分析化学常用的吸光光度法

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分析化学常用的吸光光度法

• 什么是吸光光度法？
  • 吸光光度法是一种常用的分析方法，用于测定溶液中化合物的浓度或质量。
    • 通过测量化合物对特定波长的光的吸收，可以推断溶液中化合物的浓度或质量。
  • 该方法基于光的光谱吸收特性。
    • 化合物吸收特定波长的光，产生可测量的吸光度。
• 吸光光度法的工作原理是什么？
  • 根据比尔定律（Beer's law）：光束通过溶液中的物质时，光的强度与溶液中物质的浓度成正比。
    • 吸光度（A）与浓度（c）和光程（b）之间的关系为：A = εcb，其中ε为摩尔吸光系数。
• 吸光光度法的应用范围广泛。
  • 可以用于测量蛋白质、核酸、维生素等有机和无机化合物。
    • 在医药、环境、食品和农业等领域得到广泛应用。
• 吸光光度法的步骤如下
  • 准备溶液：将待测物质溶解在适当的溶液中。
    • 溶液的颜色和光程对测量结果有影响，需进行合理选择。
  • 设置波长：选择合适的波长，使待测物质在该波长下具有最大吸光度。
  • 校准仪器：使用标准溶液进行校准，用于建立吸光度和浓度之间的关系。
  • 测量样品吸光度：将样品放入光度计中，通过测量吸光度获得样品的浓度。
  • 计算浓度：根据吸光度与浓度的关系，计算出样品的浓度。
• 吸光光度法的优势
  • 灵敏度高：能够测量低浓度溶液中的物质。
  • 精确性好：测量结果可重复性高。
  • 操作简便：只需准备溶液和进行仪器校准即可。
• 吸光光度法的局限性
  • 受样品颜色和溶剂选择的影响。
  • 对于复杂样品，需配合预处理步骤，如前处理或补偿法。
    • 以提高精确性和减少干扰。