专题二 细胞工程 Ⅱ

高中生物选修三，包含自己的理解，供大家参考

细胞工程 Ⅱ

• 动物细胞工程
  • 动物细胞培养
    • 步骤
    • 要点
      • 胰蛋白酶与胃蛋白酶
        • 动物PH是7.2-7.4，胃蛋白酶最适PH为2.0， 所以在培养过程中，对于胃蛋白酶过碱，胃蛋白酶失活
        • 一般胰蛋白酶不会把细胞消化掉
      • 液体培养基
    • 动物细胞培养的条件
      • 无菌、无毒的环境
        • 抗生素
        • 定期更换培养液，清楚自身代谢产物
      • 营养
        • 糖
        • 氨基酸
        • 促生长因子
        • 无机盐
        • 微量元素
        • 血清、血浆
        • 合成培养基
      • 温度和PH
        • 哺乳动物：36.5±0.5℃
        • 多数细胞PH：7.2-7.4
      • 气体环境
        • 95%空气（氧气维持细胞代谢）
        • 5%二氧化碳（维持细胞培养液的PH）
    • 动物细胞培养技术的应用
      • 生物制品
        • 病毒疫苗
        • 干扰素
        • 单克隆抗体
      • 受体细胞
      • 检测有毒物质
      • 生理、病理、药理研究
  • 动物核移植
    • 胚胎细胞核移植
    • 体细胞核移植
  • 动物细胞融合
    • 过程（P52)
    • 要点
      • 两个核的融合是在第一次有丝分裂时进行
      • 细胞融合技术突破了有性杂交的局限
  • 单克隆抗体
    • 特点：化学性质单一、特异性强
    • 单克隆抗体的制备
      • 要点
        • B细胞从脾脏获取
          • 胸腺是T细胞成熟的地方
          • 骨髓的B细胞未经过免疫
        • 杂交后有5大类细胞（注意是对称杂交还是非对称杂交）
        • 筛选
          • 第一次：用特定的选择培养基筛选出多种杂交瘤细胞
          • 第二次(克隆化培养与抗体检测）能产生所需抗体的杂交瘤细胞
        • 有限稀释法（克隆化）
          • 子主题
            • 将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖
            • 然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔
            • 阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞
        • 获得抗体
          • 注射到小鼠腹腔内增殖
          • 体外直接培养
      • 应用
        • 作为诊断试剂
          • 准确
          • 高效
          • 快速
        • 用于治疗疾病和运载药物
          • 原理：膜的受体与之特异性结合