导图社区 第22-23章 真菌学检验
书本:临床微生物学检验技术(“十二五”人卫版),本文提炼书中的重点内容,进行归纳整理,涵盖本书所有核心内容,非常方便大家学习。适用于考试复习、预习,提高学习效率。
编辑于2024-09-22 15:43:43《临床血液学检验技术思维导图》作品集,系统梳理了血液细胞分析、形态学识别、流式细胞术、凝血功能检测等核心知识点。通过直观的思维导图形式,助力医学学习者与从业者快速掌握临床血液检验精髓,提升诊断效率与准确性。
《临床微生物学检验技术思维导图》作品集,全面覆盖临床微生物学检验的精髓。该作品集以思维导图形式,深度解析细菌、真菌、病毒等微生物的检验流程、鉴定方法、药敏试验等关键词,助力医学检验人员快速掌握核心技能。
《临床生物化学检验技术思维导图》作品集,系统整合临床生物化学检验的核心知识与技能。该作品集以思维导图形式,精准覆盖检验方法、质量控制、疾病诊断、实验室管理等关键词,助力医学检验人员快速掌握临床生物化学检验精髓。
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真菌学检验
真菌学概论
生物学特性
典型的真核细胞型微生物,有细胞核、完整的细胞器、细胞膜、细胞壁
不含有叶绿体,腐生或基生
细胞壁
含有几丁质
特异性存在
1,3-ß-D-葡聚糖
细菌细胞壁的主要化学成分是肽聚糖
检测方法设计的靶点,能特异性检出这些物质的存在,即为验证感染
G试验
真菌细胞壁具有1,3-ß-D-葡聚糖
人体吞噬细胞吞噬真菌后,释放1,3-ß-D-葡聚糖
能特异性检测,大部分真菌阳性
除了毛霉目真菌、荚膜念珠菌?
假阳性
白细胞较少时,也不能吞噬真菌,无法暴露1,3-ß-D-葡聚糖
隐球菌有很厚的荚膜,阴性结果
不含有1,3-ß-D-葡聚糖的真菌,不能检查出
毛霉目真菌
棘白菌素类抗真菌药物作用
GM试验
真菌细胞壁具有半乳甘露聚糖
但是和很多真菌有交叉反应,不能用于特异性检查
形态特征
单细胞真菌
酵母菌
菌体结构:孢子、没有菌丝
繁殖方式:出芽繁殖
形成酵母型菌落
光滑、湿润的菌落
⚠️隐球菌属、光滑念珠菌、无名念珠菌
酵母样菌(类酵母菌)
菌体结构:孢子、假菌丝
芽生孢子延长形成芽管,但是不断裂、不与母细胞脱离,产生相互连接成藕节状的细胞链
就是孢子的延长,可以伸入培养基内
⚠️藕节状细胞链
繁殖方式:出芽繁殖
形成类酵母型菌落
粗糙、干燥
⚠️念珠菌属绝大多数菌种
多细胞真菌
菌丝和孢子组成,又称丝状真菌、霉菌
繁殖方式:孢子
菌丝:孢子发育而成
不同丝状真菌的孢子和形态不同,是真菌形态学鉴别的重要依据
菌丝分类
有隔菌丝
菌丝中间有横隔的结构
🎋像竹子,最常见类型
无隔菌丝
整条菌丝就是单个细胞,细胞质内有多个细胞核
毛霉目真菌
不能隔断菌丝,不然就是破坏细胞胞体,体外不能培养了
功能不同分类
营养菌丝
气生菌丝
繁殖菌丝
形态不同分类
单细胞真菌:出芽繁殖,菌落形态较单一 多细胞真菌:芽孢繁殖,菌丝和孢子构成
二相性真菌
在不同温度下,生长的菌落不同
