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药物分析
药物分析总论，包含鉴别、杂质检查、含量测定等章节，内容相对还是比较喜欢详细的，大家可以借鉴。
编辑于2022-12-07 22:08:48 河南
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- 大纲
药物分析
绪论
药品质量研究的内容与药典概况
药物的杂质检查
药物的杂质与限量
药物的杂质与纯度
药物杂质的来源
1.生产过程中引入的杂质
2.贮藏过程中引入的杂质
药物杂质的分类
1.按来源分类
一般杂质（信号杂质）
特殊杂质（有关物质）
还可分为工艺杂质、降解产物、外来杂质
2.按毒性分类
毒性杂质
信号杂质
3.按化学性质分类
无机杂质
大都属于一般杂质
有机杂质（有关物质）
特定杂质
非特定杂质
有机挥发性杂质（残留溶剂）
杂质的限量
定义：药物中所含杂质的最大允许量
公式：杂质限量=杂质最大允许量/供试品量X100%
杂质限量的控制方法
限量检查法
对照品法
杂质限量 =（标准溶液的浓度X标准溶液的体积）/供试品量X100% L=（CXV）/ SX100% C：g/ml V：ml S：g
注意平行原则
灵敏度法
比较法
定量测定法
杂质的检查方法
化学方法
显色反应检查法
比色法
沉淀反应检查法
比浊法控制杂质限量
重量法测定杂质量
生成气体的检查法
滴定法
色谱方法（有关物质检查首选）
TLC
杂质对照品法
适用于：已知杂质并能制备杂质对照品
供试品溶液的自身稀释对照法
适用于：杂质结构不确定或已知但没有杂质对照品
两法并用法
适用于：存在多个杂质
对照药物法
适用于：无杂质对照品，或供试品杂质斑点与主成分斑点颜色有差异
HPLC
外标法（杂质对照品法）
加校正因子的主成分自身对照测定法
不加校正因子的主成分自身对照法
面积归一化法
GC
与HPLC方法相同
标准溶液加入法
毛细管电泳法
多肽、酶类等药物
光谱方法
紫外-可见分光光度法
红外分光光度法
原子吸收分光光度法
重金属杂质检查
其他方法
热分析法
热重分析TG
差示扫描量热分析DSC
酸碱度检查法
酸碱滴定法
指示液法
pH测定法
物理性状检查法
臭味差异
挥发性差异
颜色差异
溶解性差异
旋光性差异
一般杂质的检查
1.氯化物检查法
原理：微量氯化物在硝酸酸性下与硝酸银生成氯化银胶体微粒显白色混浊，与一定量的标准氯化钠溶液同条件下产生的混浊程度比浊
注意事项： 稀硝酸：避免弱酸银盐，如碳酸银、磷酸银及氧化银沉淀干扰；并可加速氯化银生成。50ml溶液中10ml为宜。 如供试品带颜色，采用内消色法。 溶液不澄清，滤纸滤过，滤纸用含硝酸的水洗净后使用防止滤纸中的氯化物。 有机氯，氧瓶燃烧法。
2.硫酸盐检查法
原理：稀盐酸条件下+氯化钡，生成硫酸钡白色沉淀，与硫酸钾产生的比浊
注意事项： 盐酸：防止碳酸钡或磷酸钡等弱酸形成钡盐沉淀。但酸度过大可使硫酸钡溶解，降低检查灵敏度。50ml溶液中2ml稀盐酸为宜。 内消色法
3.铁盐检查法
原理：盐酸，+硫氰酸盐，生成红色可溶性硫氰酸铁配离子，标准铁溶液比色
注意事项： 标准铁溶液：硫酸铁铵，并加入硫酸防止铁盐水解。 盐酸：防止三价铁水解，50ml溶液中4ml为宜。 过氧铁铵：氧化供试品中二价铁成三价铁；并防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。 反应可逆，加过量的硫氰酸铵
4.重金属检查法
重金属定义
第一法 硫代乙酰胺法
适用于：酸性溶液中重金属
原理：硫代乙酰胺弱酸性条件下（3.5）水解，产生硫化氢，与重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与标准铅溶液比色。
