导图社区 生化实验考核
生化实验考核内容包括使用比色杯的注意事项、根据已知液的浓度测定待测液浓度的方法、凝胶过滤层析实验原理,T、PH、A、I对酶活性的影响等等。
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生化考核
一
Lambert-Beer定律
A=KLC
含义:一束光通过溶液后,光线被吸收一部分,吸收的多少与溶液中溶质的浓度与液层的厚度成正比。
使用比色杯的注意事项
1. 手拿毛面
2. 使用前后用蒸馏水冲洗2-3次
3. 装样量到比色杯的2/3-3/4
4. 装样后,用擦纸擦拭光面
5. 放置时,透光面与光路一致
绘制标准曲线的原则
以横轴为浓度,纵轴为光密度,一般浓度的全距占用了多少格,光密度的全距也应占用相同的格数
若各点不在一直线,尽可能使直线通过更多点,但也必须通过原点,使不在直线上的点尽量均匀地分布在直线的两侧。
绘制完毕,应在坐标纸上注明实验项目的名称、所使用比色计的型号和仪器编号、单色光波长以及绘制的日期、室温。
绘制标准曲线:原则上应作二次或三次以上的平行测定,重复性良好曲线方可应用。
绘制好的标准曲线只能供以后在相同条件下操作测定相同物质时使用。当更换仪器、调换试剂及室温有明显改变时,标准曲线需重新绘制。
依据待测液的吸光值可在标准曲线上查出待测液的浓度,但待测液的测定条件应与标准液一样。
根据已知液的浓度测定待测液浓度的方法
利用标准曲线法
利用标准管法
二
凝胶过滤层析实验原理
凝胶颗粒是一类具三维空间的多孔性网络结构物质,其颗粒和网孔具不同的大小、型号,可分离在一定分子量范围内的不同物质,发挥滤过和筛的作用,称分子筛层析。
相对分子量较大的物质由于颗粒大于凝胶网孔被完全排阻在孔外,只能在凝胶颗粒外的空间向下流动,因此流程较短,移动速度快,所以首先流出。
相对分子量较小的物质由于直径小于凝胶网孔,可完全扩散渗透入凝胶颗粒的网孔,因此,流程长,移动速率慢,所以最后流出。
中等大小的分子,可分布与凝胶内外,它们流出的时间介于两者之间,这样分子大的组分先流出,分子小的组分后流出。
装柱及加样的注意事项
装柱
层析柱垂直固定在层析架上,先加入小量洗脱液(2-3ml),将气泡赶净
将凝胶混匀并一次侵入柱中,同时打开柱出口使之自然沉降,凝胶面应平整。
在任何时刻柱顶都要有水层
加样
待洗脱液液面距凝胶表面只有2-3mm高时,关闭出口,用滴管将备好的样品1或2沿层析柱内壁小心加于柱床表面
不要使柱床摇动,当样品全部渗入柱床后,关闭出口
加入洗脱液,使高出凝胶面3-5cm,速度18-20滴/分
三
T、PH、A、I对酶活性的影响
本实验中如何判断唾液淀粉酶活性的高低
唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种不同大小的糊精和麦芽糖,它们遇碘可呈现不同的颜色。
淀粉
蓝色
麦芽糖
可溶性淀粉
紫色糊精
紫色
红色糊精
红色
无色糊精
黄色
无色
颜色越浅,则水解越彻底,酶的活性越高。
四
动物组织基因组DNA提取的实验原理
在动物组织细胞中的DNA和RNA大部分与蛋白质结合成核蛋白。在浓的氯化钠溶液中,DNA核蛋白溶解度高,RNA核蛋白溶解度小。在稀的氯化钠溶液中,DNA核蛋白的溶解度很小,RNA溶解度大。这样利用不同浓度的氯化钠溶液,将DNA核蛋白与RNA核蛋白从样品中分别抽取出来。
DNA含量测定原理
DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰,利用这一原理我们测其在260nm处的吸光度,再推算其浓度。
DNA样品纯度如何鉴定
分别测定DNA样品在260nm和280nm的吸光值,其A260/A280之比应在1.70-1.80之间,若低于1.70则表明样品含有显著数量的蛋白质,高于此值为RNA污染。
五
VC的主要性质
能溶于水,呈酸性,有还原性及不稳定性,易被碱、高温、金属离子、氧及L-抗坏血酸氧化酶等因素破坏。
用2,6二氯酚靛酚滴定并测定VC的原理
氧化型的2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈红色,在中性或碱性溶液中呈蓝色。所以,当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时,在抗坏血酸全部被氧化后,再滴下的2,6-二氯酚靛酚将立即使溶液呈淡红色,从而显示到达滴定终点。
六
同工酶的概念
是指催化相同的化学反应,但酶蛋白的分子结构、理化性质、乃至免疫学性质不同的一组酶。
LDH活性测定的原理