细菌生化鉴定技术

这是一篇关于细菌生化鉴定技术的思维导图，主要内容包括：碳水化合物代谢实验。每种试验都详细描述了其原理、所需的培养基和试剂、试验方法、结果判断以及应用。

细菌生化鉴定技术

• 碳水化合物代谢实验
  • 糖（醇,苷)类发酵试验
    • 原理：细菌对糖的分解特性（有的仅产酸，有的产酸产气）
    • 培养基：糖(醇）发酵培养基
    • 酸碱指示剂：酚红，溴甲酚蓝
    • 方法：将菌种接种培养基上，35℃恒温箱培养18--24h
    • 结果：1.细菌产酸指示剂呈酸性反映 2.产气则液体培养基中倒置小管出现气泡（固体培养基出现裂痕） 3.不分解糖类培养基无颜色变化
    • 应用：鉴定细菌最基本实验，肠杆菌科鉴定主要实验
  • 葡萄糖氧化/发酵试验
    • O/F试验或Hugh-Leifsion(HL)试验
    • 原理：细菌分解GS（葡萄糖）的过程对氧分子的需求不同分为 1.氧化型：细菌仅在无氧环境分解GS，无氧不分解 2.发酵型：细菌在有氧无氧环境中都能分解GS 3.产碱型：细菌在有氧或无氧环境中都不能分解GS
    • 培养基：HL葡萄糖培养基
    • 指示剂：溴麝香草酚蓝，溴甲分子
      • 1.溴：碱--绿|酸--黄2.碱--紫|酸--黄
    • 方法：取两只培养基沸水中水浴10min（驱逐培养基氧气），冷却后接种 1.加灭菌的液状石蜡覆盖（与空气隔绝) 2.不加（暴露于空气中）35℃培养18--24小时
    • 结果：1.产碱型：2管都不变色 2.发酵型：2管都变黄（产酸）(大肠埃希菌） 3.氧化型：石蜡管不变黄，不加管变黄（铜绿假单胞菌）
    • 应用：1.科：肠杆菌(发酵型F)和非发酵菌(氧化型O)鉴别2.属：葡萄球菌（发酵型F）与微球菌（氧化型O）
  • 甲基红试验
    • MR试验
    • 原理：细菌发酵底物GS产生丙酮酸，丙酮酸分解成甲酸、乙酸、乳酸等混合物，使培养基PH下降至4.4以下|PH在5.4以上
    • 培养基：葡萄糖蛋白胨水中
    • 指示剂：甲基红
      • 1.酸（PH<4.4）--红色--阳性2.碱（PH>5.4）--黄色--阴性
    • 方法：待检菌接种，35℃培养18--25h，(看结果前加试剂）滴加甲基红试剂
    • 结果：1.阳性--红色 2.阴性--黄色 3.弱阳性--（4.4<PH<5.4）橙红色
    • 应用：肠杆菌科鉴别
  • VP试验
    • 原理：细菌发酵底物GS产生丙酮酸，使丙酮酸脱羧生成中性乙酰甲基甲醇，在碱性环境被空气氧化成二乙酰，二乙酰与培养基蛋白胨中精氨酸所含的胍基反应（试验加入α-萘酚，试验速度加快）
    • 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养
    • 指示剂：0.3％肌酸，肌酐的40％KOH
    • 方法：待测菌接种，35℃培养18--24h，（看结果前加试剂），按每毫升培养基加入0.3％肌酸/肌酐的40％KOH溶液0.1ml（提供碱性条件）
    • 结果：1.阳性--红色2.阴性--无红色出现
    • 应用：肠杆菌科细菌鉴别（与甲基红试验联合使用，甲基红阳性，VP阴性）
  • β-半乳糖苷酶试验
    • ONPG试验
    • 原理：细菌产生β-半乳糖苷酶，能分解邻硝基酚β-D半乳糖苷（ONPG）而生成黄色邻硝基苯酚
    • 培养基：1％乳糖肉汤琼脂培养基
    • 试剂：甲苯，ONPG
    • 方法：将细菌接种培养基上，35℃培养18--24h，取菌落于0.25ml生理盐水制成菌悬液，加入一滴甲苯充分振摇，37℃水浴5min，使酶释放，加入0.25ONPG，混匀置于37℃水浴中温浴
    • 结果:阳性--黄色
    • 应用：迟缓发酵乳糖的细菌鉴定（宋内志贺菌）
  • 七叶苷水解试验
    • 原理：细菌能分解七叶苷产生葡萄糖与七叶素，七叶素与培养基中的Fe2+结合形成黑色化合物，使培养基变黑
    • 培养基：七叶苷培养基
    • 显色剂：Fe2+（黑色）
    • 方法：将待检菌接种到培养基上，观察
    • 结果：1.阳性--黑色2.阴性--不变色
    • 应用：1.D群链球菌（阳性）与其他链球菌（阴性）鉴别2.肠杆菌科细菌，其他革兰氏阴性菌，厌氧菌鉴定