注意事项： 标准铅溶液：硝酸铅，加硝酸防止铅盐水解。 若处理中用了强酸，加硫代乙酰胺前，加氨水至酚酞显中性，再加pH3.5醋酸盐缓冲液调pH。
第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法
适用于：难溶于水、稀酸或与水互溶有机溶剂的有机药物，以及含有可与金属离子强配位基团的芳环、杂环药物
原理：炽灼破坏为重金属的氧化物残渣，加硝酸进一步破坏，蒸干。加盐酸转化为易溶于水的氯化物，按第一法。
注意事项： 温度越高，重金属损失越多，500-600℃，同时控制时间。 蒸干，除尽氧化氮，否则亚硝酸氧化硫化氢析出硫，影响比色。 含钠盐或氟的有机物，炽灼时腐蚀瓷坩埚，改用铂坩埚或硬质玻璃蒸发皿。
第三法 硫化钠法
适用于：溶于碱性水溶液
原理：碱性介质（氢氧化钠）中，加硫化钠，生成硫化铅沉淀，与标准铅比色
注意事项： 硫化钠对玻璃有腐蚀性，且久置产生絮状物，临用新制。 饱和硫化氢水溶液：可代替硫化钠和硫代乙酰胺，硫化铁+稀盐酸制备，现配现用，否则被氧化析出硫。
5.砷盐检查法
第一法 古蔡氏法
ChP2015，BP2015
原理：金属锌与酸作用生成新生态的氢（氢气），与药物中的砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与标准砷溶液生成的标准砷斑比较。（颜色不得更深）
注意事项： 1）标准砷溶液：三氧化二砷，氢氧化钠溶解，稀硫酸定量稀释配制 2）碘化钾和氯化亚锡： ①五价砷生成砷化氢的速度较三价砷慢，将五价砷还原为三价砷； ②碘化钾被氧化生成的碘可被氯化亚锡还原为碘离子，与反应中产生的锌离子形成稳定的配位离子，有利于砷化氢的生成； ③氯化亚锡与锌作用，在锌的表面生成锌锡齐，去极化，使氢气均匀而连续的发生； ④锑化氢也可以与溴化汞试纸作用，氯化亚锡和碘化钾还可抑制锑化氢的生成。 3）醋酸铅棉花： ①锌与供试品中含有硫化物，可生成硫化氢与溴化汞试纸作用，醋酸铅可吸收硫化氢； ②控制砷化氢的通过速度。
2ug As检查
第二法 二乙基二硫代氨基甲酸银法DDC-Ag
原理：金属锌与酸作用生成新生态的氢，与药物中的砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，还原二乙基二硫代氨基甲酸银，产生红色胶态银，用目视比色法或在510nm处测定吸光度，并用标准对照比较。（不得更大）
1-10ugAs检查
其他方法
白田道夫法
次磷酸法
6.干燥失重测定法
常压恒温干燥法
受热较稳定，105℃干燥恒重
减压干燥法与恒温减压干燥法
熔点低，受热易分解
干燥剂干燥法
受热易分解或易升华；硅胶，硫酸，五氧化二磷
7.水分测定法
费休氏法
碘氧化二氧化硫为三氧化硫时，需要一定量的水分参与。
碘：水=1：1
终点：多余游离碘呈现红棕色
8.炽灼残渣检查法
炽灼残渣定义
有机药物非挥发性无机杂质的检查与控制
9.易炭化物检查法
易炭化物定义
目视比色法
10.残留溶剂测定法
残留溶剂定义
有机溶剂按毒性分类
第一类：避免使用
第二类：限制使用
第三类：按GMP或质控要求使用
第四类：按GMP或质控要求使用
11.溶液颜色检查法
定义
目的：控制药物中有色杂质的含量
标准比色液
比色用硫酸铜：蓝色
比色用重铬酸钾：黄色
比色用氯化钴：红色
方法
第一法 目视比色法
不得更深
第二法 吸光度比较法
吸光度不得超过规定限度值
第三法 色差计法
供试品溶液与水的色差值应不超过标准比色液与水的色差值
12.溶液的澄清度检查法
澄清度定义
浊度标准液的制备
10%乌洛托品溶液，偏酸性条件下，水解生成甲醛，与等体积1.00%硫酸肼溶液混合后，肼醛缩合生成不溶于水的甲醛腙白色混浊储备液，临用前定量稀释，浊度号0.5，1，2，3，4
特殊杂质的检查与鉴定方法（了解）
