药物分析-药物杂质的检查

药物分析-药物杂质的检查笔记，包括杂质限量的控制、杂质的计算、杂志的检查项、杂质的检查方法等等。

药物杂质的检查

• 杂质
  • 任何影响药品纯度的物质
  • 分类
    • 按来源分
      • 一般杂质
      • 特殊杂质
    • 按毒性分
      • 信号杂质
      • 毒性杂质
    • 按化学类别和特性
      • 无机杂质
      • 有机杂质
      • 残留溶剂
• 杂质限量的控制
  • 限量检查法
    • 对照法（平行原则）
      • 标准对照法（限量作对照组）
    • 灵敏度法
      • 直接反应
    • 比较法
      • 规定条件下测定参数，对比于规定限量 （如吸光度等参数）
  • 定量检查法
• 杂质的计算
  • 两种表示方法
    • ％，ppm
  • 注意
    • 单位统一；供试品是否有稀释；表示方法％或ppm
• 杂志的检查项
  • 纯度
  • 有效力
    • AL(OH)3制酸性；明胶的凝冻度；福利平的结晶度
  • 均匀性
  • 安全性
    • 异常毒性热源降压物质无菌…
• 杂质的检查方法
  • 杂质的研究规范
    • 项目名称 （有机杂质在药品质量标准中）
      • 杂质的化学名称
      • 某类杂质的总称
      • 检测方法
    • 杂质检查项目的确定 （针对性，多则耗费时间，少无法质量保证） （有的要确定制剂后是否还要再检查，降解产物和毒性物质制剂中必须再检查）
    • 杂质限度的确定 （三个限度）
      • 确定原则（合理） ：确保安全的前提下，顾及→生产可行性、批次波动性 和药品的稳定性 a. 报告限度（reporting threshold）：超出此限度的 杂质 均应在检测报告中报告，并应报告具体的检测数据。 b. 鉴定限度（identification threshold）：超出此限度的杂 质均应进行定性分析，确定其化学结构。 c. 质控限度（qualification threshold）：质量标准中一般 允许的杂质限度，如制订的限度高于此限度，则应有充 分的依据。
    • 杂质检查方法的选择与验证
  • 检查方法
    • 根据性质差异
      • 物理性质
        • 外观性状 分配或吸附 对光的吸收
      • 化学性质
        • 酸碱性 氧化还原性质 化学反应
    • 根据检查结果
      • 限度检查法
        • 对照法（平行操作原则）
        • 灵敏度法（加入一定量试剂，不得有正反应出现）
        • 比较法（杂质的参数vs限量的规定）
      • 定量检测
    • 常用检查方法
      • 化学方法
        • 产生颜色 （杂质与试剂反应产生颜色，药物不会，区别于鉴别）
        • 产生沉淀
        • 产生气体
        • 滴定法
      • 色谱方法
        • TLC
          • 展开缸先饱和，防止边缘效应 （鉴别时用药品的限度量，杂质检查用杂质的限度量）
          • 杂质对照品法 （适用于杂质已知且能得到）
          • 供试品自身稀释对照法 适用于杂质结构不确定或不可得
            • 主药稀释，杂质点与主药点大小比较 （杂质斑点颜色和大小＜对照主要斑点）
          • 并用 （适用于存在多个杂质，有已知有未知）
            • 点三个以上的样 （首先比较杂质对照品）
            • 半定量
          • 对照药物法 （无适合的杂质对照品）
            • 上市药物（每个杂质点要比对照品小）
        • HPLC
          • 外标法 （适用于有杂质对照品，可精确控制进样量）
          • 加校正因子的主成分自身对照法 （适用于已知杂质）
            • 消除响应值差异影响
          • 不加校正因子的主成分自身对照法 （适用于杂质和药物响应值接近，同母核）
          • 面积归一化法 （只需一针，面积占比→供试品杂质含量）
            • 子主题
            • 准确性差，只用于粗略检查，不用于微量杂志检查
      • 气相色谱法
        • 残留溶剂首选方法
        • 同HPLC
        • 标准溶液加入法（较准确）
      • 光谱方法
        • 紫外-可见分光光度法
          • 找一方有吸收一方无的波长
        • 红外分光光度法
        • 原子吸收分光光度法
      • 其他
        • 热分析法
          • TGA热重分析法
            • 热天平程序控温→温度不变的相变（失去结晶水/热分解）
            • 热重曲线
          • DDA差热分析法
            • 惰性参比物（石英砂、锻制MgO）
            • 药物加热过程吸热/放热→温度差
          • DSC差示扫描量热法
          • 应用
            • 药物纯度测定
              • 条件
                • 样品纯度在98％以上 不反应 …
            • ...
