蛋白质氨基酸的测定

氨基酸序列测定 ，内容涵盖氨基酸的分离，蛋白质化学测序，蛋白质三维结构测定的知识点梳理。

蛋白质氨基酸的测定

• 氨基酸的分离
  • 离子交换层析（强酸型阳离子交换树脂）
  • 分配层析
    • 纸层析Rf
    • 薄层层析
    • 分配柱层析
• 蛋白质化学测序（一级结构）
  • 要求
    • 知道相对分子质量，误差在10%
    • 样品均一、纯度在97%以上
  • 步骤
    • 确定不同多肽链的数目
      • 末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子的摩尔数之间的关系
    • 拆分多肽链
      • 具有四级结构的蛋白质的亚基拆分
    • 断裂二硫键
      • 二硫苏糖醇还原法
      • 过甲酸氧化法
    • 分析肽链氨基酸组成
    • 鉴定N、C端残基
      • C端
        • 肼解法
        • 羧肽酶法
      • N端
        • Edman(苯异硫氰酸酯）
          • 偶联-环化-转化
        • DNS（丹磺酰氯）荧光性质
        • Sanger（二硝基氟苯）
        • 氨肽酶法（亮氨酸）
    • 裂解多肽链成小片段
      • 酶解法（专一性）
        • 胰蛋白酶——Arg、Lys
        • 凝胰乳蛋白酶（糜蛋白酶）——Phe、Tyr、Trp
      • 化学法
        • 羟胺法
        • 溴化氰法——Met
    • 测定各肽段的氨基酸序列
      • 直接测定 大-小-拼装
        • Edman降解法
        • 质谱法
      • 间接测定
        • 克隆基因-测定核苷酸序列-反推
    • 重建多肽链一级结构
      • 片段重叠法
    • 确定二硫键位置
• 蛋白质三维结构测定
  • 冷冻电镜
  • 核磁共振
  • X-射线晶体衍射法