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色谱绪论
基本原理
利用混合物中各组分理化性质的差异,使各组分在固定相和流动相中分布程度不同,从而使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的
本质是一种分离方法
分离过程是一个物理过程
特点
高分离效能、高灵敏度、高选择性、分析速度快(定性、定量分析)、应用范围广
基本概念
固定相
是色谱的一个基质,能与待分离的化合物进行可逆的吸附、溶解、交换作用
可以是固体(如吸附剂、凝胶、离子交换剂等),也可以是液体(如固定在硅胶或纤维素上的溶液)
流动相
在色谱过程中,推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体等
柱色谱中一般称为洗脱剂,薄层色谱时称为展层剂
色谱过程
基本条件:必须具备相对运动的两相,固定相和流动相
组分的分子在流动相和固定相间多次“分配” 的过程
组分结构和性质微小差异→与固定相作用差异→随流动相移动的速度不等→差速迁移→色谱分离
色谱图
色谱柱流出物通过检测器是所产生的响应信号对时间的曲线图,纵坐标为信号强度,横坐标为时间
色谱峰
色谱柱流出组分通过检测器产生的响应信号
峰比预想的小:样品黏度过大
双峰或肩峰:进样量或样品浓度过大,保护柱或色谱柱进口堵塞
峰底
峰的起点与终点之间连接的直线
峰高
峰最大值到峰底的距离
切线峰宽
在峰两侧拐点处所做切线与峰底相交两点之间的距离
半(高)峰宽
通过峰高的中点作平行于峰底的直线,其余峰两侧相交两点之间的距离
峰面积
峰与峰底之间的面积,又称响应值
进样量和峰面积不是线性关系:样品在流动相中溶解度小,只有部分样品被流动相冲入色谱柱中而另一部分沉积在柱入口端
标准偏差
0.607倍峰高对应峰宽的一半
拖尾峰
后沿较前沿平缓的不对称峰
被固定相吸附太紧密(比如碱性的样品过酸性柱子)
前伸峰
前沿较后沿平缓的不对称峰
过载,样品加太多了,浓度过大,可以先稀释
鬼峰
并非由试样产生的峰,亦称假峰
基线
在正常操作条件下,仅由流动相产生的响应信号
基线漂移
基线随时间定向的缓慢变化
可能是因为检测器本身性能不佳,柱温或载气流速缓慢变化
基线噪声
由各种因素引起的基线波动
可能是因为载气流速的波动,柱温波动,固定液流失等
谱带扩展
由于纵向扩散、传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加
载体表面活性吸附中心造成拖尾
死时间(t0)
不被固定相滞流的组分,从进样到出现峰最大值所需的时间
死体积
不被固定相滞流的组分,从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
死时间×流动相流速
保留时间
组分从进样到出现峰最大值所需时间
同一个柱子各次运行保留时间不同:温度变化;柱子污染;管口堵塞;泵流速变化
保留体积
组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
分离度
评价
R<1,两峰明显重叠
R=1,两峰达97.7%
R≥1.5,两峰完全分开
R≥2,基线分离
塔板理论
前提假设:溶质在气液两相中的分配是瞬间完成的,在塔板之间无纵向扩散
色谱峰越窄,塔板数n越多,理论塔板高度H越小,柱效能越高
色谱柱的理论塔板数越大,表示组分在色谱中达到分配平衡的次数越多,固定相作用越显著,对分离有利
塔板数计算
W1/2是半峰宽,Wb是峰底宽度
如果峰宽变小,保留时间变长,就需要更多的塔板数
理论塔板高度
L是柱长
色谱分类
按流动相的物态
气相色谱
用气体做流动相
液相色谱
用液体做流动相
按固定相形态分
平面色谱
纸色谱
薄层色谱
柱色谱
色谱法
气相色谱法
柱色谱法
液相色谱法
平面色谱法
纸色谱法
薄层色谱法
毛细管电泳法
超临界流体色谱法(SFC)