        • 酸碱度检查法
          • 酸碱度滴定法（限度指标：毫升数）
          • 指示液法
          • pH
        • 物理性状检查法
          • 臭味及挥发性差异
            • 杂质有特殊气味（乙醇中的杂醇油有异臭）
            • 杂质无挥发性（樟脑，称重）
          • 溶解行为的差异
          • 旋光性质的差异
            • 药物有旋光性而杂质没有（比旋度下限）
            • 杂质有旋光性而药物没有 （一定浓度下的旋光度限量）
          • ...
  • 一般杂质的检查12项 （控制杂质的限度）
    • 氯化物检查法
      • 硝酸银 （对照法：供试液，标准溶液，平行原则） （内消旋法：两供试液）
        • 比浊法，黑色衬底 比色法，白色衬底
      • 注意事项
        • 平行 稀硝酸（10ml稀硝酸/50ml供试液），过多会增大AgCl溶解度 氯化物最适检测浓度范围 50ml0.05-0.08mgCl 稀释到40ml加硝酸银：使AgCl混浊均匀，早则沉淀，影响比浊 供试品不澄清的处理：过滤（滤纸用含硝酸水洗涤除氯化物） 供试品有色的处理（内消色不除颜色，外消色除颜色如高锰酸钾影响+乙醇脱色）
    • 硫酸盐检查法
      • BaCl2（HCl）
      • 条件：0.1-0.5mg/50mlSO4 2-(相当于1-5ml标准硫酸钾即100μgSO4 2-/ml) HCl2ml/50ml BaCO3,BaPO4 干扰排除：类似氯化物，有色（内消法），不澄清（过滤） 药物不易溶解：加入与水互溶的有机溶剂
    • 铁盐检查法
      • 硫氰酸盐法——ChP,USP （Fe3+） 掌握试剂作用现象
        • 硫酸铁铵+硫酸（防止水解生成Fe(OH)3） 10-50μgFe/50ml明显 红色
        • 供试品→溶解→稀盐酸，过硫酸铵→稀释→硫氰酸铵→定容→显色（红）→对比溶液比较 稀盐酸：防止Fe3+水解 过硫酸铵：保护铁盐（防止硫氰酸铁还原或分解） 硫氰酸铵 稀释：均匀 定容：同体积才好比较
        • 注意
          • 反应可逆（试剂过量，灵敏度↑） 供试品与对照品色调不一致：正丁醇/异戊醇提取，比色 干扰：阴离子（CL-,PO4 3-,SO4 2-,枸橼酸根与铁呈有色络合物）:酸度↑和显色剂用量↑ 葡萄糖糊精硫酸镁等（硝酸处理→加热煮沸去硝酸，亚硝酸与硫氰酸根反应→红） 环状结构：炽灼破坏→Fe2O3
      • 巯基醋酸法——BP （贵，灵敏度高Fe2+）
        • 试剂：巯基醋酸（Fe3+→Fe2+→红） 现象：显红色 特点：灵敏度高，贵
    • 重金属检查法 （能与硫代乙酰胺或硫化钠作用呈色：AgPbHg…） 不稳定如形成配合物；易蓄积
      • 三种方法 （掌握方法和适用范围）
        • 硫代乙酰胺法 （可溶于水、稀酸，乙醇）
          • 硫代乙酰胺→弱酸性→H2S→反应得↓（黄色到棕黑色）→比较标准溶液 pH3.5醋酸盐缓冲液 为什么不直接加H2S?气体量不易控制；味道 10-20μgPt/27ml（1-2ml标准）
            • 子主题
          • 三管： 甲管对照管 乙管供试品 丙管甲加乙——理论上不浅于甲，若浅→第二种 丙管：判断是不是适用第一种方法 有色干扰：稀焦糖溶液/其他无干扰有色→一致
