nano-ITC仪器使用方法

nano-ITC仪器使用方法总结，包括它的实验组别设置，实验操作的测试过程、数据处理、仪器维护、仪器清晰方法等。

nanoITC仪器使用

• 实验组别设置
  • 药物滴蛋白
    • 体系一样
      • 实验组
        • 药物滴蛋白
      • 对照组
        • 药物滴buffer
    • 体系不一样
      • 例：A药物溶解于PBS+5%DMSO，B溶解于PBS
        • 对照组
          • 药物滴蛋白
        • 实验组
          • A滴加到B的bufer里
          • A的buffer，滴加到B的bufer里
          • A的buffer，滴加到B里
          • 概要
• 实验操作
  • 测试过程
    • 准备药物，蛋白
      • 蛋最少200-300ul
      • 体积最好与参比的体积差不多，如果不一致，平衡时间会更长
      • 药物浓度是蛋白浓度的10倍以上
        • 可以根据解离常数准备样品
          • Kd μM小于0.5，蛋白浓度10μM，配体100μM
          • Kd μM在0.5-2之间，蛋白浓度20μM，配体200μM
          • Kd μM在2-10之间，蛋白浓度50μM，配体500μM
          • Kd μM在10-100之间，蛋白浓度30μM，配体40倍Kd
        • 如果不知道，可以就配置20μM的蛋白，200μM的配体
    • 先开机，再打开软件
    • 参比
      • 可以直接放水
    • 可以样品池300，参比池300
  • 数据处理
    • 打开样品
      • 打开空白
        • 单击左侧样品列表，点exo调节吸热放热
    • area
      • 左键点击对照组拖至blank
    • 输入药品浓度，syringe conc
      • 输入蛋白浓度cell conc
    • 点modeling
      • style
        • independent（代表结合位点之间不干扰，multi代表结合位点之间有干扰）
          • 点击播放键拟合
    • 点击最右侧graph style
      • model variables（显示计算结果等）
    • 导出图片(可直接放文章里)
      • export to file
        • image
          • EMF
            • 选择位置
              • export
  • 仪器维护
    • 长期不用，将池子中液体抽出，保持干燥
  • 数据分析、美化
    • 标准S曲线
      • 方法一
        • 缩小药物浓度
      • 方法二
        • 同时增加药物浓度，蛋白浓度
    • 检查基线并调整，调整积分位置“0”+，“□”扣除基线
    • 拟合，可以多拟合几次，如果还是不行，再增加一个辅助拟合模型"blank"(就是第一个模型)
    • 移除异常数据点，鼠标移到相应点，变成手型后，再点击改点，该点就变成灰色，然后就不参与拟合。若想改点在最终图片里不展示，在最右侧可以选择
• 仪器清洗方法
  • 常规
    • 2.5%除垢剂清洗200ml，再超纯水清洗1000ml
  • 苛刻
    • 4M氢氧化钠升温浸泡
      • 1L水清洗
        • 50%甲酸，升温浸泡
          • 再1L水清洗
• 其他
  • 仪器工作温度
    • 2-80度
  • 结合常数检测限
    • 10的2次方到9次方
      • 结合常数达到5次方认为是很强结合了
  • 结合常数Ka，单位为M-1；解离常数为Kd，是结合常数的倒数，通常是负多少次方。结合常数则是正的
  • n=2代表一个蛋白上结合两个药物分子
  • 焓、熵同时驱动结合的药物效果较好，焓变驱动的也行，熵变驱动的药效最差
  • 如果更改温度，设置好之后要点击update