PCR技术

这是一篇关于PCR技术的思维导图，大肠杆菌是食品中一项重要致死的病菌体，大肠杆菌与其它类型的病原菌相比，不仅来源广，而且含有致病毒素会广泛存在病菌毒力基因中。

PCR技术

• 定义
  • 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一种体外酶促扩增特异DNA片段的技术。反应中DNA 产物的生成以指数方式增加，能将极微量的DNA 成百万地扩增
• 原理
  • PCR的基本原理是在体外模拟体内DNA复制的过程。
• 步骤
  • 变性 Denaturation(95℃)
    • 模板 DNA在95℃左右的高温条件下双螺旋的氢键断裂，双链DNA解链成为单链DNA并游离于反应液中。
  • 退火 Annealing(55℃)
    • 两条寡核苷酸引物在适当温度下，分别依据碱基互补结合在模板DNA扩增区域两端
  • 延伸 Extension(72℃)
    • 在4种dNTP底物及Mg2+存在下，DNA聚合酶在最适温度下将单链核苷酸按碱基互补配对原则从引物3'-端插入，使引物沿5→3'方向延伸合成新股DNA。
• 优点
  • 灵敏度高
  • 特异性强
  • 自动化程度高
  • 能够提高最终检测结果精准性以及食品检测效率和质量
• PCR在食品检测中的应用
  • 检测食品中的沙门氏菌
    • 优势
      • 而将PCR技术应用检测食品中的沙门氏菌，能够快速完成相应检测工作，检测沙门氏菌准确度高。这主要是因为，采用PCR技术进行检测，能够通过扩增序列方式，实现对沙门氏菌特性的清晰、精准判断
    • 技术
      • 常规PCR
      • 套式PCR
      • 多重PCR
  • 检测食品中的单核细胞增生李斯特菌
    • 技术
      • 实时荧光 PCR技术
        • 原理
        • 优点
    • 优势
      • 实时荧光PCR技术应用起来灵敏度高
      • 能够缩短检测作业时间
      • 能够得到精准检测结果
      • 最大程度减少由于食品检测对环境以及人身体健康造成的危害
  • 检测食品中金黄色葡萄球菌
    • 金黄色葡萄球菌危害
      • 食品中如果含有金黄色葡萄球菌，人一旦食用这一类食物，将会引起食物中毒。中毒后，病原菌将会在人体内的肠道内形成大量肠毒素，使中毒人员出现腹泻、呕吐等现象，情况严重时，可能会由于腹腔内脏器发生衰竭而引起死亡。
    • 技术
    • 优势
      • 能够精准检测金黄色葡萄球菌的耐热性基因，检测结果精准，能够有效避免检测时出现假阳性和假阴性情况的发生。
  • 检测食品中的大肠杆菌
    • 大肠杆菌危害
      • 大肠杆菌是食品中一项重要致死的病菌体，大肠杆菌与其它类型的病原菌相比，不仅来源广，而且含有致病毒素会广泛存在病菌毒力基因中。
    • 优势
      • PCR技术在应用过程中，可以通过基因提取和扩增等步骤，获取DNA片段，完成相应对比分析，确定食品中是否含有致病型大肠杆菌，检测结果更加精准。
  • 采用PCR技术检测转基因食品
  • 检测食品中的有效成分
• 注意事项
  • 制备有效的PCR模板
  • 提高对检测过程中污染问题的重视
  • 确保检测对象生物活性