在光滑和粗糙型之间转化
相互转化条件
温度、O2、CO2浓度或以营养条件
分型
温度诱导型(主要)
马尔尼菲蓝状菌、申克孢子丝菌、 荚膜组织胞浆菌、副球孢子菌、粗球孢子菌、皮炎芽生菌等
非温度诱导型
35-37:酵母型菌落 22-28:丝状型菌落
温度较高,形成光滑的菌路
温度较低,形成较粗糙的菌落
孢子分类
真菌的孢子是繁殖结构,而不是抵抗的结构
区别于细菌的芽孢,是抵抗外界不良环境的形式
真菌芽孢有繁殖的作用,抵抗力不强
无性孢子
分生孢子
大分生孢子
只是形态较大而已
小分生孢子
梨形、椭圆形、圆形、棒形、卵形
绝大部分真菌都能产生小分生孢子,有种间鉴定的意义
叶状孢子
芽生孢子
关节孢子
厚膜孢子
由菌丝内细胞胞浆浓缩,细胞壁增厚,委托比不利环境而形成的休眠细胞,当条件适宜时又可以出芽繁殖
无性孢子多见于病原真菌
孢子囊孢子
有瓶梗、分生孢子梗等结构
就是一个小球球上面包着孢子
有性孢子
卵孢子
接合孢子
子囊孢子
有性孢子常见于非致病菌
培养繁殖
培养特性
沙保弱培养基
马铃薯葡萄糖琼脂
利于真菌产孢
营养条件相对较差,更利于真菌产生孢子
放线菌酮-氯霉素琼脂
放线菌酮抑制污染的真菌生长
氯霉素抑制污染的细菌生长
生长特性
浅部真菌:22-28
环境温度
生长较缓慢,需要1-4w长出典型菌落
深部真菌:35-37
人体温度
生长较快,3-4d即可长出
繁殖方式
无性繁殖
出芽
分裂
芽管
生隔
有性繁殖
两性细胞结合
常见感染性真菌
概述
皮肤黏膜感染(浅表感染
皮肤黏膜、毛发、脚趾甲
主要病原菌
皮肤癣菌、表面和皮下组织感染的真菌
侵袭性感染的真菌(深部感染
深部组织和脏器
念珠菌属、隐球菌属、曲霉菌、毛霉菌等
皮肤黏膜感染真菌
皮肤癣菌
毛癣菌属
红色毛癣菌、须癣毛癣菌
表皮癣菌属
絮状表皮癣菌
小孢子菌属
石膏样小孢子菌、犬小孢子菌
临床意义
毛癣菌属
侵犯人体皮肤、脚趾甲、毛发等角蛋白组织
嗜角质层
引起头、体、股、毛癣等
表皮癣菌
絮状表皮癣菌是唯一的致病菌
免疫力低下的患者可以引起侵袭性感染
小孢子菌属
⚠️主要感染皮肤和毛发,很少感染指甲
犬小孢子菌是人类头癣和体癣的常见原因,小儿多见
微生物检验
检验程序
直接镜检
标本采集
采取新发生皮损的边缘,新生长的病原菌更多
黑癣:用小镊子拔取无光泽的毛发
看ppt
25%KOH消化角蛋白后,直接压片镜检
可见到透明、有隔菌丝
菌丝常分枝
可见到成链的关节孢子
阳性率较低
分离培养
接种SDA沙保弱培养基或PDA马铃薯葡萄糖
菌种鉴定
最常用形态学鉴定
棉兰染色、小培养
辅助鉴定
质谱、分子生物学鉴定
常见皮肤黏膜真菌
红色毛癣菌
有柄的大分生孢子
菌落是红色的,产红色色素
石膏样毛癣菌
大分生孢子较少,腊肠样
中间有小凹陷,小分生孢子较多,葡萄串样
犬小孢子菌
小分生孢子较少,大分生孢子较多
梭形或纺锤形,白色羊毛状菌落
石膏样小孢子菌
结节状菌丝、大分生孢子,有小分生孢子、结节状菌丝等
没有柄的分生孢子
药敏试验
