基因工程

基因工程知识总结，包括DNA重组技术的基本工具、蛋白质工程的崛起、基因工程基本操作程序、基因工程的应用等内容。

基因工程

• 基因工程的基本操作程序
  • 获取目的基因
    • PCR
    • 构建基因文库
    • 人工合成
  • 表达载体构建
    • 启动子
    • 标记基因
    • 目的基因
    • 终止子
    • 复制原点
  • 导入受体细胞
    • 植物：花粉管通道法 农杆菌转化法
    • 动物：显微注射法
    • 细菌：Ca2+处理
  • 检测与鉴定
    • 分子水平
      • 插入：PCR
      • 转录：PCR
      • 翻译：抗原——抗体杂交
    • 个体生物学
• 基因工程的应用
  • 农牧业
    • 抗虫
    • 抗病
    • 抗除草剂
    • 改良品质
  • 医药卫生
    • 基因改造
    • 乳腺生物反应器
    • 移植器官工厂
  • 食品
    • 生产食品工业用酶
    • 批量生产凝乳酶
    • 培育超级细菌处理环境污染
• 蛋白质工程的原理和应用
  • 特点
    • 第二代基因工程
    • 可生产大自然中不存在的蛋白质
  • 实质
    • 改造和合成基因
  • 改造基因的方法
    • 基因定点突变技术
  • 应用
    • 研发速效胰岛素类似物
    • 延长干扰素体外保存时间
    • 降低对小鼠单克隆抗体的免疫反应
    • 改进酶的性能
    • 改造酶以提高光合速率
    • 改进微生物蛋白质结构使防虫害效果增强
  • 困难
    • 必须依赖于复杂的高级结构
• 重组DNA的基本工具
  • 限制酶
    • 来源
      • 原核生物
    • 作用结果
      • 粘性末端
      • 平末端
  • DNA连接酶
    • 作用
      • 恢复磷酸二酯键
    • 种类
      • E.coliDNA连接酶
        • 互补粘性末端
      • T4DNA连接酶
        • 互补粘性末端
        • 平末端
  • 载体：质粒
    • 环状DNA分子
  • 实验
    • 鉴定DNA：二苯胺试剂
    • 提取DNA：预冷的酒精溶液