药物的含量测定与分析方法的验证
定量分析方法的分类
容量分析法
特点
1.方便简便易行
2.方法耐用性高
3.测定结果准确
4.方法专属性差
适用范围
原料药的含量测定
计算
滴定度
T（mg/ml）=m x（a/b）x M
含量的计算
直接滴定法
公式
间接滴定法
生成物滴定法
剩余量滴定法
公式
光谱分析法
光谱范围
紫外区：190-400nm
可见光区：400-760nm
近红外区：760-2500nm
红外区：2.5-40um或4000-250cm-1
分光光度法
紫外-可见分光光度法
特点
1.简便易行
2.灵敏度高
3.准确度高
4.专属性较差
适用范围
可用于药物制剂的含量测定，多用于药物制剂的定量检查
190-800nm
A在0.3-0.7之间为宜
朗伯比尔定律
A=lg（1/T）=Ecl
用于含量测定的方法
对照品比较法
C供=A供xC对/A对 原料药百分含量：含量（%）=（C供xD）/Wx100 固体制剂含量相当于标示量的百分数：标示量（%）=（C供xDxW平）/（WxB）x100
吸收系数法
C供（g/ml）=A供/（Ex100）
用本法时，吸收系数一般＞100
计算分光光度法
比色法
荧光分光光度法
特点
1.高灵敏度
2.荧光自熄灭
低浓度溶液中进行
3.易受干扰
空白试验
适用范围
vitB1 硫色素荧光法
色谱分析法
HPLC
特点
1.高灵敏性
2.高专属性
3.高效能与高速度
对仪器的一般要求
系统适用性试验
色谱柱的理论板数n
评价色谱柱的分离效能
分离度R
评价待测物质与被分离物质之间的分离程度
待测物质峰与相邻峰之间的分离度应大于1.5
灵敏度
评价色谱系统检测微量物质的能力
以噪比（S/N）表示
定性测定时，信噪比应不小于3
拖尾因子T
评价色谱峰的对称性
以峰高做定性参数时，T在0.95-1.05之间
重复性
评价色谱系统连续进样时响应值的重复性能
测定法
内标法
外标法
GC
药物分析方法的验证
验证内容
1.准确度
回收率表示
2.精密度
偏差、标准偏差、相对标准偏差表示
分类
重复性
中间精密度
重现性
3.专属性
4.检测限LOD
定义
常用方法
直观法
信噪比法
3：1或2：1
基于响应值偏差和标准曲线斜率法
5.定量限LOQ
定义
方法：与检测限相同，信噪比：10：1
6.线性
7.范围
8.耐用性
分析方法验证的设计 内容选择原则
非定量分析
专属性、检测限、耐用性
定量分析
除检测限、定量限外其余都要
微量定量分析
除检测限视情况而定其余都要
分析样品的制备常用方法
1.直接溶解法
2.提取分离法
3.萃取浓集法
4.化学分解法
水解法
锌粉还原法
5.化学衍生化法
6.有机破坏法
酸破坏法
凯氏定氮法
滴定液：硫酸
指示剂：甲基红-溴甲酚绿
滴定终点：蓝绿色---＞灰紫色
碱破坏法
氧瓶燃烧法
吸收液的选择
含F：茜素氟蓝比色法，水为吸收液
含Cl：银量法，水-氢氧化钠
含Br：银量法，水-氢氧化钠
含I
硝酸银滴定法：水-氢氧化钠-二氧化硫饱和溶液
间接碘量法：水-氢氧化钠
含S：水-浓过氧化氢
药物制剂分析概论
药物制剂类型及其分析特点
药物制剂类型
药物制剂的分析特点
1.比原料药物分析困难的原因P432
2.原料药物与制剂分析相比
3.不同药物制剂相比
4.制剂分析特点
性状分析
鉴别
检查
杂质检查
剂型检查、安全性检查
含量测定
药物制剂的稳定性试验及相容性试验
定义：药物的稳定性、相容性
稳定性试验
影响因素试验
加速试验
长期试验
片剂和注射剂的分析
片剂分析
性状分析
鉴别试验
剂型检查
常规：重量差异、崩解时限
原料药与辅料难以混匀：含量均匀度、崩解时限
活性成分难溶于水：重量差异、溶出度
含量测定
糖类的干扰及其排除
稀释剂
硬脂酸镁的干扰及其排除
润滑剂
辅料及包材的分析
注射剂分析
性状分析
鉴别试验