          • 注意
            • pH值3-3.5，酸度大色浅/不呈色 高铁盐干扰：抗坏血酸还原 颜色干扰：外消色法，内消色法
        • 炽灼后的硫代乙酰胺法 （难溶一法；含芳环、杂环）
          • 炽灼残渣→三酸处理→调pH→第一法 （硫酸硝酸盐酸，每次加热蒸干） 标准管：蒸干（消除重金属含量的影响）→pH
            • 平行原则
          • 注意
            • HNO3处理，蒸干NO2：亚硝酸氧化硫化氢 炽灼温度500-600（严格）：T高重金属损失 含钠盐或氟，硬质玻璃蒸发皿（玛瑙）：腐蚀瓷坩埚，引入重金属 标准管同坩埚蒸干：消除杂质重金属影响
    • 砷盐检查法 （大题，原理，讨论）
      • 古蔡氏法
        • 金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，与溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与一定量的标准砷溶液所生成的生斑比较，颜色不得更深。
        • Zn+H+→H2 +Zn+AsO3-/As3+→AsH3↑（溴化汞试纸→黄色至棕色呻斑）→对比标准溶液
        • 灵敏度：2ml标准As液（1μg/ml）
        • 标准砷斑：标准溶液（As2O3配制）→盐酸，碘化钾，酸性氯化亚锡，锌粒→导气管，瓶→25-40℃水浴，45min KI,SnCl2：还原As5+→As3+；抑制铋化氢生成 I-与Zn2+配位；SnCl2与Zn→锌锡齐（保证H2生成） 导气管 醋酸铅棉花：吸收H2S 溴化汞试纸：检测AsH3 砷斑：As(HgBr)3,AsH(HgBr)2,As2Hg3（黄棕黑）
          • KI：1.还原剂 2.I-络合（消耗Zn2+,促H2） 酸性SnCl2：1.还原剂 ：As5+→As3+ 2.氧化：I2→I- 3.Zn-Sn齐（去极化，H2持续产生）？？ 4.SnCl2和KI抑制SbH3生成 PbAc2棉花（60-80ml）：排除硫化物干扰（0.1mgS2-） 试纸：HgBr2＞HgCl2（灵敏度），干燥避光，立即（砷斑不够稳定）
        • 注意
          • 供试品是硫化物/亚硫酸盐/硫代硫酸盐）：加浓硝酸（氧化） 供试品是铁盐（消耗KI,SnCl2,氧化AsH3）：先加酸性SnCl2→Fe2+ 环状有机化合物：有机破坏（如炽灼） 含锑：改用白田道夫法（As3+,SnC2,HC→As↓棕褐色胶态砷，不受Sb干扰，灵敏度低）
        • 特点
          • 优点：灵敏度高（1μgAs） 缺点：Sb干扰（SbH3灰白色）
      • Ag-DCC
        • 二乙基二硫代氨基甲酸银 AsH3+Ag-DDC→Ag红色胶态银（碱性条件如吡啶）
        • 特点：可测510nm吸收度定量，线性范围（1-10μg/40ml） 灵敏度高，0.5μg/30ml 重现性好， 锑不干扰 可逆，有机碱结合HDDC促反应（吡啶臭，三乙胺氯仿）
      • 奇列氏法/次磷酸法
        • 次磷酸钠+盐酸→次磷酸+H3AsO3→As↓（棕色）
        • 灵敏度＜古蔡氏法 硫化物，亚硫酸盐，含锑，不干扰
    • 干燥失重测定法 （水分，挥发性物质）
      • 若不做干燥失重，测定的含量结果偏低
      • 恒重：连续两次干燥或炽灼后，称重的差异在0.3毫克以下。（要求间隔＞1h）
