导图社区 细胞生物学 研究方法
细胞生物学 研究方法 显微镜技术 细胞体外培养技术 细胞及其组分的分离纯化和分析
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细胞生物学 细胞衰老与死亡 希望对大家有帮助偶~
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细胞生物学的研究方法
显微镜技术
标本处理
LM
固定
与酶无关，是使大分子交联而保持在原位上，不至于在后续处理中移位或丢失
包埋
石蜡
切片
染色
EM
锇酸
脂类
戊二醛
蛋白质
脱水
丙酮/乙醇
环氧树脂(液态）
切片（超薄50-100nm）
重金属
分辨率R
R=0.61λ/ｎ•sinθ
λ为入射光线波长
n=介质折射率
空气=1
油镜（香柏油）=1.515
θ=样品对物镜镜口张角的半角(显微镜自身）
R小分辨率高
人眼0.2mm
毫米，微米，纳米差1000
光学显微镜
可见光显微镜
光源
可见光与紫外线
玻璃透镜
最大放大倍数=人眼/光镜分辨率
分类
普通光学显微镜
分辨率0.2微米
双目镜
暗
从低倍到高倍也变暗
立体感
线粒体为其细胞可见最小结构
荧光显微镜
特点
光源：紫外线
分辨率高普
用途
定性、定位、定量
活细胞
不同荧光需不同激发光
相差显微镜
原理
干涉衍射
应用
活细胞，未染色
对比
倒置显微镜（观察培养过程）
物镜在载物台下（防尘）
倒置相差显微镜
物镜在载物台下
立体、光晕
激光共聚焦扫描显微镜LCSM
光源:单色激光
图呈多色是叠加而成
物镜与聚光镜共焦点
三维
R为普光镜3倍
逐点逐行逐面扫描
属于荧光显微镜，可活细胞
可见染色体和各细胞器等等
电子显微镜
真空观察
电磁透镜
透射电镜TEM
电子束
穿透切片，切片超薄50nm
R=2nm
扫描电镜SEM
电子束穿不过
金属投影法
用于观察大分子、病毒颗粒、细胞壁
冰冻蚀刻/冰冻断裂
液氮-196度（细胞死了）
R大约3nm
黑白
细胞体外培养技术
细胞培养
是否贴壁
贴壁细胞（多）
悬浮细胞
原代培养
活体取出——（酶解）细胞悬液——二氧化碳培养箱
原代培养物（10代内）
传代培养
分瓶，胰蛋白酶分离细胞
相关概念
细胞系
遗传性改变、无限增殖（肿瘤）
细胞株
保持特性和标志，有无限分裂潜能，25-50次
细胞克隆
从细胞系中分离并增殖
外植体
植物组织培养
基本条件
适宜温度、PH
37 ; 7.2-7,4
5%二氧化碳，适宜湿度（无菌水不能干）
二氧化碳作用：生长必须，维持PH
营养物质：。。。血清（占10%），生长因子，生长素，激素
无菌
物理方法
灭菌
高温高压（固）
除菌
0.22微米抽滤
化学方法
灭菌锅121度，20分钟
过程
取材——（酶解）细胞悬液——接种培养——传代，冻存
细胞融合
同核体，异核体
方法
自发
受精
诱导
生物
病毒
物理
电击，激光
化学
聚乙二醇PEG
基因定位，单克隆抗体
细胞及其组分的分离纯化和分析
从组织中分离不同类型细胞
低温无菌
制单细胞悬液
蛋白水解酶（胰蛋白酶）
EDTA(剂）
除黏着所需钙离子
机械方法
分离目的细胞
离心（粗）
流式细胞术FCM （精）
用荧光抗体与目的细胞抗原结合
混和鞘液
激光检测器
荧光（即染色）正电
不 负电
电场偏离
收集
应用超级广
生化分析/细胞培养
R
人眼
0.2mm
普通光显
0.2微米
高于普
LCSM
约0.6微米
TEM
2nm
SEM
约3nm
扫描电镜
立体