实验

本思维导图主要从设备器材、试剂、采集与处理、稀释与培养四个角度为你梳理本次实验的细节，喜欢的小伙伴可以点个赞哦！

中心主题

• 设备器材
  • 恒温培养箱：36°C士1°C
  • 冰箱：2～5°C
  • 恒温水浴箱：46°C士1°C
  • 天平
  • 均质器，振荡器
  • 无菌吸管1ml和10ml微量移液器和吸头
  • 无菌锥形瓶
  • 无菌培养皿
  • ph比色管或ph计
  • 菌落计数器
• 试剂
  • 养基和试剂
  • 月桂基硫酸盐胰蛋白胨
  • 煌绿乳糖胆盐
  • 结晶紫中性红胆盐琼脂
  • 无菌磷酸盐缓冲液
  • 无菌生理盐水
  • 1 mol/L NaOH 溶液
  • 1mor /L HCL溶液
• 采集与处理
  • 天平调平，连接电源，打开天平，取出均质袋 对其进行标记，放在天平上，然后去皮， 对样品表面进行消毒灭菌，用镊子去酒精棉球 擦拭样品表面，对剪刀和镊子进行灭菌， 点燃酒精灯，在酒精灯上进行操作，将样品剪碎， 称25克样品
  • 完成后，取下均质袋，关闭天平，切断电源， 在酒精灯旁边，向均质袋中加入225克磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水，
  • 打开均质机，先插电源，打开开关，无菌袋外再套一个无菌袋，旋转旋钮打开挡板，将均质袋放入均质1～2分钟
• 稀释与培养
  • 液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶 内预置适当数量的无菌玻璃珠)或其他无菌容器中充分振摇或置于机械振荡器中振摇，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
  • 用ImL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液 ImL沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖媒不要钟及程锋液面)振摇试管或换用1支lmL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。
  • 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次 稀释与培养换用1支lmL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次样品接种完毕，全过程不得超过15min
  • 初发酵试验:每个样品选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液)，每个稀释度接种3管
  • 月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤，每管接种1mLl 如接种量超过】mL则用双料LST肉汤)，36℃+1℃培养24h±2h,观察倒管内是否有气泡产生，24h士2h产气者进行复发酵试验(证实试验)，如未产气则继续培养至48h士2h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。
  • 复发酵试验:用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管中
  • 36℃+1℃培养48h+2h观察产气情况。产气者.计为大肠菌群阳性管。