生物选修一微生物的实验室培养

高中生物人教版选修一微生物的实验室培养思维导图快收下吧!微生物的实验室接种 在实验室中将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 常用的微生物实验室接种方法又有哪几种呢，更多内容赶快收藏学起来吧！

微生物的实验室培养

• 基础知识
  • 菌落
    • 定义
      • 固体培养基上大量繁殖产生的子细胞群体
    • 特征
    • 功能
      • 鉴定菌种的重要依据
  • 培养基
    • 概念
      • 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。
    • 类型用途
      • 物理状态
        • 固体培养基
          • 用于菌种分离、鉴定
        • 液体培养基
          • 用于工业快速培养
        • 半固体培养基
          • 用于菌种鉴定或观察微生物运动
      • 成分
        • 天然培养基
          • 成分不明确（牛肉膏蛋白胨）
        • 合成培养基
          • 成分明确
    • 基本成分
      • 主要营养
        • 水
        • 碳源
          • 无机碳源（自养微生物）
            • CO2、CO32-、HCO3-
          • 有机碳源（异养微生物）
            • 牛肉膏、蛋白胨等
        • 氮源
          • 无机氮源
            • NH4＋、NO3
          • 有机氮源
            • 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等
        • 无机盐
          • 其它大量或微量元素
      • 特殊营养（生长因子）
        • 维生素、某些氨基酸、嘌呤等碱基（是酶和核酸的组成成分，在牛肉膏、蛋白胨、酵母膏中含有
    • 其他条件
      • PH值、温度、氧气、渗透压等
      • 可加入缓冲剂调控适宜的pH值：细菌偏碱，真菌偏酸
    • 配置原则
      • 目的明确
        • 根据微生物的种类、培养目的（生产/科研）选择原料
          • 自养型：不加碳源（利用空气中CO2碳源）
          • 异养型：有机碳源
          • 固氮型：不加氮源
      • 条件适宜
      • 营养全面、浓度适宜、比例恰当
  • 无菌技术
    • 关键
      • 防止外来杂菌的入侵
    • 消毒和灭菌
      • 消毒
        • 定义
          • 较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）
        • 方法
          • 煮沸消毒法
            • 100°C、5~6min，餐具等
          • 巴氏消毒法
            • 70-75°C、30min或80°C、15min，牛奶啤酒酱油等
          • 化学试剂
            • 70-75%酒精、氯气等，皮肤、伤口、动植物组织
          • 紫外线
            • 30W紫外灯照射30min，接种室、超净工作台等
      • 灭菌
        • 定义
          • 强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）
        • 方法
          • 灼烧灭菌
            • 接种环、接种针等金属用具
          • 干热灭菌
            • 耐高温需保持干燥的物品，160～170°C ,1～2小时
          • 高压蒸汽灭菌
            • 培养基培养皿（耐热耐湿）、100KPa（高于标准大气压）、121°C、15～30min
    • 无菌范围
      • 实验操作空间消毒
      • 操作者的手、衣着消毒
      • 实验用具灭菌
      • 实验操作过程
        • 酒精灯火焰旁操作
    • 高压蒸汽灭菌
      • 流程
        • 1
          • 打开桶盖，将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与搁架相平为宜。
        • 2
          • 放回内桶，并装入待灭菌物品。
          • 锥形瓶与试管口端均不与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
          • 注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。
        • 3
          • 加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内
          • 再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
        • 4
          • 加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气
          • 待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。
          • 待压力表到达100kpa（0.1MPa），温度121°C时计时，控制电源保持15-30分钟
        • 5
          • 切断电源，温度自然下降，待压力表指针归零后，打开排气阀，按对称方式打开锅盖，取出物品。
      • 注意事项
        • 锅内水必须用蒸馏水
        • 锅盖螺母必须对称拧紧
        • 一定要在排气阀放出大量蒸汽再关闭。
        • 当灭菌时间结束时，必须等到压力表归零,排气阀第二次打开后再开盖。
        • 灭菌锅超过最大耐受压力后，安全阀会自动弹开，此时锅内物品不能保证灭菌完全，需重新灭菌。
• 实验操作
  • 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
    • 1.计算
      • 根据实际所需培养基用量依配方计算各成分的用量
    • 2.称量
      • 牛肉膏黏稠，用称量纸称取
      • 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、及时加盖
    • 3.溶化
      • 牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解
      • →取纸
      • →加蛋白胨和氯化钠
      • →加琼脂
        • 不断搅拌防止琼脂糊底导致烧杯破裂
      • →补加蒸馏水定容
    • 4.调ph（7.0-7.2），分装，封口
    • 5.灭菌
      • 培养基、培养皿、金属玻璃仪器
    • 6.倒平板
      • 培养基灭菌后，冷却到50°C左右时，才能用来倒平板。
        • 温度过高比较烫手,更易使水汽增多引起污染。
        • 温度过低会凝固，因为琼脂凝固点在44°C以下。
      • 流程
        • 将培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞，夹于右手手心。
        • 右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。
        • 用左手将培养皿盖(较大的）打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10～20mL)倒入培养皿（1/3）深，左手立即盖上皿盖，置于桌面。
        • 等待平板冷却凝固（约需5～10min）。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。
      • 问题
        • 灭菌后用什么办法来估计培养基的温度（50度）
          • 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。
        • 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰
          • 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
        • 平板冷凝后，为什么要将平板倒置
          • 防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染
        • 不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗
          • 不要，防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
    • 7.无菌检查
      • 将灭菌的培养基放入37°C的恒温培养箱中培养24-48小时，以检查灭菌是否彻底
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