剂型检查及安全性检查
1.装量
2.渗透压摩尔浓度
3.可见异物
灯检法
光散射法
4.不溶性微粒
光阻法
显微计数法
5.无菌
薄膜过滤法
直接接种法
6.细菌内毒素或热原
细菌内毒素检查法
凝胶法（鲎试剂）
光度测定法
热原检查法
家兔法
含量测定
溶剂水的干扰及其排除
干扰非水溶液滴定法
溶剂油的干扰及其排除
干扰容量法、反向高效液相色谱法
排除干扰：有机溶剂稀释法、萃取法、柱色谱法
抗氧剂的干扰及其排除
种类：亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠
排除方法
加掩蔽剂丙酮或甲醛（滴定液的氧化性较强时不用甲醛）
加酸分解（强酸，产生二氧化硫气体加热逸出） 亚硝酸钠滴定法不处理
加弱氧化剂氧化：过氧化氢或硝酸
辅料及包材的分析
复方制剂的分析
中药材及其制剂分析概论
概述
中药的特色与分析特点和对策
1.中药及其制剂的生产和使用有中医理论的指导
2.中药及其制剂的质量有多环节、多因素的影响
3.中药及其制剂的成分有复杂多变的特点
4.中药不同工艺和不同制剂中同一成分的质量标准有不同的要求
中药及其制剂的分类与质量分析要点
中药材和饮片
显微鉴定
植物油脂和提取物
中药成分和单方制剂
丸剂
鉴别：显微组织观察
检查项目：水分、重量差异、溶散时限、微生物限度检查
含量测定：选择君药、贵重药、毒性大的药物
散剂
显微鉴别法
检查项目：粒度、外观均匀度、水分和装量差异、装量、无菌、微生物限度检查
颗粒剂
只有含有药材细粉的才可采用纤维鉴别
粒度、水分、溶化性、装量差异、装量、微生物限度
含量测定：HPLC
合剂与口服液
相对密度、pH
其他中药制剂
中药分析用样品制备方法
取样和样品保存
样品的制备
提取
超声提取法
回流提取法
连续回流提取法
萃取法
水蒸气蒸馏法
超临界流体萃取法
高速逆流色谱法
分离和纯化
子主题
中药的鉴别
1.性状鉴别法
2.显微鉴别法
3.理化鉴别法
4.色谱鉴别法
5.指纹图谱与特征图谱鉴别法
中药的检查项目与内容
1.水分测定法
烘干法
减压干燥法
甲苯法
GC
2.膨胀度测定法
3.杂质检查法
4.灰分测定法
总灰分测定法
酸不溶性灰分测定法
5.重金属及有害元素测定法
6.农药残留测定法
GC、质谱法
7.有关毒性物质的检查
8.黄曲霉素测定法
9.酸败度测定法
测定酸值、羰基值、过氧化值
中药有效成分的含量测定和质量整体控制
含量测定
指标成分的选择原则
方法
中药多指标成分的含量测定
中药多成分含量的单对照品同时测定法
一测多评法QAMS
中药质量的整体控制和中药指纹图谱
中药指纹图谱的含义和研究意义
中药指纹图谱研究的技术关键
生物制品分析
生物制品的分类
1.疫苗类药物
2.抗毒素及抗血清类药物
3.血液制品
4.重组DNA蛋白制品
诊断制品
质量要求
安全性
有效性
可接受性
鉴别试验
1.免疫双扩散法
2.免疫电泳法
3.免疫印迹法
4.免疫斑点法
5.酶联免疫法
检查内容
1.物理性状的检查
外观
真空度及溶解速率
装量
2.蛋白质含量测定
凯氏定氮法（钨酸沉淀法和三氯醋酸沉淀法）、酚试剂法（Lowey法）和双缩脲法（紫外可见分光光度法）
3.防腐剂和灭活剂含量测定
苯酚、甲醛、三氯甲烷、汞制剂
4.纯度检查
电泳法、HPLC
5.相对分子质量或分子大小测定
凝胶层析法、SDS-PAGE法、超速离心分析法
6.其他
水分含量测定、酸碱度、氯化钠测定
7.安全检查
对象
菌毒种和主要的原材料
半成品（包括原液）
成品
内容
1.过敏性物质的检查
过敏性试验：豚鼠
牛血清含量的测定
血型物质的检测
2.杀菌、灭活和脱毒检查
无菌试验
活毒检查
解毒试验
3.残余毒力和毒性物质的检查
残余毒力检查
无毒性检查
毒性检查
防腐剂检查
4.外源性污染的检查
野毒检查
热原试验
