导图社区 5.自动生化分析技术
课本：临床生物化学检验技术（人卫出版社，第一版），本文提炼书中的重点内容，进行归纳整理，涵盖本书所有核心内容，非常方便大家学习。适用于考试复习、预习，提高学习效率。
课本：临床血液学检验技术（人卫出版社 第一版），本文提炼书中的重点内容，进行归纳整理，涵盖本书所有核心内容，非常方便大家学习。适用于考试复习、预习，提高学习效率。
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自动生化分析技术
概述
自动生化分析技术的发展
···类型
连续流动式
分立式
主要使用
离心式
干化学式
急诊等领域
实验室信息系统
自动生化分析技术带来的变革
提高临床实验室技术和管理水平
降低实验室的生物安全风险
提升实验室的服务水平
发展趋势
全实验室自动化
分立式自动生化分析仪的结构与功能
定义
按人工操作的方式编排程序，并以有序的机械操作代替手工操作，按程序依次完成加样、加试剂、搅拌、反应杯保温孵育、吸光度检测等各项操作。仪器由样本和试剂处理系统、反应系统、测定系统、清洗系统和计算机控制系统组成
结构
样本和试剂处理系统
样本盘或样本架
试剂盘和试剂瓶
取液装置
反应系统
反应盘和反应杯
反应杯材料：石英玻璃、硬质玻璃或丙烯酸塑料
混匀装置
恒温装置
水浴
空气浴
恒温液循环间接加热法
测定系统
光路系统
光源
卤钨灯，波长为325-850nm
最常用
比色杯
分光元件
信号检测器
清洗系统
去离子水
计算机控制系统
干化学式生化分析仪的结构和功能
干化学式生化分析仪与配套干片试剂组成一个检测系统，采用的是干化学分析技术，即将生化检测所需的试剂固定在具有多层复合膜结构的载体上，形成固相试剂，称为干片试剂。在干片试剂上滴加液态样本，样本中的水将固化于载体上的试剂溶解，再与样本中的待测成分发生化学反应
分析仪主要结构
取样装置、干片试剂、恒温装置、检测系统、计算机控制系统
原理：反射光光度法、荧光反射光度法和差示电位法
干片试剂的基本结构
多层膜类型
基于反射光度法的多层膜
基于差示电位法的离子选择电极多层膜
基于荧光技术和竞争免疫技术的荧光反射多层膜
多层膜基本结构（上→下）
扩散层
使标本均匀分布，并过滤大分子，将溶血、脂血及胆红素血的干扰降到最低
反应层
支持层
承载和支持
性能
一次性吸头避免携带污染
试剂固定在干片上避免交叉污染
不需要去离子水，省去许多装置，系统更为简单，提高分析速度
结构简单，维护保养简单，无废液排出
可避免干扰，如大分子蛋白质和脂质，Vc等
自动生化分析仪常用分析方法
终点法
样本中待测物与试剂发生特定的化学反应生成系统可检测的产物，当反应达到平衡时，产物不再增加，吸光度不改变，根据平衡点吸光度的大小即能算出被测物的浓度
分类
随反应的进行吸光度升高，到终点时吸光度达到最大——正向终点法 少数被测物在某波长处具有光吸收，经化学反应被消耗吸光度下降——负向终点法，如氧化法测定血清胆红素
一点终点法
反应达到平衡时，选择一个测光点的吸光度计算待测物浓度
测定总蛋白、白蛋白等的浓度
两点终点法
常用于双试剂的测定项目，R1（缓冲液）一般没有特异性反应，R2加入前，选择某个时间点作为第一个测光点，此时吸光度为样本空白（Am），加入R2.反应开始，经过一段时间反应达到平衡，此时第二个测光点的吸光度（An），两个吸光度之差用于计算待测物浓度
可有效消除样本溶血、黄疸和脂浊等造成的干扰
酶法测定葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯、尿酸、肌酐 化学法测定总蛋白、胆红素、钙、磷、镁、铁等
固定时间法
选择中间一般反应，没有干扰物的存在
苦味酸法测肌酐、溴甲酚氯法测血清白蛋白
连续监测法
