Lifescience _ Enzyme

这是一篇关于Enzyme的思维导图，主要内容包括：transcriptase，Transposase，copy number，Type Ⅱ Enzyme，functional test，Polymerase，ASE，transposase-Tn5。

Enzyme

• transposase-Tn5
  • Random tagmentation.
  • Gene
    • Addgene
    • Vazyme
  • Production
  • Function
    • General
    • Improvement
    • reandomized insertion
    • directed insertion
  • scale up
• Transposase
  • site directed tagmentation, search other transposases, ==> improve end repeat sequences.
• ASE
  • MutS enzyme.
• Polymerase
• functional test
  • 2021(Science)-Revealing enzyme functional architecture via high-throughput microfluidic enzyme kinetics
• Type Ⅱ Enzyme
  • Type Ⅱ enzyme pplication concept 低拷贝数的质粒DNA在宿主细胞分裂前只能复制1～2次，而多拷贝数质粒可以在细胞分裂前复制成10～200拷贝。 高拷贝数的质粒称为松弛型质粒(relaxed plasmid)，独立于细菌细胞而自主复制；低拷贝数的质粒一般是严紧型质粒(stringent plasmid)，它们的复制随细菌染色体的复制同步进行。 一般来说，外源基因的表达量随拷贝数的增加而提高，但是当拷贝数很大时，拷贝数与发酵目标产物产率的这种关系却不存在。这主要有两方面的原因：一方面，高拷贝数时外源基因的表达量不再由质粒的拷贝数决定，可能是由转录和翻译水平决定的；另一方面，高拷贝数的质粒往往很不稳定。由于质粒拷贝数的变化直接与基因目标产物的产率有关，因此对于重组蛋白的生产来说，质粒的拷贝数是一个非常重要的参数， 1, gene assembly 2, Ph.D. library construction
• copy number
  • concept 也就是一个菌里面可以容纳多少个质粒。 低拷贝数的质粒DNA在宿主细胞分裂前只能复制1～2次，而多拷贝数质粒可以在细胞分裂前复制成10～200拷贝。 高拷贝数的质粒称为松弛型质粒(relaxed plasmid)，独立于细菌细胞而自主复制；低拷贝数的质粒一般是严紧型质粒(stringent plasmid)，它们的复制随细菌染色体的复制同步进行。 一般来说，外源基因的表达量随拷贝数的增加而提高，但是当拷贝数很大时，拷贝数与发酵目标产物产率的这种关系却不存在。这主要有两方面的原因：一方面，高拷贝数时外源基因的表达量不再由质粒的拷贝数决定，可能是由转录和翻译水平决定的；另一方面，高拷贝数的质粒往往很不稳定。由于质粒拷贝数的变化直接与基因目标产物的产率有关，因此对于重组蛋白的生产来说，质粒的拷贝数是一个非常重要的参数， 看质粒上的ori，然后你搜一下，一般像pBR1, pUC ori 是高拷贝的。很多公司买质粒的公司如Qiagen有总结的表 High copy number low copy number for molecular cloning & protein expression, we may use temperature, light, magnetic, chemicals(Arabinose), ultrasonic to control.
• transcriptase