遗传工程

这是一篇关于遗传工程的思维导图，所谓基因遗传工程是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术，大家可以参考此图。

遗传工程

• 别名：基因工程，基因重组技术，基因拼接技术
• 原理
  • 基因重组
    • 可以产生新物种
• 操作水平
  • DNA分子水平
• 工具
  • 限制性核酸内切酶（限制酶）
    • 原核细胞中得到 磷酸二酯键 一类酶 双酶切法
  • DNA连接酶
    • 磷酸二酯键 T4连接酶可以连接两种末端
  • 载体
    • 质粒载体、噬菌体载体、Ti质粒、人工染色体
• 目的基因的检测与鉴定
  • 目的基因是否转入
    • 标记基因
    • DNA探针+PCR
  • 是否转录出RNA
    • 逆转录，PCR，DNA分子杂交
  • 蛋白质是否表达
    • 抗原抗体杂交
• 导入受体细胞
  • 感受态细胞转化法
  • 显微注射法
  • 农杆菌转化法
  • 花粉管注射法
• 构建表达载体 （目的基因与载体连接）
  • 基因表达载体
    • 启动子
    • 终止子
    • 目的基因
    • 标记基因
  • 定点突变
    • PCR
      • 实例:nisin
  • 确定重组载体DNA序列的正确性
    • DNA测序
• 获取目的基因
  • 天然来源
    • 基因组文库
    • cDNA文库
  • 人工合成
    • PCR
    • 化学合成
  • 目的基因的分离与收集
    • 电泳
• 甲基化酶
  • 在特定序列上对DNA进行甲基化，保护其不被限制性核酸内切酶降解。