分离精制方法

定义：在中药水提液中，加入无机盐至饱和状态，可使某些成分在水中溶解度降低而沉淀，与水溶性杂质分离等。

分离精制方法

• 溶剂法
  • 酸碱溶剂法
    • 原理
      • 利用混合物中各组分酸碱性不同而分离的方法
        • 酸+碱
        • 酸/碱-浓度不同
    • 操作
      • 将总提取物溶于亲脂性有机溶剂，用酸水，碱水分别萃取，将总提取物分成酸性，碱性，中性三个部分。
    • 注意事项
      • 酸碱强度，加热时间，加热温度等
    • 举例
      • 生物碱分离--酸溶碱沉法
      • 酸性成分分离--碱溶酸沉法
      • 内酯/内酰胺类--碱溶酸沉法
    • PH梯度萃取法
      • 以PH成梯度的酸水（碱水）溶液依次萃取，以亲脂性有机溶剂溶解的碱性（酸性）成梯度的成分，使各成分依次分离的方法。--蒽醌、黄酮、生物碱等
  • 溶剂分配法/液液萃取
    • 原理
      • 利用混合物中各组分在两种互不相溶溶剂中的分配系数K的不同而达到分离的方法
        • 分配系数：成分在两相之间的溶解度之比（正比）
          • 两种溶质在同一溶剂系统中分配系数的比值为分离因子ρ
    • 溶剂
      • 正丁醇-水：皂苷类-极性大
      • 乙酸乙酯-水：黄酮类-极性中等
      • 氯仿/乙醚-水：游离蒽醌类-极性小
        • 氯仿/乙醚选用看使用的方便程度
      • 石油醚-水：油脂、游离三萜、甾体-极性极小
    • 系统溶剂萃取法（醇提）
      • 定义：将中药提取物浸膏加少量水分散后，将混合物的水溶液依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇等依次萃取，然后分别回收有机层，得到相应极性的组分或成分。
    • 常用方法
      • 液滴逆流分溶法CCD：是一种多次连续的液液萃取过程
      • 液滴逆流色谱DCCC
      • 高速逆流色谱HSCCC
        • 适合皂苷类的提取 优点：无样品损失；分离量大（工业化生产）；对样品要求简单（可以是粗提物） 缺点：不适合所有成分的分离
    • 注意事项
      • 产生乳化方式
        • 1、两相溶剂比重相近；2、含碱性物质；3、有助溶性成分存在；4、水层过于黏稠（乳香-制胶水，待开发）；5、操作不当-振摇过度，剧烈，持久
      • 消除乳化方法
        • a、放置较长时间；b、水平旋转摇动分液漏斗（适用于轻微乳化）；c、滤纸过滤（常压，乳化多）；d、加水或溶剂；e、无机盐盐析-水在下层；f、离心分离（最好的方法，少量乳化）；g、加表面活性剂或加热（工业生产）
• 沉淀法
  • 原理
  • 常用方法
    • 专属试剂沉淀法
      • 特点：沉淀的生成具有选择性和专一性
      • 雷氏铵盐+生物碱-沉淀；胆甾体+甾体皂苷-沉淀； 明胶+鞣质-沉淀
    • 分级沉淀（溶剂沉淀法）
      • 定义：改变溶液的极性使成分溶解性降低而沉淀出来的方法
      • 常见方法
        • 水/醇法：水提液+醇（数倍）-多糖、蛋白质（水溶性）的提取/除去
          • 极性;大--小
        • 醇/水法：醇提液+水（数倍）-叶绿素、油脂（脂溶性）除去
        • 醇/醚法或醇/丙酮法：皂苷醇液+乙醚（丙酮）-皂苷沉淀析出
          • 极性：小--大
    • 盐析法
      • 定义：在中药水提液中，加入无机盐至饱和状态，可使某些成分在水中溶解度降低而沉淀，与水溶性杂质分离。
      • 条件：成分溶于水，溶解度好
