荧光法导图笔记

食品分析中荧光法导图笔记，讲述了原理、测定步骤、标准曲线的制备、试样测定、结果计算、注意事项等，收藏下图了解吧！

荧光法

• 原理
  • 试样中 L(+)-抗坏血酸经活性炭氧化为 L(+)-脱氢抗坏血酸后,与邻苯二胺(OPDA)反应生成有荧光的喹唔啉(quinoxaline),其荧光强度与 L(+)-抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定试样中 L(+)-抗坏血酸总量。注:L(+)-脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与 OPDA 反应,以此排除试样中荧光杂质产生的干扰。
• 测定步骤
  • 氧化处理:分别准确吸取50mL试样滤液及抗坏血酸标准工作液于200mL具塞锥形瓶中,加 入2g活性炭,用力振摇1min,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即为试样氧化液和 标准氧化液,待测定
  • 分别准确吸取10mL试样氧化液于两个100mL容量瓶中,作为“试样液”和“试样空白液”。
  • 分别准确吸取10mL标准氧化液于两个100mL容量瓶中,作为“标准液”和“标准空白液”。
  • 于“试样空白液”和“标准空白液”中各加5mL硼酸-乙酸钠溶液,混合摇动15min,用水稀释至 100mL,在4 ℃冰箱中放置2h~3h,取出待测。
  • 于“试样液”和“标准液”中各加5mL的500g/L乙酸钠溶液,用水稀释至100mL,待测。
• 标准曲线的制备
  • 准确吸取上述“标准液”[L(+)-抗坏血酸含量10μg/mL]0.5mL,1.0mL,1.5mL,2.0mL,分别置于10mL具塞刻度试管中,用水补充至2.0mL。另准确吸取“标准空白液”2mL于10mL带盖刻度试管中。在暗室迅速向各管中加入5 mL 邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35 min,于激发波长338nm、发射波长420nm 处测定荧光强度。以“标准液”系列荧光强度分别减去“标准空白液”荧光强度的差值为纵坐标,对应的 L(+)-抗坏血酸含量为横坐标,绘制标准曲线或计算直线回归方程。
• 试样测定
  • 分别准确吸取2mL“试样液”和“试样空白液”于10mL 具塞刻度试管中,在暗室迅速向各管中加 入5mL邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35min,于激发波长338nm、发射波长420nm 处测定 荧光强度。以“试样液”荧光强度减去“试样空白液”的荧光强度的差值于标准曲线上查得或回归方程计 算测定试样溶液中 L(+)-抗坏血酸总量。
• 结果计算
  • X =c×VF/m × 100/1000
    • X ———试样中 L(+)-抗坏血酸的总量,单位为毫克每百克(mg/100g); c ———由标准曲线查得或回归方程计算的进样液中 L(+)-抗坏血酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V ———荧光反应所用试样体积,单位为毫升(mL); m ———实际检测试样质量,单位克（g） F ———试样溶液的稀释倍数;
• 注意事项
  • 1.大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用偏磷酸醋酸提取液将样品制成匀浆以保存维生素C。 2. 某些果胶含量高的样品不易过滤，可采用抽滤的方法，也可先离心，再取.上清液过滤。 3.活性 炭可将抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，但它也有吸附抗坏血酸的作用，故活性炭用量应适当与准确，所以，应用天平称量。