细胞生物学的研究方法

细胞生物学的研究方法，分享了细胞形态结构的观察方法、细胞及其组分的分析方法、细胞培养与细胞工程、细胞及生物大分子的研究方法的内容。

细胞生物学的研究方法

• 细胞形态结构的观察方法
  • 光镜
    • 利用样本对光的吸收形成图像
    • μm级分辨率
    • 技术
      • 相差显微镜
        • 根据光的干涉原理，增强样品的反差，实现对非染色活细胞的观察
      • 荧光显微镜
        • 通过特定波长的激发光照射在样品的荧光分子上，使之发出荧光
      • 激光扫描共焦显微镜
        • 以激光为光源，极大提高图像分辨率
      • 超高分辨率显微术
  • 电镜
    • 以电子代替光子、磁场代替透镜，利用样品对电子的散射和透射形成图像
    • nm级分辨率
    • 技术
      • 超薄切片技术
        • 电子穿透力有限
      • 负染色技术
        • 利用重金属盐染色
      • 冷冻蚀刻技术
        • 冰冻断裂、蚀刻复型
        • 观察膜断面上的形貌特征，画面有立体感
  • 扫描隧道显微镜
    • 利用量子力学中的隧道效应
    • 原子尺度分辨率
• 细胞及其组分的分析方法
  • 超心离心技术
    • 密度梯度离心
      • 高溶解性的惰性物质（蔗糖、CsCl）在溶液中形成密度梯度，不同的组分根据沉降率形成不同的沉降带
    • 差速离心
      • 随着离心力的加大，细胞的不同组分由重到轻发生沉淀
  • 免疫反应/抗原－抗体反应（Western blotting）
    • 免疫荧光技术
      • ELISA
    • 免疫电镜技术
      • 铁蛋白
      • 酶标
      • 胶体金
  • 核酸分子杂交/DNA、RNA分子杂交（Southern/Northern blotting）
    • 原位杂交
      • 利用荧光标记的分子探针确定核酸序列的位置
  • 流式细胞术
    • 细胞组分测定以及细胞分选
• 细胞培养与细胞工程
  • 动物细胞培养
    • 原代细胞
      • 直接从机体中取出后立即培养，或传至10代以内的细胞
    • 传代细胞
      • 有限细胞系
        • 保留接触抑制，传代次数有限
      • 连续细胞系
        • 染色体发生畸变（亚二倍体或非整倍体），失去接触抑制
    • 细胞株
      • 由细胞系中分离某个细胞并增殖形成的，具有相同遗传性状的细胞系
  • 细胞工程
    • 细胞融合、单克隆抗体技术
      • 两个或多个细胞融合为一个双核或多核细胞
    • 显微操作技术、动物克隆技术
• 细胞及生物大分子的研究方法
  • 荧光漂白技术
    • 检测物质在生物膜上的移动速度
    • 过程
      • 荧光标记
      • 光漂白
        • 激光束照射淬灭荧光分子
      • 光恢复
  • 酵母双杂交技术
    • 通过观察报告基因的表达研究蛋白质之间的相互作用
  • 荧光共振转移技术
    • 检测两种蛋白质分子是否直接相互作用

细胞生物学的研究方法

• 细胞形态结构的观察方法
  • 光镜
    • 利用样本对光的吸收形成图像
    • μm级分辨率
    • 技术
      • 相差显微镜
        • 根据光的干涉原理，增强样品的反差，实现对非染色活细胞的观察
      • 荧光显微镜
        • 通过特定波长的激发光照射在样品的荧光分子上，使之发出荧光
      • 激光扫描共焦显微镜
        • 以激光为光源，极大提高图像分辨率
      • 超高分辨率显微术
  • 电镜
    • 以电子代替光子、磁场代替透镜，利用样品对电子的散射和透射形成图像
    • nm级分辨率
    • 技术
      • 超薄切片技术
        • 电子穿透力有限
      • 负染色技术
        • 利用重金属盐染色
      • 冷冻蚀刻技术
        • 冰冻断裂、蚀刻复型
        • 观察膜断面上的形貌特征，画面有立体感
  • 扫描隧道显微镜
    • 利用量子力学中的隧道效应
    • 原子尺度分辨率
• 细胞及其组分的分析方法
  • 超心离心技术
    • 密度梯度离心
      • 高溶解性的惰性物质（蔗糖、CsCl）在溶液中形成密度梯度，不同的组分根据沉降率形成不同的沉降带
    • 差速离心
      • 随着离心力的加大，细胞的不同组分由重到轻发生沉淀
  • 免疫反应/抗原－抗体反应（Western blotting）
    • 免疫荧光技术
      • ELISA
    • 免疫电镜技术
      • 铁蛋白
      • 酶标
      • 胶体金
  • 核酸分子杂交/DNA、RNA分子杂交（Southern/Northern blotting）
    • 原位杂交
      • 利用荧光标记的分子探针确定核酸序列的位置
  • 流式细胞术
    • 细胞组分测定以及细胞分选
• 细胞培养与细胞工程
  • 动物细胞培养
    • 原代细胞
      • 直接从机体中取出后立即培养，或传至10代以内的细胞
    • 传代细胞
      • 有限细胞系
        • 保留接触抑制，传代次数有限
      • 连续细胞系
        • 染色体发生畸变（亚二倍体或非整倍体），失去接触抑制
    • 细胞株
      • 由细胞系中分离某个细胞并增殖形成的，具有相同遗传性状的细胞系
  • 细胞工程
    • 细胞融合、单克隆抗体技术
      • 两个或多个细胞融合为一个双核或多核细胞
    • 显微操作技术、动物克隆技术
• 细胞及生物大分子的研究方法
  • 荧光漂白技术
    • 检测物质在生物膜上的移动速度
    • 过程
      • 荧光标记
      • 光漂白
        • 激光束照射淬灭荧光分子
      • 光恢复
  • 酵母双杂交技术
    • 通过观察报告基因的表达研究蛋白质之间的相互作用
  • 荧光共振转移技术
    • 检测两种蛋白质分子是否直接相互作用