质破坏
1,25-(OH)-D3减少
因为第二次羟基化在肾脏进行
但血磷升高,因为排泄在肾,出不去了
蛋白结合钙丢失
磷
临床意义
升高
甲状旁腺减退
激素少了,不降血磷了,所以高了
慢性肾功能衰竭
血磷升高、血钙降低
磷主要由肾脏排出
坏了出不去了
佝偻病
血磷下降
肾脏
排泄主要器官
浓度
成人与儿童有差别
检测方法
磷钼酸还原法
波长
600nm
血清加三氯醋酸沉淀蛋白后离心
无机磷存在上清液中
注意溶血对结果的影响
微量元素
必须的微量元素
顺口溜
口诀
铜佛涅槃,铁骨归西;墨西哥,典型猛。
对应
铜氟镍(nie)钒(fan),铁钴(gu)硅硒;钼(mo)锡铬(ge),碘锌锰
含量
<人体总重量的0.01%
检测方法
原子吸收分光光度法
慢性铜中毒
有呼吸道和眼角膜刺激,可在眼角膜形成沉淀环,并可伴有语音含糊不清、震颤等症状
有害的微量元素
生物学作用
甲硫氨酸合成酶的辅酶
维生素B12
甲硫氨酸合成酶缺陷
同型半胱氨酸尿症
肝脏中维生素参与组成的辅酶
维生素PP
NAD及NADP
维生素B6
磷酸吡哆醛
转氨酶的辅因子
维生素B2
FAD
波长
260nm和340nm
紫外线光
410nm
黄色可见光
630nm
红色可见光
渗透压
渗透压测定的原理
冰点下降