核酸杂交技术

临床分子检验之核酸杂交技术知识总结，包括核酸的变性、分子杂交、核酸分子杂交的概念、经典的核酸分子杂交技术等内容。

核酸杂交技术

• n：核酸的变性、分子杂交
• 核酸分子杂交的概念
  • 核酸探针的种类
    • n：核酸探针
    • 核酸探针的种类
      • 基因组DNA探针
      • cDNA探针
      • RNA探针
      • 寡核苷酸探针
    • 探针的长度
    • 核酸探针的标记
      • 探针标记物的选择
        • 放射性标记(3H、32P、35S、125I)
        • 非放射性标记（荧光素标记、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶）
      • 探针标记方法的选择
        • 随机引物标记
        • DNA缺口平移标记
  • 分子杂交信号检测
    • 非放射性标记探针的杂交检测：酶促显色检测
      • 直接检测：碱性磷酸酶-NBT（酶的底物）、辣根过氧化物酶-DAB
      • 间接检测：间接免疫法（反应放大）
      • 直接亲和法（ABC法）
• 经典的核酸分子杂交技术
  • 液相杂交
  • 固相杂交
    • 菌落杂交
    • 反向点杂交（基因芯片是反向点杂交的延伸），标记的都是样品，临床大规模筛查
    • 斑点杂交（PCR-ASO)
    • Southern印迹杂交
      • 步骤:1.提取2.酶切3.电泳4.转模5.与探针杂交6.检测（放射-显影、非放射-显色）
      • 检测DNA分子，可用来检测基因缺失
    • Northern印迹杂交
      • 步骤：1.提取总RNA2.变性电泳3.转模4.预杂交、Northern杂交5.检测6.结果分析
      • 检测RNA分子（RNA病毒的检测、基因表达的检测）
  • 原位杂交：用于基因定位分析
    • 荧光原位杂交（FISH)