配制裂解液：包含PMSF（蛋白酶抑制剂）和磷酸酶抑制剂（都稀释至1个单位）。配好后放在冰中保存。
裂解细胞：先倒掉旧培养基，再用PBS溶液或生理盐水清洗洗去药物和培养基等，最好用37℃的PBS，动作温柔，避免将细胞冲掉（不能直接冲底部）。将残余的液体都吸干净，否则影响裂解效果。
（操作在冰盒上进行，避免蛋白降解或被酶水解）6孔板每孔加100微升（或80μL）裂解液，再用细胞刮刀将孔底的细胞都刮下来，可以边刮边磕，最后都归到边上。
六孔板拿出来就应该放进冰箱或冰上。如果里面没液体可以倒置放着。
将获取的细胞裂解液放置冰浴30min，继续裂解（可以振荡1次，裂解10min）
离心：将得到的裂解液离心。离心机预冷到4℃。12000r，10min。
将上清液（定量，根据之前家的裂解液体积估计，用于之后定量计算）吸出（注意不要碰到沉淀）转移到写有标记的ep管中，即为初步的提取蛋白溶液。
BCA定量测定：配制标准曲线和测定的反应试剂。将提取的蛋白溶液、标准样等都各自加到96孔板中，做好标记。按说明书加反应试剂，孵育30min，在酶标仪中测定吸光度562nm
每孔先加蛋白溶液（样品或标准含量的蛋白质溶液BSA）（20μL），再加试剂200μL（A:B=50:1，配好后最好避光保存）
对样品可以先做预实验，有一个浓度的参考值，然后接下来要测的时候可以将样品稀释至标曲中的浓度
数据处理：做标准曲线，计算各样品中蛋白质的浓度。加裂解液使浓度统一（一般选浓度最低的，高的可以靠稀释），再加loading buffer（5×），需要按原体积加裂解液的体积除以4进行计算，正好稀释五倍，是所需的缓冲液的体积。
加完后需要震荡和离心。
将蛋白浓度统一之后（便于进行WB实验定量），在金属浴99℃中处理5min使蛋白变性。处理完后可以松一下盖子再盖上，放一下膨胀的空气。放在-20℃中保存。蛋白质样品制备完成。
