生物-原核表达蛋白PAGE电泳检测

一篇关于生物-原核表达蛋白PAGE电泳检测，包含配制蛋白上样缓冲液、配制蛋白胶脱色液等。

原核表达蛋白PAGE电泳检测

• 1.制PAGE胶
  • PAGE胶组分 水 30% AB Tris-HCL 10% SDS 10% AP TEMED
    • 分离胶按顺序加完灌胶后，接 着加1ml异丙醇在分离胶表面覆 盖，去除气泡，保持胶面平整
      • 静置30min，倒掉异丙醇， 用吸水纸吸干，分离胶凝固后 再做浓缩胶
        • 浓缩胶按顺序加完灌胶后，立即插 入梳子，静置15min-30min
• 2.配制蛋白上样缓冲液
  • 1.5 ml离心管离心收集0.5 ml菌
    • 转化（GST、MBP标签蛋白）未 诱导表达菌、转化（GST、MBP标签蛋白）诱导表达菌
    • 12000 rpm，1 min, RT
      • 弃 上清，加入60 ul蛋白上样缓冲液
        • 枪吸打重悬菌
          • 95℃，5 min
            • 12000 rpm，1 min, RT
• 3.点样
  • 每个孔10 ul-20u
• 4.电泳（140V，1小时）
  • 电泳以后需切掉浓缩胶，留下分离胶
• 5.配制蛋白胶染色液
  • 已统一配好，可回收重复用
  • 染胶，加热促进染色（煮沸后盖上盖子 放置2-3分钟）
• 6.配制蛋白胶脱色液
  • 已统一配好
  • 加热促进脱色（煮煮）
    • 拍照