导图社区 常用分子生物学技术的原理及其应用
《生物化学与分子生物学》第二十章 常用分子生物学技术的原理及其应用笔记,包括分子杂交与印迹技术、PCR 技术的原理与应用、生物大分子相互作用研究技术等内容。
思维导图总结了2025年高考报名本科专业,包括 13个学科门类(如工学、理学、艺术学等)及其下设的专业大类和具体专业。通过层级结构清晰展示学科分类,并突出交叉学科和国家战略相关专业,帮助考生、教师快速了解专业布局变化,为志愿填报和学科规划提供参考。
总结主编钟赣生的《中药学》知识点,包含解表药、清热药、泻下药、祛风湿药等21个章节的内容,由于考虑文件太大的缘故,只展示前两章药物的图片。希望对大家学习《中药学》这一课程有所帮助。
总结化学研究生必会技能,包含文献阅读、组会回报、实验操作、数据处理、论文撰写,这些常见问题的处理和总结。
社区模板帮助中心,点此进入>>
英语词性
法理
刑法总则
【华政插班生】文学常识-先秦
【华政插班生】文学常识-秦汉
文学常识:魏晋南北朝
【华政插班生】文学常识-隋唐五代
民法分论
日语高考動詞の活用
第14章DNA的生物合成读书笔记
20 第二十章 常用分子生物学技术的原理及其应用
分子杂交与印迹技术 P405
分子杂交和印迹技术的原理
印迹技术
转移到 NC 膜上,使之成为固相化分子。将载有 DNA 单链分子的 NC 膜放在杂交反应溶液中,溶液中具有互补序列的 DNA 或 RNA 单链分子就可以结合到存在于 NC 膜上的 DNA 分子上。这一技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹,因此称之为“bloting",译为印迹技术
探针技术
探针指的是带有特殊可检测标记的核酸片段,它具有特定的序列,能够与待测的核酸片段互补结合,因此可以用于检测核酸样品中存在的特定基因
印迹技术的类别及应用
DNA 印迹
主要用于基因组DNA的定性和定量分析,也可用于分析重组质粒和噬菌体
RNA 印迹
用于检测某一组织或细胞中已知的特异 mRNA 的表达水平,也可以比较不同组织和细胞中的同一基因的表达情况
蛋白质印迹
用于检测样品中特异性蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及蛋白质分子的相互作用研究等
PCR 技术的原理与应用 P407
PCR 技术的工作原理
PCR 的基本反应步骤包括
①变性:将反应体系加热至94°C,使模板DNA完全变性成为单链,同时引物自身以及引物之间存在的局部双链也得以消除
②退火:将温度下降至适宜温度(一般较Tm低 5℃),使引物与模板 DNA 结合
③延伸:将温度升至72℃,DNA 聚合酶以 dNTP 为底物催化 DNA 的合成反应
上述3个步骤称为 1 个循环,新合成的 DNA 分子继续作为下一轮合成的模板,经多次循环(25~30次)后即可达到扩增 DNA 片段的目的
PCR技术的主要用途
目的基因的克隆
PCR 技术为在重组 DNA 过程中获得目的基因片段提供了简便快速的方法
基因的体外突变
DNA 和 RNA 的微量分析
PCR 技术高度敏感,,对模板 DNA 的量要求很低,是 DNA 和 RNA 微量分析最好的方法
DNA 序列测定
将 PCR 技术引入 DNA 序列测定,使测序工作大为简化,也提高了测序的速度。待测DNA片段既可克隆到特定的载体后进行序列测定,也可直接测定
基因突变分析
PCR 与其他技术的结合可以大大提高基因突变检测的敏感性,例如单链构象多态性分析、等位基因特异的寡核苷酸探针分析基因芯片技术等
几种重要的 PCR 衍生技术
逆转录 PCR 技术
原位 PCR 技术
实时 PCR 技术
TaqMan 探针法
分子信标探针法
FRET 探针法
基因文库 P411
基因组DNA文库
基因组 DNA 文库以 DNA 片段的形式贮存着某一生物的全部基因组 DNA(包括所有的编码区和非编码区)信息。基因组 DNA 文库的构建过程是将纯化的细胞基因组 DNA 用适当的限制性内切酶消化,获得一定大小的 DNA 片段(20 kb左右),将这些片段克隆到噬菌体载体中,从而获得一群含有不同 DNA 片段的噬菌体,这就是基因组文库
cDNA 文库
从 cDNA 文库中筛选含有目的基因的克隆也可以用核酸分子杂交方法进行。另外,用表达型载体(可以在宿主菌内表达插人基因)构建的 cDNA 文库还可以利用特异性抗体或特异性结合蛋白筛选目的基因
生物大分子相互作用研究技术 P413
蛋白质相互作用研究技术
标签蛋白沉淀
酵母双杂交技术的原理和用途
酵母双杂交系统可以用于
①证明两种已知基因序列的蛋白质可以相互作用
②分析已知存在相互作用的两种蛋白质分子的相互作用功能结构域或关键氨基酸残基
③将待研究蛋白质的编码基因与 BD 基因融合成为“诱饵”表达质粒,可以筛选 AD 基因融合的“猎物”基因的 cDNA 表达文库,获得未知的相互作用蛋白质
DNA-蛋白质相互作用分析技术
电泳迁移率变动分析
染色质免疫沉淀技术
生物芯片技术 P412
基因芯片
基因芯片是指将许多特定的 DNA 片段有规律地紧密排列固定于单位面积的支持物上,然后与待测的荧光标记样品进行杂交,杂交后用荧光检测系统等对芯片进行扫描,通过计算机系统对每一位点的荧光信号做出检测、比较和分析,从而迅速得出定性和定量的结果
蛋白质芯片
蛋白质芯片是将高度密集排列的蛋白质分子作为探针点阵固定在固相支持物上,当与待测蛋白样品反应时,可捕获样品中的靶蛋白,再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量分析的一种技术
蛋白质芯片的基本原理是蛋白质分子间的亲和反应