基因文库

基因文库包括基因文库的概念和类别、DNA文库的构建和cDNA文库的构建三部分内容，本图知识梳理清楚，非常实用，值得收藏。

基因文库

• 基因文库的概念和类别
  • 基因文库的概念
  • 基因文库的类别
    • DNA文库(基因组DNA文库)
    • cDNA文库
• DNA文库的构建
  • 选择载体一λ-噬菌体载体; 粘粒载体;人工染色体载体
  • 高分子量核DNA和载体DNA的制备
    • 核酸制备技术的概述
      • 核酸制备基本概念
      • 核酸制备的一般要求——完整性好;纯度高;产量足
      • 核酸提取的主要步骤
    • DNA提取与分离
  • 高分子核DNA和载体的酶解及分离纯化
    • 高分子量核DNA的部分酶解，与载体载量匹配的、长度相似的片段的分离
    • 载体的酶解与纯化
      • 载体的酶解
      • 载体臂的纯化
  • 体外包装提取物的制备
  • DNA的连接
    • 连接反应的底物浓度
    • 连接反应体系
    • 连接反应的电泳检测
  • 体外包装和包装物滴度的测定
  • 基因文库扩增、分装及保存
  • 从基因文库中筛选目的基因
    • 筛选目的基因所需克隆数
    • 筛选的方法
      • DNA的杂交筛选
      • 通过免疫反应筛选
      • 通过酶活性筛选
• cDNA文库的构建
  • cDNA文库的特点与应用
  • mRNA的分离纯化
    • 真核mRNA的特点
    • mRNA的提取要点
      • 关键是保证mRNA的完整性
      • 注意除去DNA
    • mRNA的分离方法一 和层析法;磁珠法
    • mRNA的检测方法
  • cDNA的合成
    • 第一链的合成
    • cDNA第二 链的合成
      • 自身引导法
      • 置换合成法
      • 反转录PCR法
  • 双链cDNA的克隆
    • 使用质粒载体的同聚物加尾法
    • Linker/adaptor法
    • cDNA PCR产物的克隆
  • 从cDNA文库中筛选目的基因
    • 筛选目的基因所需克隆数
    • 筛选cDNA文库的方法
      • DNA的杂交筛选
      • 通过免疫反应筛选
      • 通过酶活性筛选