      • 常在恒温干燥法 105℃（＞水沸点） （受热稳定）
        • 器材
          • 扁形称量瓶（厚度＜5mm）
        • 特殊药物
          • 结晶水多：升温 含大量水且熔点低：先低温除大量水，再升温干燥 易吸湿或受热相变而达不到恒重：一定温度，一定时间来代表 膏状物：结晶粗砂搅匀
      • 减压干燥法 60℃ （熔点低，受热易分解，难去除水分）
        • 器材
          • 减压干燥剂，真空干燥箱
      • 干燥剂干燥法 常温 （受热分解或易升华）
        • 器材
          • 干燥器，干燥剂（硅胶，硫酸，五氧化二磷）
    • 水分测定法
      • 卡尔费修法
        • 碘氧化SO2为SO3消耗定量水（碘消耗量→水含量） 无水吡啶，无水甲醇使反应正向进行
        • 终点指示
          • fiaher试剂：淡黄色→红棕色 永停法：电流或电压恒定
    • 炽灼残渣检查法/硫酸盐灰分 （非挥发性无机杂质）
      • 有机药物→炭化 无机药物→加热分解 ↓ 高温炽灼→硫酸湿润→低温加热除硫酸蒸汽→700-800℃炽灼灰化→硫酸盐
      • 二次称重，30min
      • 注意
        • 取样量根据限量和称量误差决定，残渣控制1-2mg 残渣需重金属检查，温度500-600℃ 含氟：铂坩埚 坩埚标记编号：蓝墨水，FeCl3（红）
    • 易炭化物检查法 （有机杂质） 掌握原理
      • 目视比色法：有机杂质遇硫酸炭化呈色→比较标准比色液
    • 残留溶剂检查法
      • 四类溶剂
        • 第一类溶剂（5） 致癌
          • 苯，四氯化碳，二氯乙烷*2，111三氯乙烷
        • 第二类溶剂：（27） 非遗传毒性，不可逆毒性，严重可逆毒性
          • 乙腈，氯苯，三氯甲烷，环己烷，二氯甲烷...
        • 第三类溶剂（27） 低毒，5000ppm↑(0.5％)
          • 醋酸，丙酮，甲酸，乙醇，乙酸乙酯，乙醚...
        • 第四类溶剂（10）
          • 石油醚，三氯醋酸等
        • 第一类：避免使用 第二类：限制使用 第三类：GMP或其他质量要求限制使用（推广使用） 第四类：尚无足够毒理学资料（不是说无毒，是不了解）
      • 分析方法
        • 气相色谱法
          • 毛细管柱顶空进样等温法 （溶剂数量不多，极性差异小）
          • 毛细管柱顶空进样系统程序升温法 （容积数量多，极性差异大）
          • 顶空进样法（顶空进样小瓶，封闭系统，相平衡）
          • 溶液直接进样法
    • 溶液颜色检查法 （微量有色杂质）
      • 目视比色法
      • 分光光度法
      • 色差计法
    • 溶液澄清度检查法 （微量不溶性杂质）
      • 注射用原料药纯度的重要指标
      • 比浊法
  • 特殊杂质的检查 （体现创新药物的水平）
    • 表观含量＞0.1％/有强烈生物作用＜0.1％ 研究意义：1.优化生产过程，避免形成；2.优化设置驻藏条件，减少降解。
    • 特殊杂志的鉴定
      • 合成杂质对照品 （杂质小，分离纯化困难）
      • 色谱制备杂质对照品 （杂质多，可分离）