第六章血清总蛋白（TP）的生物化学检验项目与检测方法

直接紫外吸收法：根据蛋白质分子中芳香族氨基酸在280nm处的紫外吸收值，计算蛋白质含量。因生物样品常混有核酸，核酸最大吸收峰为260nm，在280nm也有较强的光吸收，因而测得的蛋白质浓度可采用两个波长的吸光度予以校正。

血清总蛋白（TP）的生物化学检验项目与检测方法

• 检测方法
  • 双缩脲法
    • 检测原理
      • 蛋白质中的两个相邻肤键在碱性溶液中能与二价铜离子作用产生稳定的紫红色络合物。此反应与双缩脲（为两个尿素分子缩合后生成）在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称为双缩脉法。
    • 性能评价
      • 优点
        • 特异性高、目前TP中最好的测定方法
      • 缺点
        • 灵敏度不高，不能用于测定脑脊液和尿液
    • 用途
      • 用于胸腹积液测定
  • 凯氏定氮法
    • 检测原理
      • 因蛋白质中含氮量为较恒定的16%，即1克氮相当于6.25g蛋白质，因此测定样品中的含氮量，可推算出样品中的蛋白质含量。（凯氏定氮法将蛋白质用硫酸加热分解，在有催化剂存在的条件下，其中的氮生成硫酸铵，后者与浓碱作用生成 NH 4 OH ，再用蒸馏法将氨蒸馏并被硼酸吸收，将砌酸铵用标准盐酸滴定。根据标准酸的消耗量可算出总氮量，再折算成蛋白质含量。）
    • 性能评价
      • 优点
        • 准确性高、精密度和灵敏度好，过去曾被公认为参考方法
      • 缺点
        • 作过程复杂、费时
    • 用途
      • 标定蛋白质和校正其他检验方法
  • 染料结合法
    • 检测原理
      • 在酸性环境下，蛋白质带正电荷，可与染料阴离子反应而产生颜色改变。目前临床上最多用的是邻苯三酚红钼法，在酸性介质中，邻苯三酚红﹣钼酸盐与样品中蛋白质形成复合物，使其最大吸收峰从467nm转移至594nm，在600nm处的吸光度与蛋白质浓度成正比。
    • 性能评价
      • 优点
        • 简便、快速、灵敏度高
      • 缺点
        • 染料对比色杯有较强的吸附力
    • 用途
      • 尿液、脑脊液等低蛋白含量样本的测定
  • 比浊法
    • 检测原理
      • 某些酸如三氯醋酸、磺基水杨酸等能与蛋白质结合而产生微细沉淀，由此产生的悬浮液浊度大小与蛋白质的浓度成正比，称为比浊法。苄乙氯铵较在碱性条件下与蛋白质形成沉淀，其悬浮液稳定，可在660nm处进行浊度测定。
    • 性能评价
      • 优点
        • 操作简单、无需特殊仪器
      • 缺点
        • 影响因素较多，已被淘汰
    • 用途
      • 曾用于尿液、脑脊液等低蛋白浓度样本的分析
  • 酚试剂法
    • 检测原理
      • 蛋白质中酪氨酸和色氨酸使磷钨酸和磷铝酸还原为钨蓝和铝蓝，显色物的蓝色程度与蛋白质浓度成正比，称为酚试剂法。 Lowry 将酚试剂法进行了改良，先用碱性铜溶液与蛋白质反应，再将铜﹣肽键络合物中的酪氨酸和色氨酸与酚试剂反应，产生最大吸收在745~750nm的颜色，呈色灵敏度更为提高，达到双缩脉法的100倍左右，有利于检出较微量的蛋白质。
    • 性能评价
      • 优点
        • 灵敏度高，可测微量的蛋白质
      • 缺点
        • 易受还原性物质，如带﹣ SH 的化合物、酚类等干扰
    • 用途
      • 测定单一蛋白质，临床上主要用于血清粘蛋白测定
  • 直接紫外吸收法
    • 检测原理
      • 根据蛋白质分子中芳香族氨基酸在280nm处的紫外吸收值，计算蛋白质含量。因生物样品常混有核酸，核酸最大吸收峰为260nm，在280nm也有较强的光吸收，因而测得的蛋白质浓度可采用两个波长的吸光度予以校正，即蛋白质浓度（ g / L )= 1.45A280nm-0.74A260nm。
    • 性能评价
      • 优点
        • 保留样本的生物学活性
      • 缺点
        • 特异性和准确性受蛋白分子中含共轭双键氨基酸的比例影响
    • 用途
      • 不破坏样品，适用于蛋白质提取、纯化中含量的粗略估计
• 参考区间
  • 成人65-85g/L
    • 直立行走
      • 64-83g/L
    • 卧床者
      • 60-78g/L
  • 其随年龄增大而增大，60岁后稍有下降，卧床比直立状态低
  • 新生儿46-70g/L
• 评价
  • 临床上最常用。与血清白蛋白同时检测，能计算球蛋白浓度
• 临床意义
  • • 常见于血清白蛋白含量下降
    • 少数由免疫球蛋白含量的明显下降引起
    • 其他血清蛋白质减少，一般不能在TP浓度中得到反映
  • • 主要见于慢性炎症等所致的多克隆免疫球蛋白增多
    • 以及浆细胞病时单克隆免疫球蛋白的显著增多
• 检测依据
  • TP是血浆中所有蛋白质含量的总体反映，与肝脏合成蛋白功能以及免疫球蛋白合成情况有关，尤其是结合血清白蛋白浓度，能大概反映血清免疫球蛋白的的含量