• 结晶法
  • 结晶基本都是单体 不是分离，是精制、纯化
  • 原理
    • 利用溶剂对有效成分与杂质在冷热情况下溶解度显著差异以获得结晶的方法
  • 常用
    • 结晶：化合物由非晶形经过结晶操作形成有晶形的过程
    • 重结晶：将不纯的结晶再进行结晶操作以提高纯度的过程
  • 结晶合适溶剂的选择
    • 关键
    • 溶解度：对结晶物质的溶剂热度随温度不同有显著差异，热时溶解，冷时析出；对可能存在的杂质溶解度非常大或非常小（即冷热均溶或冷热均不溶）
    • 溶剂沸点：沸点适中，不宜过高或过低
    • 不与结晶物质发生化学反应
    • 能给出较好结晶
  • 常用溶剂
    • 单一溶剂：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸、吡啶等；混合溶剂
  • 操作步骤（四步操作）
    • 热溶：加热溶解，制备过饱和溶液
      • 一般用有机溶液，相当于回流
    • 热滤：趁热过滤，除去不溶性杂质
    • 析晶：放置析晶（常温），缓慢冷却析晶
    • 过滤：过滤，得到结晶，除去母液（含可溶性杂质--冷热均溶）
• 色谱分离法
  • 原理
    • 利用混合物中各组分在固定相和流动相中的吸附、分配的差异而达到分离
    • 根据待分离成分和色谱间的结合程度不同而分
  • 用途
    • 分离:化学成分之间
    • 纯化：jin精制去杂
    • 鉴定：Rf值，保留时间
  • 类型
    • 吸附色谱
      • 原理
        • 相似相吸，根据极性大小进行分离
      • 类型
        • 物理吸附：硅胶、氧化铝及活性炭为吸附剂
        • 化学吸附：黄酮等酚酸性物质被碱性氧化铝吸附；生物碱被酸性硅胶吸附等
        • 半化学吸附：eg聚酰胺与黄酮类、蒽醌类等化合物之间的氢键吸附
      • 极性吸附剂特点（硅胶、氧化铝）
        • 对极性强的物质吸附能力强
        • 溶剂极性减弱，则吸附剂对溶质的吸附能力增强；反之，则减弱
        • 溶质即使被硅胶、氧化铝吸附，一旦加入极性较强的溶剂，又可被置换洗脱下来
        • 为避免化学吸附，酸性物质宜用硅胶，碱性物质宜用氧化铝作为吸附剂，通常分离酸性（碱性）物质时，洗脱剂中常加入适量醋酸，防止拖尾，改善分离效果
      • 非极性吸附剂（活性炭）
        • 对非极性物质亲和能力强，溶剂极性降低，则活性炭对溶质的吸附能力也随之降低；反之
• 分馏法
  • 原理
    • 利用混合物中各成分沸点不同进行分离，适用于液体混合物的分离--挥发油，液体生物碱等。
  • 种类
    • 常压分离、减压分离、分子蒸馏
• 膜分离法
  • 种类
    • 微滤：0.1-75um
    • 超滤：5×10三次方-5×10五次方
    • 钠滤：200-2000
    • 过滤，工业生产普遍
    • 反渗透
  • ≈过滤
• 升华法
  • 原理
    • 利用某些物质具有升华性，可直接由固体变为气体，遇冷又直接结为固体的性质
  • 产率较低，不适合大规模生产
• • 极性：B＞A
  • Ⅰ、Ⅱ区别：展开剂极性不同，Ⅱ＞Ⅰ
  • Rf值可信区间：0.2--0.8
  • 结论
    • Rf值大小顺序不受展开剂的影响
    • 同一成分Rf值受展开剂极性影响，极性大，Rf值大；反之
• 注：每步过滤都是除杂的过程，要明确自己要的是那部分
• 浓缩常用法
  • 常压浓缩
    • 直接蒸发
      • 水做溶剂
    • 常压蒸馏
      • 物质沸点低
  • 减压浓缩
    • 减压蒸馏
    • 旋蒸仪