荧光免疫技术

免疫学检验第七章荧光免疫技术，知识点有荧光、荧光物质、荧光抗体技术、荧光免疫测定等板块，希望对你有所帮助！

荧光免疫技术

• 荧光的基础知识
  • 荧光
    • 荧光的产生
      • 荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃迁到激发态，当其回复至基态时，发射出的波长大于激发光波长的光
    • 荧光效率
      • 荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率
    • 荧光的猝灭
      • 荧光物质在某些理化因素作用下，发射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。如紫外线照射、高温（≥20℃）、苯胺、酚、硝基苯、I-等
    • 荧光的寿命
      • 荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程度所用的时间。各种荧光物质的荧光寿命不同
    • 荧光偏振
      • 荧光物质经单一平面的偏振光照射后，吸收光能并发出单一平面的偏振荧光的现象
  • 荧光物质
    • 荧光色素
      • 荧光色素应具备的条件
        • 具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团，结合蛋白质后不易解离，而未结合的易于去除
        • 荧光效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率
        • 荧光色泽与背景色泽对比鲜明
        • 结合蛋白质后，不影响蛋白质原有的生化与免疫性质，且结合方法简单快速，结合物稳定，易于保存
        • 安全无毒，且不具有附加的抗原性
      • 常用于标记的荧光色素
        • 异硫氰酸荧光素 (FITC)
        • 四乙基罗丹明 (RB200)
        • 四甲基异硫氰酸罗丹明 (TRITC)
        • 藻红蛋白（PE）
    • 其他荧光物质
      • 镧系螯合物
        • 铕（Eu3+）应用最广
      • 荧光底物
        • 4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷
      • 量子点纳米晶体
• 荧光抗体技术
  • 基本原理
    • 荧光素标记抗体与切片中组织细胞抗原反应，洗涤分离后荧光显微镜观察呈现特异荧光的抗原抗体复合物及其部位，对组织细胞抗原进行定性和定位检测，或对自身抗体进行定性和滴度测定。
  • 荧光抗体技术
    • 高效价免疫血清的制备及抗体的纯化
    • 抗体的荧光色素标记
    • 标记抗体的纯化
    • 荧光标记抗体染色
    • 荧光染色标本的显微镜观察
  • 荧光抗体的制备
    • 荧光素的标记
      • 透析法
      • 搅拌法
      • 影响因素
        • 温度和时间
        • pH
        • 蛋白含量
        • 荧光素的纯度
        • 荧光素用量
    • 荧光素标记抗体的纯化
      • 去除游离荧光素及其降解产物
        • 透析法
        • 凝胶过滤色谱法
      • 去除过度标记和未结合荧光素的抗体
    • 标记抗体的鉴定和质量标准
      • 抗体活性和物理性能鉴定
        • 抗体效价
        • 抗体特异性
        • 荧光素与蛋白质结合比率（F/P）
      • 染色性能的鉴定
    • 镧系稀土元素标记物的制备
      • 一步标记法
      • 两步标记法
      • 双标记或多标记
    • 荧光标记抗体的保存
  • 荧光免疫显微技术
    • 标本的制作
      • 玻片和盖玻片的处理
      • 制片
        • 组织切片
        • 印片
        • 涂片
      • 标本的固定
      • 标本的保存
    • 荧光抗体染色
      • 染色方法
        • 直接染色法
        • 间接染色法
        • 补体荧光抗体法
        • 双标记染色法
      • 非特异性荧光染色
        • 自发荧光
        • 荧光抗体的非特异性荧光色素
        • 抗原不纯
        • 染色方法不当
      • 各种染色法需设置的对照
        • 标本自发荧光对照
        • 特异性对照（抑制试验）
        • 荧光抗体对照
        • 补体对照
        • 阳性对照
    • 荧光显微镜观察
      • 荧光显微镜
        • 光源
        • 滤板
          • 隔热滤板
          • 激光滤板
          • 吸收滤板
        • 聚光器
        • 光路
          • 透射光
          • 落射光
      • 标本观察
  • 免疫荧光技术的特点
  • 免疫荧光技术的应用
    • 细菌学检验方面
    • 病毒学检验方面
    • 寄生虫学检验方面
    • 自身抗体的检测和免疫病理的观察
    • 细胞免疫学方面
• 荧光免疫测定
  • 均相荧光免疫测定
  • 非均相荧光免疫测定
    • 时间分辨荧光免疫测定
      • 基本原理与特点
      • 检测系统及分析方法
      • 应用
    • 荧光偏振免疫分析法
      • 基本原理与
      • 分析方法和技术要点
      • 应用与评价
    • 其他荧光免疫测定
      • 荧光酶免疫测定
      • 底物背景荧光免疫测定
      • 量子点荧光标记技术
  • 磁珠分离技术
    • 基本原理
    • 免疫磁珠技术分类
      • 阳性分离法
      • 阴性分离法
      • 复合分离法
    • 免疫磁珠分离技术的应用
      • 细胞分离
      • 免疫检测
      • 生物大分子的纯化