一般对咪唑类、特比萘芬等药物 敏感,临床治疗常两种药物联合使用。一般对于皮 肤癣菌的治疗不需进行药敏试验
侵袭性感染真菌
念珠菌属📿️
临床意义
口腔念珠菌病
白念珠菌引起鹅口疮
多见于HIV感染患者
留置管相关性念珠菌病
滞留管引起的致病菌,将常见定植菌带入到体内
引起血流感染
系统性、肝脾念珠菌
生物学特性
G+
出芽繁殖,是单细胞型菌落
结构:孢子和假菌丝构成
孢子是繁殖结构,直接形成芽生孢子
类酵母型菌落
光滑念珠菌和无名念珠菌是酵母型菌落,没有假菌丝
一般大多数念珠菌都是类酵母型菌落,有假菌丝和孢子
在玉米粉Tween-80琼脂上,能形成厚膜孢子
微生物检验
根据感染部位不同采集不同的标本,注意要采取新发的皮损作为检验位置
标本直接检查
25%KOH直接消化组织角蛋白
G+,可见假菌丝和孢子
其他检测方法
抗原、抗体、核酸检测
分离培养
在SDA、PDA、BAP培养基上均可生长
血平板上也可以生长,一般得到标本后都是全部接种的
培养条件
25-37度可以生长
都是需氧条件培养
菌落白色或奶油色,菌落大小和粗糙程度和菌种、培养基有关
培养物鉴定
科马嘉显色
白色念珠菌
半白半绿
光滑念珠菌
紫色
克柔念珠菌
粉色
热带念珠菌
蓝色
不能作为鉴定的金标准,鉴定能力有限
厚膜孢子形成实验
两性霉素B、三唑类、棘白菌素 类及5-氟胞嘧啶等
表型鉴定
质谱、分生检验
药敏试验
•克柔念珠菌氟康唑天然耐药;
临床治疗常选两性霉素B、三唑类、棘白菌素 类及5-氟胞嘧啶等
隐球菌属
临床意义
主要引起空气传播,好发于免疫功能低下的患者
都是条件致病菌
嗜中枢神经性菌,引起隐球菌脑膜炎
常引起肺部感染、血流播散
引起的是急性脑膜炎
常由鸽子粪便引起致病
生物学特性
有很厚的荚膜,折光性强
在墨汁负染下不被染上颜色
非致病性隐球菌无荚膜
也是G试验阴性的一种菌
微生物检验
标本采集根据感染位置,采集不同的标本
标本直接检查
墨汁染色阳性
格特隐球菌,墨汁染色也是阳性,但是不同的形态,椭圆形
其他染色方法
痰标本:革兰染色
痰标本:萋尼染色
不是最终判断的标准
隐球菌荚膜多糖抗原检测
荚膜多糖:隐球菌的主要致病因子、血清学分型和抗原检测靶点
对荚膜多糖抗原进行定性或定量检测,对隐球菌感染的诊断和疗效判断有重要意义
ELISA、胶体金、乳胶凝集法
分离培养及鉴定
新型隐球菌和格特隐球菌均可以在25、37度生长
SDA上菌落特征:粘稠、不透明、边缘整齐的奶白色或棕黄色菌落
BAP、巧克力、中国蓝平板上均可以长出
药敏试验
两性霉素B、联合氟胞
曲霉菌属
临床意义
条件致病菌
正常人少致病,免疫力低下患者容易引起曲霉病
毒素致病:黄曲霉、杂色曲霉素均能致病
微生物检验
KOH直接压片,可见有透明的有隔菌丝,鹿角样分枝,分枝夹角呈45度
痰标本和肺泡灌洗液都可以见到
鉴定实验
GM试验、G试验同时做
分离培养和鉴定
SDA、PDA分离培养
25、37都可以生长,37度生长较快
形态学检查常用
镜下形态检验
分生孢子
单层(双层)瓶梗
顶囊
分生孢子头
分生孢子梗
组细胞
曲霉菌特殊结构
