色谱分离法

天然药物化学，色谱分离法利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质随流动相一起运动，并在两相间进行反复多次的分配，从而使各物质达到分离。

色谱分离法

• 概述
  • 别名：色谱法、层析法
  • 含义：分离、纯化、和鉴定化合物的物理化学分离分析方法
  • 特点：试料用量少、分离效率高
• 原理
  • 利用混合物i中各成分在固定相和移动相中吸附、分配及亲和力（吸附，分配，离子交换，分子筛）等的差异，使其相互分离
• 分类
  • 按固定相或支持种类不同
    • 氧化铝色谱
      • 氧化铝：两性化合物
    • 硅胶色谱
    • 聚酰胺色谱
      • 原理
      • 氢键吸附影响因素 （被分离成分的结构）
        • 形成氢键的基团数目
        • ＞氫键在极性强的环境（水）中，更容易诱发 H 原子的正电性，极性原子（如0/F）更易亲核（正电性的 H 原子），氩键更易产生吸附力强，洗脱能力就弱。 ＞氢键在极性弱的环境（亲脂性有机溶利或浓度高的亲水性有机溶剂），氢键不易产生，吸附力弱，洗脱能力就强。
      • 应用
        • 含有芬羟基的成分
    • 凝胶色谱
  • 按移动相种类
    • 气相色谱
      • 气固色谱
      • 气液色谱
    • 液相色谱
      • 液固色谱→吸附色谱
      • 液液色谱→分配色谱
    • 流动相具备条件
      • 流动相有适宜溶解度
      • 不与吸附剂及样品中化合物发生化学反应
      • 黏度小，易挥发
      • 纯度高
  • 按色谱原理
    • 吸附色谱
      • 吸附（被固定相结合）→解吸（被流动相结合）→再吸附→再解吸附 速度则慢→有时间差
      • 吸附剂条件
        • 不溶解于流动相
        • 不与流动相及样品发生化学反应
      • 吸附本质
        • 氢键（吸附）系统
        • 化学反应
    • 分配色谱
      • 概念
        • 分配色谱是以液体做固定相，用与其不相混溶（或很少混溶）的溶剂做流动相，利用被分离成分在西相间的分配系数不同进行分离的色谱法
      • 注：固定相与流动相所谓的不相混溶并非绝对不溶
      • 载体（支持剂，无吸附作用）
        • 硅胶
        • 硅藻土
        • 色谱滤纸
      • 分配柱色谱法
        • 正相分配
          • 正大（大，指固定相极性大）
        • 反相分配
          • 反小（小，指因定相极性小）
        • 操作技术
          • 薄层色谱
          • 柱色谱
          • 纸色谱
          • 饱和
            • 由于分配柱色谱法使用两种溶剂，所以必须先使这两相互相饱和，即将两相放在一起振摇，等分层后再分开，分别取用。至少流动相应先用固定相饱和后再使用，否则，在以后洗脱时当通过大量的流动相时，就会把载体上的固定液逐渐溶解掉。
        • 应用
          • 吸附色谱主要适用于亲脂性物质的分离，对于强极性物质，如脂肪酸和多元醇等，在极性吸附剂上分离很不理想，分配色谱的产生，是这些强极性亲水性物质得到了很好的分离
    • 离子交换色谱
    • 凝胶色谱
  • 按操作方式
    • （吸附）柱色谱
      • 操作技术
        • 装柱
          • 选柱
            • 直径：长度/1:15-1:20
          • 备柱
            • 脱脂棉
          • 吸附剂
            • 氧化铝，硅胶
            • 100目
            • 1:30-1:60
          • 装法
            • 干法，湿法
            • 量为柱长3/4
        • 上样
          • 湿法
            • 洗脱剂溶解
          • 干法
            • 甲醇，丙酮溶解 1:2-1:3吸附剂拌匀 挥干溶剂
          • 覆盖石英砂
        • 洗脱
          • 参照薄层色谱洗脱条件
          • 控制流速在3-
    • （吸附）薄层色谱
      • 分离，鉴定，纯化
      • 流动相=展开剂
      • 操作技术（步骤）
        • 制板
          • 干法铺板（软板）
          • 湿法铺板（硬板）
            • 硅胶G板 1:3 110度活化30分钟（去水分）
            • 硅胶G-CMC-Na板 （羟甲基纤维素钠
            • 氧化铝CMC-Na板
        • 薄层板的活化
        • 点样
          • 配制0.01%-1%乙醇（丙酮，氯仿，（甲醇）溶液
          • 毛细管点样，直径＜3㎜，间距1.5-2㎝
          • 点样时，每点详一次须待溶剂干后
        • 展开
          • 现象
            • 用混合溶剂展开时，同一组分的斑点在薄层中都比在边缘移动速度要慢的现象。称边缘效应。（极性大解析能力强）
          • 产生原因
            • 产生原因：展开槽未被展开剂饱和。尤其是使用混合溶剂时，极性校弱和沸点校低的溶制，在薄层边缘容易挥发，使边缘部分的展开剂中极性溶的比例増大， R 相对増大。同一物质在同一薄层板上出现中间部分的 R 值比边缘的 R ．值小，即边缘效应。
          • 消除方法
            • 消除办法：若在展开前先将展开槽与薄层板用展开剂蒸气饱和后再展开，边缘效应可消失。采用双槽层析缸进行预吸附。
        • 显色
          • 光学显色
          • 化学显色
        • 计算比移值
    • 纸色谱
• 应用
  • 非极性成分→硅胶、氧化铝吸附
  • 极性较大→分配色谱、弱吸附剂吸附
  • 酸、碱、两性（有机酸、氨基酸）→离子交换、吸附、分配色谱
  • 分子量大小有差异（蛋白质、多肽）→凝胶滤过色谱
  • 用于结构相近，性质相近物质的分离，签别
• 色谱法本质
  • 有颜色的排列顺序
• 三要素
  • 固定相
  • 流动相
    • 子主题
  • 被分离物质
• 主题