抗原实验流程图

抗原实验流程图，具体是：沟通确定、实验前期准备、样品接收、样品核对、样品处理、提取上样、上机PCR扩增、实验室卫生清洁消毒、结果分析、样本保存及销毁。

抗原实验流程图

• 沟通确定
  • 样品种类
  • 送样时间
  • 检测项目
  • 是否紧急
  • 确定实验可行性
    • 实验时间是否合理
    • 实验仪器是否正常
    • 实验试剂耗材是否充足
  • 沟通结果
    • 实验不具有可行性
      • 检测工作取消
    • 实验具有可行性
      • 准备后续实验工作
• 实验前期准备
  • 填写相关记录表
    • 纸质表单
      • 样品登记表
      • 来样登记表
      • 样品信息登记表
      • 样品记录记录单
    • 电子表单
      • 微动保登记表
  • 实验室清扫消毒
    • 地面
      • 1：30配置84消毒药喷洒浸泡作用后清水拖地
    • 台面
    • 桌面
    • 门把手
    • 仪器外表面
    • 1：50配置84消毒药抹布沾取擦拭后清水擦拭干净
    • 生物全柜内
    • 核酸提取仪内
    • 仪器自带紫外消毒灯照射消毒
  • 仪器准备
    • 生物安全柜
    • 超净工作台
    • 冷冻离心机
    • 金属浴
    • 核酸提取仪
    • PCR扩增仪
    • 组织研磨仪
  • 耗材准备
    • 消毒药 生理盐水配置 EP管板架 封板膜 磁封套 八联管/盖 恒温金属冰盒 枪头 1.5mL无菌无酶EP管 乳胶手套 实验服 配平用离心管
      • 日常必备
    • 酒精灯 打火机 剪刀 锆株 研磨棒
      • 组织样本处理
  • 试剂配置
    • 需配置体系
      • 试剂配置室
        • TAKARA RNA一步法：引物探针
        • TAKARA DNA两步法：引物探针
        • 金瑞鸿捷：冻干粉+预混液
        • 金瑞鸿捷：阴/阳性对照
        • Thermo3.0 PRRS三从鉴定试剂
    • 无需配置体系
      • 样品处理室
        • IPC
        • 提取试剂盒
        • 精液裂解液
        • 蛋白酶K
      • 提取上样室
        • PCR反应体系（已分装好）
          • Thermo ASFV
          • 明日达 ASFV
          • 明日达ASFV三重鉴定试剂
          • 亿森宝ASFV三重鉴定试剂
        • 阴性对照
        • 阳性对照
    • 注意事项
      • 将待用试剂放置对应科室，需冷藏的试剂注意放置冰箱4℃冷藏位置
      • 部分试剂不需要配置的，可提前使用八联管分装放置-20℃冷冻暂存，待使用前将其移至对应科室位置
      • 样品核对后如有临时多加样本，需再进行临时配置
• 样品接收
  • 进场人员
    • 每日上午9：00或下午14：00前到达实验室门口，进行采样踩脚踏盆进入实验室，在实验室一楼进行等待实验结果
  • 快递样品
  • 人员派送
  • 样品到达后： 在门外对外包装进行消毒药喷洒消毒处理，移至二楼样品处理室，然后拆除外包装，样品表面喷消毒药，准备后续处理
• 样品核对
  • 和对项目
    • 样品种类
    • 样品数量
    • 检测项目
    • 样品来源
    • 样品状态
  • 核对结果
    • 存在问题
      • 及时与场内进行沟通和对
    • 无问题
      • 继续后续实验工作
• 样品处理
  • 精液
    • 取1ML精液，1200离心4min，加精液裂解液400ml，70℃恒温孵育10min,1500离心1min取上清进行后续实验。
  • 疫苗
    • 将样品信息登记及标号(包括商品名、厂家、批次等信息)
      • 减毒疫苗（活苗）
        • 用一次性注射器按照每头份 100 L的疫苗稀释液或无菌生理盐水稀释(如50头份使用5ml的疫苗稀释液或生理盐水进行稀释)配制于疫苗原装瓶中，上下颠倒混匀，再用一次性注射器吸取 1mL疫苗液转移至无酶无菌的 1.5 mLEP 管中备用。
