酶学检测技术

酶学检测技术这是所谓的他，包括：酶、同工酶检测、代谢物的酶法分析、酶学测定技术。 互帮互助，有建议提醒哦，与君共勉。

酶学检测技术

• 酶
  • 酶（E）、酶的底物（S）、酶的产物（P）
  • 组成
    • 单纯酶：仅由氨基酸残基组成的酶
    • 结合酶：除含蛋白质外，还含有非蛋白部分的酶叫结合酶，体内大多酶为结合酶。
      • 酶蛋白
      • 辅助因子
        • 辅基：金属离子（结合更紧密，再结合中心）
        • 辅酶：小分子有机化合物
  • 分类
    • 氧化还原酶类、转移酶类、水解酶类、裂合酶类、异构酶类、合成酶类
  • 作用特性
    • 高度不稳定性：在多种理化因素作用下容易变性失活
    • 高效性：比普通化学催化剂高百万倍，具有高效性
    • 高度特异性：酶对作用物的选择性很强，具有高度特异性
    • 可调节性：酶的催化作用受多种因素调节，具有可调节性
• 同工酶检测
  • 定义：指催化的化学反应相同，但酶蛋白的分子结构，理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶
  • 常见酶
    • CK：CK-BB,CK-MB,CK-MM
    • LD：LDH1.LDH2,LDH3,LDH4,LDH5
• 代谢物的酶法分析
  • 酶法分析
    • 利用酶的特性，以酶作为分析工具或分析试剂的主要成分进行反应体系中底物，辅酶，抑制剂和激活剂等成分含量测定的方法
  • 工具酶
    • 是指酶学分析中作为试剂用于测定其他化合物浓度或酶活性浓度的酶
  • 脱氢酶指示系统
    • 在340nm处吸光度值，在还原型有吸收峰，氧化型接近于0
  • 过氧化氢酶指示系统
    • 在500nm处有最大吸收峰，Trinder反应，PAP
• 酶学测定技术
  • 由于体液中酶含量很低，在微克或纳克每升的水平，因此直接测定酶蛋白十分困难，除少量用免疫学测定质量浓度外，大多采用酶活性测定的方法
  • 酶活性：酶活性测定计算酶反应速率
  • 酶活性单位
    • 在一定条件下使酶促反应达到某一速度时所需的酶量
      • 为了表示酶活性人为规定的单位
    • 国际单位：每分钟催化1微摩尔底物转化为产物所需要的酶量为一个国际单位 1IU=1微摩尔/min
    • Katal单位：在规定条件下，每秒钟催化1摩尔底物转化所需的酶量 1Katal=1mol/s=60×106 IU
    • 酶活性浓度单位：以单位体积所含的酶活性单位数表示 U/L
  • 酶促反应进程
    • 延滞期、线性期、非线性期
      • 线性期：此时底物量足够，酶促反应速率不受底物浓度的影响，产物和底物变化与时间成直线关系，此时的酶促反应速率可较好地反应酶活性的大小
  • 酶活性测定方法
    • 定时法
      • 计算公式
      • 特点
        • 优点：设备简单，操作简便，不用考虑显色剂对酶活性的影响
        • 缺点：不能确保选定的测定时段全部处于线性期，测定误差难以估计
    • 连续监测法
      • 计算公式
      • 特点
        • 优点：连续观测反应进程，可以明确找到反应的线性期，结果准确可靠，样本和试剂用量少，短时间内即可完成测定
        • 缺点：需在特定的条件下进行，要求足够的底物浓度，还要精确控制温度，PH等反应条件，对仪器要求较高，需要恒温装置和连续记录吸光度装置
      • 方法类型
        • 直接连续检测法
        • 间接连续检测法
          • 酶偶联法
            • 在原来的反应体系中再加入一些酶试剂，使加入的酶促反应和被测酶的酶促反应偶联起来，最后的反应产物可直接监测进而推测出第一个酶的活性浓度
          • 酶偶联体系
            • 产生被检测物质的反应称为指示反应，催化指示反应的偶联酶称指示酶
            • 参与偶联反应和辅助反应的酶统称为工具酶