壳细胞常见于构巢曲霉和黄曲霉
粉孢子(次生孢子)常见于土曲霉,目前发现唯一可以入血的曲霉菌
闭囊壳:有性生殖器官,壁薄、由一层或者多层角形细胞
有性生殖的器官
常见曲霉菌形态
烟曲霉
菌落烟灰色或蓝色,37-45生长良好,其他曲霉在这个温度下不生长
耐高温的特性
镜下形态
分生孢子梗:光滑
顶囊:倒置烧瓶状
瓶梗:单层、致密排列于顶囊上
分生孢子:圆形、光滑、蓝绿色
是菌落颜色
黄曲霉菌
菌落表面黄绿色,羊毛状
镜下形态
分生孢子梗:粗糙、黄绿色
顶囊:球状
瓶梗:单层后双层、松散的排列在整个顶囊上
分生孢子:球形、粗糙、黄绿色
黑曲霉菌
菌落初期是白色羊毛状,继而产生黑色或黑褐色孢子
镜下形态
分生孢子梗:无色或褐色
顶囊:球形
瓶梗:多为双层、放射状布满整个顶囊
更接近于圆形的孢子
分生孢子:圆形、光滑、黑色
是菌落颜色
药敏试验
曲霉菌对氟康唑天然耐药
毛霉目真菌
临床意义
条件致病菌,有基础疾病或免疫功能低下患者多见感染
常见糖尿病、恶性血液病等易感染
微生物检验
原则:快速报告临床
直接标本镜检:宽大的无隔菌丝
飘带样菌丝
标本直接镜检
钙荧光白染色
提高阳性率,都是一样的形态
分离培养
血培养阳性少见
环境中多见毛霉菌,很可能是血液标本被污染了
组织标本直接接种,不能研磨
不能破坏菌丝,直接一条就是一个细胞
分离培养及SDA、PDA
毛霉目菌基本结构
根霉属
菌落棉花样
镜下形态
有匍匐菌丝,假根
假根直接长出孢囊梗
孢囊梗不分枝,与假根对生
囊轴近球形
毛霉属
菌落羊毛样,偏黄色
镜下形态
无匍匐菌丝、无假根
孢囊梗直接由菌丝长出,不分枝
光溜溜的一支
横梗霉属
菌落后期黑色,早起白色
镜下形态
有匍匐菌丝、有假根
假根与孢囊梗侧生,长在外侧
孢囊梗常分枝
孢子囊孢子 球形或卵圆形
像梨
药敏试验
天然耐药:氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、棘白菌素类
预防用药:泊沙康唑
镰刀菌属
临床意义
常分布在农作物上,腐生菌
常见于角膜损失和穿透,引起角膜炎继发镰刀菌感染
免疫功能不全人群容易感染
常见:真菌血症
微生物检验
鉴定要点
小分生孢子聚集,形成假头状着生
也有大分生孢子,像镰刀状
大分生孢子较少,大分生孢子分隔
小分生孢子较多,短棒状或圆形
耶氏肺孢子菌
临床意义
抗真菌药物对耶氏肺孢子菌没用,首选复方新诺明
引起肺孢子肺炎
引起干咳、进行性呼吸困难
好发于免疫力低下患者,AIDS患者
可通过空气或飞沫传染
无基础免疫抑制人群中也有检出
生物学特性
以前被认为是原虫,体外不能培养
生活史
包囊、滋养体
包囊:感染阶段
滋养体:繁殖阶段
微生物检验
显微镜直接检查
痰、肺泡灌洗液中可检查得出,是确诊的重要依据
常规染色
吉萨姆染色、六胺银染色
六胺银染色不是这个菌的特异性染色
阳性亮绿色中有棕黑色的包囊
包囊是圆形或卵圆形
细胞壁局部增厚形成“单、双括号”样
其他实验室检查
持续的低氧血症
对抗真菌药物不敏感
G实验阳性
能检出葡聚糖