菌落总数测定-单增李斯特氏菌

这是一篇关于菌落总数测定的思维导图，主要内容包括单增李斯特氏菌• 标准：GB 4789.30-2016、菌落总数测定• 标准: GB 4789.2-2022

菌落 总数 测定

• 仪器：试管*9（配胶头塞）、锥形瓶*2、量筒100ml、烧杯、培养皿*8、蒸馏水250ml、试管*5、容量瓶250ml
• 上午：1.配置0.85%生理盐水（2.12g+250ml水)、分装为225ml+9ml*3(试管）; 2.平板技术琼脂（3.05g+100ml水、煮沸）； 3.移液枪吸头1ml*5、试管、培养皿
  • 高压蒸汽灭菌法
    • 生理盐水冷却至常温、培养皿干燥
• 下午：配置样品匀液，生理盐水225+25g样品--拍打--为1:10（A1)；
  • A1再稀释10倍为A2；再稀释为A3
    • 每个A取1ml于皿内，每个稀释度做2个皿，同时取生理盐水做两个空白对照组。将15-20ml冷却至46-50℃的平板计数琼脂倾注培养皿，转动使其混合均匀。
      • 待其凝固后，翻转，72±3h、30℃培养
        • 取30-300以内的根据公式计数；低于30的直接计数，大于300的为多不可计
• 若有水珠置于25-50℃培养箱中干燥至无
• 单增李 斯特氏菌
  • LB1:配置225mL 将其加热溶解、PH调到7.2±0.2加入1%萘啶酮酸 0.5ml、1%吖啶黄 0.3ml； LB2:配置30m， 将其加热溶解、PH调到7.2±0.2加入1%萘啶酮酸 0.4ml、1%吖啶黄 0.5ml； PALCAM琼脂平板*3：3.695g+50ml水加热煮沸、高压蒸汽灭菌后冷却至50℃、（每100ml加入P-104PALCAM选择添加剂一支） 无菌L棒、移液枪头1ml* 、锥形瓶*3、试管*5
  • 定性检验
    • 25g样品+225ml LB1, 24±2h、30℃培养
      • 配置LB2(30ml:3*10ml）、
      • 0.1ml样品匀液+10ml LB2 24±2h、30℃培养(3管）
        • 李斯特氏菌显色平板或者PALCAM平板、24-48h、36℃培养
          • 接生化套装、染色 镜检（用生理盐水制 成菌悬液，在油镜下观察为轻微旋转 或翻滚样的运动)
  • 平板计数法
    • 缓冲蛋白胨水:225ml+9ml*3试管， ；
    • 25g样品+225ml缓冲蛋白胨水--拍打为1:10（D1)；稀释10倍为D2
      • 每个稀释度样品分别取0.3、0.3、0.4ml分别接种至李斯特氏菌显色平板（*6），用无菌L棒涂布平板、静置10min，样品匀液吸收后倒置于培养箱，24-48h、36℃
        • 观察特征，若连续稀释度在15-150 CFU之间按公式2计算。