无菌检查法脑图

中国药典1101无菌检查流程要素，具体有培养基的适用性检查、方法适用性实验、供试品的无菌检查，希望这份脑图会对你有所帮助。

无菌检查

• 培养基的适用性检查
  • 无菌性检查
    • 培养基，2-25℃保存，一般在3周内使用(非密闭，密闭可1年)
    • 每次不少于5瓶
    • 置各培养基规定培养温度不少于14天
  • 灵敏度检查
    • 菌种
      • 1金黄色葡萄球菌
        • 胰酪大豆胨液体培养基，30-35℃，18-24h
          • 1-5： 用PH7. 0 无菌氣化钠-蛋白胨缓冲液或0. 9%无菌氯化钠溶液 制成每lmL含菌数小于100cfu(菌落形成单位）的菌悬液 （室温保存2h内使用，2-8℃可在24h内使用）
          • 取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7 支，分别接种小于100 c fu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2 支，另1 支不接种作为空白对照，培养3 天
      • 2铜绿假单孢菌
        • 胰酪大豆胨液体培养基，30-35℃，18-24h
      • 3枯草芽孢杆菌
        • 胰酪大豆胨液体培养基，30-35℃，18-24h
      • 4生孢梭菌
        • 硫乙醇酸盐流体培养基，30-35℃，18-24h
          • 取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。
      • 5白色念珠菌
        • 沙氏葡萄糖液体培养基，20〜25°C培养24〜48h
      • 6黑曲霉
        • 沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基，20〜25℃培养5〜7 天
          • 6：加人3〜5m l含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7. 0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0. 9 % 无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% (m l/m l)聚山梨醋80 的pH7. 0 无菌氣化钠-蛋白胨缓冲液或0. 9 % 无菌氯化钠溶液 制成每lm l含孢子数小于l00cfu的孢子悬液。 （室温保存2h内使用，2-8℃可在24h内使用）
• 方法适用性实验
  • 1 大肠埃希菌
    • 1-3 直接接种法：硫乙酵酸盐流体培养基6 管，分别接入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌各2 管，其中一支加入供试品，培养时间不超过5天
  • 2 金黄色葡萄球菌
  • 3 生孢梭菌
  • 4 枯草芽孢杆菌
    • 4-6 直接接种法：胰酪大豆胨液体培养基6 管，分别接入小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2 管。其中一支加入供试品，培养时间不超过5天
  • 5 白色念珠菌
  • 6 黑曲霉
• 供试品的无菌检查
  • 样品需求
    • 检验数量：
      • ＞500，取2%或20件，取少者
    • 检验量：
      • 取100mg 或 lc m X 3cm
  • 对照设置
    • 阳性对照
      • 无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌； 抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。阳性对照试验的菌液制备同方 法适用性试验，加菌量小于100cfu，供试品用量同供试品无菌检查时每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养7 2小 时内应生长良好。
    • 阴性对照
      • 阴性对照不得有菌生长。
  • 供试品处理及接种培养基
    • 直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检査的供试品。 取规定量供试品分别等量接种至硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基中。 除生物制品外，一般样品无菌检查时两种培养基接种的瓶或支数相等 除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10% ， 同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，胰酪大豆胨液体培养基每管装量不少于10ml。 供试品检査时，培养基的用量和髙度同方法适用性试验。
  • 培养及观察
    • 将上述接种供试品后的培养基容器分别按各培养基规定的温度培养14天；培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。 如在加人供试品后或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该 培养液适量转种至同种新鲜培养基中，培养3 天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊；或取培养液涂片，染 色，镜检，判断是否有菌
  • 结果判定
    • 阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。 若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定； 若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定， 除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。 当符合下列至少一个条件时方可判试验结果无效： (1)无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求。 (2 )回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。