乙肝表面抗原HBsAg
8.生物制品的效力测定
免疫力试验
定量免疫定量攻击法
变量免疫定量攻击法
定量免疫变量攻击法
被动保护力测定
活菌数和活病毒滴度测定
血清学试验
9.杂质与检查
一般杂质检查
特殊杂质检查
生物污染物
产品相关杂质
工艺添加剂
合成抗菌药物
抗生类药物
甾体激素类药物
维生素类药物
莨菪烷类抗胆碱药物
吩噻嗪类抗精神病药物
巴比妥及苯二氮䓬类镇静催眠药物
二氢吡啶类钙通道阻滞药物
对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物
苯乙胺类肾上腺素药物
芳酸类非甾体抗炎药物
药物的鉴别试验
药物鉴别实验的定义与目的
鉴别试验的项目
性状
外观
溶解度
物理常数
熔点
比旋度
吸收系数
。。。。。。
一般鉴别试验
1.有机氟化物
氧瓶燃烧法破坏，碱性溶液（氢氧化钠）吸收，与茜素氟蓝、硝酸亚铈，pH4.3（12%醋酸钠的稀醋酸溶液），生成蓝紫色络合物。
2.有机酸盐
水杨酸盐
与三氯化铁生成配位化合物，中性条件显红色，弱酸性显紫色
加稀盐酸，析出白色水杨酸沉淀，沉淀在醋酸铵试液中溶解
酒石酸盐
供试品中性溶液，氨制硝酸银溶液，水浴加热，银镜
3.芳香第一胺类
供试品+稀盐酸+亚硝酸钠+脲溶液，振荡，+碱性β-萘酚，橙黄色至猩红色沉淀
4.托烷生物碱类
Vitali反应：水解生成莨菪酸，发烟硝酸加热处理，转变为三硝基衍生物，再与氢氧化钾醇溶液作用，转变成醌型产物，显深紫色（后马托品无此反应以区分）
5.无机金属盐
钠、钾、钙、钡盐的焰色反应
铂丝，盐酸湿润后蘸取供试品，无色火焰中燃烧
钠：鲜黄色
钾：紫色
钙：砖红色
钡：火焰显黄绿色，绿色玻璃中透视，显蓝色
钠、钾混存：透过蓝色钴玻璃滤去钠焰黄色，显粉红色
铵盐
+过量的氢氧化钠加热，分解产生氨臭，遇用水湿润的红色石蕊试纸，变蓝，并使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色
6.无机酸根
氯化物
稀硝酸+硝酸银，生成白色凝乳状沉淀；沉淀加氨水即溶解，再加硝酸酸化，沉淀复生成。若为生物碱或有机碱的盐酸盐，先加氨水呈碱性，除去沉淀再试验
二氧化锰+硫酸，加热，产生氯气，用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色
硫酸盐
氯化钡，白色沉淀，盐酸，硝酸中均不溶解
醋酸铅，白色沉淀，醋酸铵或氢氧化钠中溶解
盐酸，不生成白色沉淀（与硫代硫酸盐区分）
硝酸盐
硫酸+硫酸亚铁（沿管壁），两液层，接界面显棕色
硫酸+铜丝，加热，红棕色蒸气
高锰酸钾，紫色不退（与亚硝酸盐区分）
专属鉴别试验
鉴别方法
1.化学鉴别法
显色反应鉴别法
沉淀生成反应鉴别法
荧光反应鉴别法
气体生成反应鉴别法
使试剂褪色的鉴别法
测定生成物的熔点
2.光谱鉴别法
紫外光谱鉴别法
①测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长
②规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度
③规定吸收波长和吸收系数法
④规定吸收波长和吸收度比值法
⑤经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性
USP38：对照品法； JP16，ChP2015：与标准图谱特征对比； BP2015：在一定波长范围内扫描，寻找最大吸收，并测定吸光系数；或比较不同最大吸收的吸收度比值
红外光谱鉴别法
常用于原料药
近红外光谱法
原子吸收法
核磁共振法
质谱鉴别法
粉末X射线衍射法
3.色谱鉴别法
薄层色谱鉴别法
HPLC和GC
4.显微鉴别法
5.生物学法
生物效应鉴别法
基因鉴别法
6.指纹图谱与特征图谱鉴别法