酶操作技术

酶操作技术包括了、酶分子修饰技术、酶、细胞和原生质体固定化技术、酶反应动力学的研究技术、酶分子定向进化技术等。

酶操作技术

• 酶生物合成的调节技术
  • 酶操作技术：以酶为操作对象的各种生化技术，包括酶的分离纯化、酶生物合成调节、酶反应动力学、酶的分子修饰、酶的固定化技术等
  • 操纵子假说
    • 操纵子：诱导型、阻遏型
    • 效应物
      • 诱导物
      • 辅阻遏物
        • 产物阻遏作用、分解代谢物阻遏作用
  • 酶的诱导合成
    • 诱导物的选择
      • 诱导物：酶的反应产物、酶的作用底物、酶的底物类似物
    • 酶诱导合成的条件
      • 基因必须完整
      • 阻抑蛋白本来与操纵基因的亲和力强，两者原来结合在一起，使酶不能合成
      • 在添加诱导物时，细胞所处环境中不能有高浓度的分解代谢阻遏物或其他强阻遏剂存在，否则酶将无法诱导合成
    • 酶诱导合成的检测
  • 酶生物合成的阻遏
    • 阻遏作用的分类
      • 产物阻遏作用
      • 分解代谢物阻遏作用
    • 酶合成的阻遏与解除阻遏作用
    • 酶阻遏作用与解除阻遏合成的检测
• 酶分子定向进化技术
  • 定义：是指模拟自然进化过程（随机突变和自然选择），在体外进行酶基因的人工随机突变，建立突变基因文库，在人工控制条件的特殊环境下，定向选择得到具有优良催化特性的酶的突变体的技术过程
  • 基因体外随机突变技术
    • 易错PCR技术
    • 重排技术
    • 随机引物体外重组技术
    • 交错延伸PCR技术
    • 截断状模板重组延伸技术
  • 突变基因的高通量筛选技术
    • 平板筛选法
    • 荧光筛选法
    • 噬菌体表面展示法
    • 酵母细胞表面展示法
    • 细菌细胞表面展示法
    • 核糖体和mRNA展示法
• 酶反应动力学的研究技术
  • 酶反应初速度的测定
  • 底物浓度对反应速率的影响--Km与Vmax的测定
    • 双倒数作图法、单倒数作图法
  • 最适温度、热稳定性和活化能的测定
  • pH对酶促反应的影响
  • 酶的激活与抑制
    • 竞争性抑制：Km增加、Vmax不变
    • 非竞争性抑制：Km不变、Vmax减小
    • 反竞争性抑制：Km、Vmax都减小
• 酶、细胞和原生质体固定化技术
  • 吸附法固定化技术
  • 包埋法固定化技术
  • 结合固定化技术
  • 交联固定化技术
• 酶分子修饰技术
  • 定义：通过各种方法使酶分子结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的过程
  • 金属离子置换修饰
  • 大分子结合修饰
  • 酶的侧链基团修饰
  • 肽链有限水解修饰
  • 氨基酸置换修饰
  • 核苷酸置换修饰