      • 灭活苗
        • 用一次性注射器吸取灭活疫苗 5 mL至 10 mL无菌离心管中；用移液器加入三氯甲烷 1mL，剧烈震荡 1min；再用移液器吸取 1.5 mL转移至 1.5 mL无菌无核酸酶 EP 管，4C放置 30 min；将放置后的混合液 12000 rpm/min 离心5 min，取500 L水项进行后续操作
  • 仔猪处理液、组织液、水
    • 无需处理
  • 血/粪/唾液棉拭子、粪便、环境湿纸巾
    • 加入生理盐水揉搓（自封袋）振荡离心（采样管）
  • 组织
    • 取1.5ml离心管，加入1ml生理盐水，加入3-5个锆株，每块组织使用剪刀取小米粒大小放入离心管内，研磨
  • 血清
    • 震荡瞬时离心
  • 样品保存（暂存）4℃冷藏
  • 实验后清洁消毒
    • 台面
      • 84消毒药擦拭，后用清水擦拭一遍
    • 移液器
      • 核酸清洁剂/75%酒精/低浓度84消毒药擦拭，后用清水擦拭一遍
    • 生物安全柜
      • 紫外灯照射消毒
• 提取上样
  • 核酸提取
    • 按照试剂盒说明书进行提取操作
  • 核酸保存（暂存）4℃冷藏封板膜封口装入自封袋
  • 加样
    • 明日达：15uL体系+5微升核酸
    • 竞赛使用量
      • 引物探针自配体系：20uL体系+5uL核酸
      • thermo：20uL体系+5uL核酸
    • 日常使用量
      • thermo：15uL体系+5uL核酸
      • 引物探针自配体系：15uL体系+5微升核酸
    • 金瑞鸿捷：23uL体系+2uL核酸
  • 实验后清洁消毒
    • 台面
      • 84消毒药擦拭，后用清水擦拭一遍
    • 移液器
      • 核酸清洁剂/75%酒精/低浓度84消毒药擦拭，后用清水擦拭一遍
    • 生物安全柜
    • 核酸提取仪
    • 紫外灯照射消毒
• 上机PCR扩增
  • 按照试剂说明书进行程序设置
  • 记录开始时间及程序运行时间
  • PCR实验原始记录表填写
  • 扩增后核酸处理
    • 戴手套，双手同时拿住八联管两侧平行取出，小心放置漏液造成污染，放置自封袋内密封暂存
• 实验室卫生清洁消毒
  • 生物安全柜内部
    • 移液枪
      • 核酸清洁剂/75%酒精/低浓度84消毒药擦拭，后用清水擦拭一遍
    • 台面/仪器外表面
      • 低浓度84消毒药擦拭，后用清水擦拭一遍
    • 使用后枪头
      • 1：10配比84消毒药浸泡消毒
  • 生物安全柜外部
    • 台面
    • 门把手
    • 仪器外表面
    • 地面
    • 紫外消毒车照射消毒
  • 垃圾桶内清理
    • 喷洒84消毒药进行浸泡消毒后，垃圾袋封口移至废弃物暂存间
• 结果分析
  • 结果分析记录
    • 结果异常
      • 异常数据上报
    • 结果无异常
      • 数据整理
  • 报告出具
    • 确定报告准确性
    • 向检测方发送报告
    • 报告存档
• 样本保存及销毁
  • 暂存样品处理
    • 阳性样本
      • 做好标记
        • 样品来源 样品类型 检测日期 检测项目 CT值
      • -20℃永久保存
    • 阴性样本
      • 血清、组织、粪便、粪/血拭子、组织液、唾液棉拭子-20℃保存两个月，后移至垃圾间统一医疗废物回收处理
      • 环境湿纸巾：随当日无污染废物一同处理
  • 暂存核酸处理
    • 阳性核酸
      • 做好标记
        • 样品来源 样品类型 检测日期 检测项目 CT值
      • -20℃永久保存
    • 阴性核酸
      • 核酸消毒处理后装入垃圾间废液桶
      • 使用后提取试剂盒封口膜封口，装入自封袋，移至垃圾间暂存
• 医疗废弃物回收
  • 两个月统一医疗废弃物回收处置一次
    • 阴性样本
    • 阴性核酸
    • 扩增后核酸
    • 使用后消毒废弃耗材
    • 消毒处理后实验废液
  • 填写废弃物处置记录