导图社区 核酸分子杂交技术
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核酸分子杂交技术
概念
单链的核酸分子在合适的条件下，与具有碱基互补序列的异源核酸形成双链杂交体的过程称核酸分子杂交.
基本原理
核酸双链分子的变性与复性是核酸分子杂交的基本原理。
根据核酸分子变性与复性的原理，将一个核酸分子标记为探针，探针与靶序列以碱基配对的方式，特异地结合为双链，藉此检测靶序列是否存在 。
核酸探针
指能与靶核酸序列发生碱基互补杂交，杂交后又能被特殊方法检测的已知的被标记（同位素或非同位素标记）的核酸分子。
种类
基因组DNA探针
cDNA探针
RNA探针
寡核苷酸探针:17-50bp
标记方法
随机引物标记
DNA缺口平移标记
全程RNA探针标记
化学法全程标记
3¢末端标记
5¢末端标记
检测
放射性标记探针的检测
放射自显影
直接
间接
液体闪烁计数
非放射性标记探针的检测
酶促显色
荧光检测
主要用于原位杂交
化学发光检测
杂交类型
分子不同
DNA-DNA
DNA-RNA
RNA-RNA
介质不同
液相杂交
固相杂交
点杂交/狭缝杂交
反向点杂交
定义
RDB，是将多种探针固定在同一张膜上，同时检测多种靶序列的杂交技术。
典型代表
基因芯片
技术特征
固相-多个探针
液相-靶序列
标记-样本
一次可以检测多个未知序列
菌落杂交
就是将菌落从平板转移到滤膜上，然后将滤膜上的菌落裂解以释放出DNA，固定，最后用标记探针进行菌落上的DNA杂交，这过程称菌落杂交。
应用
是用于重组细菌克隆筛选的固相杂交
Northern印迹杂交
是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到NC膜上的方法。
RNA病毒的检测
基因表达的检测 ，金标准
Southern印迹杂交
即DNA/DNA杂交，将DNA电泳、转印到固相支持物上，用探针进行检测的方法。
单基因遗传病诊断
基因点突变的检测
原位杂交
将标记的核酸探针与固定在细胞或组织中的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合进行杂交，称原位杂交
荧光原位杂交（FISH）
用荧光素直接或间接标记探针，进行的原位杂交。将荧光素标记的核酸探针与固定在细胞或组织中的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合进行杂交。
细胞遗传学分析
比较基因组杂交
基因图谱绘制
病原学检测
杂交的影响因素
长探针杂交的影响因素
影响杂交速率和杂化分子稳定性的因素
1、核酸分子浓度与杂交速率；2、高浓度双链探针；3、碱基组成；4、盐溶液的浓度；5、温度；6、甲醛；7、错配；8、加速剂。
酶联探针
杂交反应体积
杂交时间
短小寡核苷酸探针的杂交
DNA变性
在某些理化因素作用下，DNA分子内碱基对之间的氢键断裂，使规则有序的双螺旋结构变为不规则无序的单链线团样结构的过程。
融解温度（Tm）
在DNA热变性时，其A260的升高达最大值一半时的温度。
杂交
根据变性和复性的原理，两条来源不同，但具有互补序列的核酸，按碱基配对原则复性形成一个杂交体，这个过程即杂交，或称分子杂交。
DNA复性
变性的单链核酸分子在一定条件下按碱基互补原则重新结合为双链核酸的过程，称为复性或杂交。
减色效应
变性DNA复性后对260nm紫外光吸收减少的现象。