测定酶活性或酶法测定代谢产物时，线性期内4个以上测光点的吸光度，计算单位时间吸光度变化值，即酶促反应初速度，与酶活性成正比
比浊法
通过测定微粒性物质对光的散射或投射强度来测定物质的浓度，主要用于测定能形成悬浮体的颗粒物质
采用终点法，尤其是两点终点法
化学比浊法
待测物经化学反应形成的微细沉淀，计算颗粒浓度
三氯乙酸、磺基水杨酸法测尿液、脑脊液中蛋白质
免疫比浊法
待测物经抗原抗体反应形成可溶性免疫复合物，计算浊度变化
在自动生化分析仪上只能采用免疫透射比浊法，用于血清、脑脊液中特种蛋白的测定，如ApoAⅠ、ApoB、前白蛋白（PA）、hs-CRP、β2-MG、尿白蛋白（mAlb）等
自动生化分析仪的参数设置
基本分析参数（通用分析参数）
项目名称
样本量与试剂量
样本体积分数SVF
SVF越大，灵敏度越高，但线性范围越窄
不可随意修改，会影响检测灵敏度和检测上限
试剂的选择
温度的选择
一般为37℃，还有30℃和25℃
分析方法选择
测定时间选择
波长选择
波长大小
待测物光吸收最大，干扰物光吸收最小
单波长和双波长
单波长法
用一个波长检测物质的光吸收强度的方法，当测定体系中只含有一种组分或混合溶液中待测物的吸收峰与其他共存物质的吸收峰不存在重叠时，可选用
双波长法
干扰物有较大吸收峰或溶液浑浊时会出现光散射和非特异性光吸收没从而影响准确性，需要采用不同波长，即测量波长（主波长）和参比波长（次波长）
使用次波长的目的
消除噪声干扰
减少样本本身光吸收的干扰
对浑浊溶液可减少杂散光影响
主次波长选择原则
主波长时被测物吸收峰所处的波长，应选择距被测物吸收峰最近处，尽量避开来自试剂光吸收等的干扰
次波长，使产物在主、次波长处的吸光度有较大差异，而干扰物在主、次波长处有尽可能相同的吸光度
特殊分析参数（质量保证参数）的设置
试剂吸光度检查
试剂空白吸光度
试剂本身有一定吸光度
试剂空白速率
某些试剂于检测过程的短时间内可能发生较为明显的自身分解等变化，使测定结果偏高或偏低，设置此参数便能在待测物反应的吸光度变化速率中减去试剂空白速率，从而消除或减少这类误差
酶活性测定准确度的监测
线性检查
线性回归，方差判断
弹性速率设置
底物消耗限值
超过则说明底物消耗过多，不足以维持零级反应，结果不准确
样本性状监测
判断样本溶血、脂浊和黄疸程度
线性范围的选择
自动生化分析仪的操作流程
仪器准备
室内质控分析
室内质控是各临床实验室为了监测和评价本室工作质量，以决定常规检验报告能否发出所采取的一系列检查、控制手段，主要目的是检测和控制本实验室常规工作的精密度，以提高本实验室常规工作中批间和日间样本检测结果的一致性
设定均值和标准差
失控的处理程序
特殊质控项目的处理方法
样本检测
项目录入
样本上机及测定
急诊检验
过程监控
检验报告审核
内容的完整性
数据的有效性
结果的符合性
结果的正确性
报告的时效性
检验危急值
某项或某类检验结果异常升高或降低，一旦出现这样的检验结果，表明患者可能正处于有生命危险的边缘状态，需要立刻报告给临床医生，以便其立即采取相应的治疗措施，否则将会因为错过最佳治疗机会而使患者的生命安全受到威胁
危急值项目
危急值的处理步骤
仪器的维护保养
每日维护
每周维护
每月维护
不定期维护
检测系统的校准和性能评价
检测系统的校准
校准的定义
也称定标，指在规定条件下，为确定测量仪器或测量系统所指示的值、实物量具或参考物质所代表的值与相对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作
校准方法
单点校准
大多数检测项目的校准曲线呈直线且通过原点
两点校准
校准曲线呈直线但不通过原点
多点校准
校准曲线不呈直线而呈曲线
校准品
含有已知量的待测物，用以校准检测系统的测定值
酶活性测定的校准
检测系统主要的性能指标
准确度和精密度
分析速度
加样周期
测试循环周期
实用性
