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血液一般检验
临床基础检验学技术，血液检验第二章，血液一般检验。
编辑于2020-10-21 21:40:20- 临床基础检验学技术 血液检验 第二章 血
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临床基础检验学 （血液检测）
血液一般检测
血涂片制备和染色
血涂片制备
载玻片要求：新载玻片常有游离碱质，需用清洗液或10%盐酸浸泡24小时，然后再彻底清洗。
制备方法
手工推片法
薄血膜推片法
采血：50ul
涂片
干燥：空中晃动，迅速干燥
厚血膜涂片法
自动涂片法
方法评价
薄血膜推片法
用血量少，操作简单，临床应用最广
厚血膜涂片法
疟原虫、微丝蚴
仪器自动涂片法
质量控制
血涂片质量要求
标准：血膜由厚到薄，逐渐过渡，厚薄适宜，头、体、尾分明
血涂片制备操作要求
涂片前
载玻片
必须中性，洁净，无油腻，无划痕，边缘完整光滑。
血液标本
EDTA抗凝静脉血（4小时内制片，否则可使细胞形态改变）
涂片中
血膜厚度、长度与血滴的大小、推片与载玻片之间的角度、推片速度及HCT有关 血滴越大，推片角度越大，速度越快，血膜越厚；反之则薄
涂片后
及时干燥、固定，妥善保存。
血涂片质量问题及可能的原因
血涂片染色
染料
碱性染料：阳离子
酸性染料：阴离子
复合染料
染色方法
Wright染色法（最常用）
染色原理
物理吸附与化学亲和作用
pH的影响:对氢离子浓度十分敏感，pH6.4～6.8
甲醇的作用：固定
甘油的作用
操作步骤
标记
加Wright染液
加缓冲液
冲洗
着色原理
课本P17表2-3
Giemsa染色法
Wright-Giemsa染色法
方法评价
Wright染色法
最常用的染色方法，对胞质成分及中性颗粒等染色效果好
Giemsa染色法
对胞核和寄生虫等着色较好
Wright-Giemsa染色法
对胞质、颗粒、胞核均着色鲜艳，对比鲜明
质量控制
染色前
血涂片：涂片后1小时内染色
染液质量：放置时间越久，亚甲蓝转变为天青B越多，染色效果越好
染色中
染色过程：加缓冲液后要让缓冲液和染液充分混匀，两者比例为（1～1.5）：1
染色后
血涂片染色良好特征：肉眼观察：血膜外观为淡紫红色
改良牛鲍血细胞计数板的结构和使用
计数板结构
结构
“H”型凹槽
区域划分
白细胞计数区域
四角的4个大方格
红细胞和血小板计数区域
中央大方格的正中及四角的5个中方格
盖玻片
特制长方形盖玻片
计数板使用
准备计数板
稀释血液
如红细胞稀释液2.0ml或白细胞稀释液0.38ml，再加抗凝血10ul或20ul，混匀备用
充液
静置
显微镜计数
两次重复计数误差：白细胞不超过10%，红细胞不超过5%
技术原则
对压线的细胞，依照“数上不数下，数左不数右”的原则
计数板使用质量控制与评价
计数误差
技术误差
操作不规范或使用器材不准确造成的误差
固有误差
计数域误差：血细胞在计数室内分布的不均一性符合泊松分布。 细胞计数数量越多，计数范围越广，误差越小。
计数室误差和吸管误差
方法评价
血细胞显微镜计数法，为WHO推荐的参考方法。
红细胞检验
红细胞计数
红细胞计数（RBC）是检测单位容积血液中红细胞的数量，是血液一般检验的基本项目。
检测原理
显微镜法
计数一定区域（体积）内红细胞数量，换算求得每升血液中红细胞数量。
血液分析仪法
操作步骤
准备稀释液
采血和加血
充液
计数
计算
RBC/L＝N/5×25×10×10^6×200＝N/100×10¹²
方法评价
显微镜法
成本低，用于血液分析仪异常检查结果复查，废时废力，精密度低。
血液分析仪法
操作便捷，精密度高，适于健康人普查，成本高，环境条件要求高。
质量控制
技术误差
仪器误差
技术域误差
参考值
成年：男性（4.0～5.5）×10¹²/L，女性（3.5～5.0）×10¹²/L。新生儿：（6.0～7.0）×10¹²/L
临床意义
生理性变化
病理性变化
病理性增多
相对性增多
绝对性增多
继发性增多
原发性增多
病理性减少
红细胞生成减少
再生障碍性贫血，造血物质缺乏或利用障碍:缺铁性贫血
红细胞破坏过多
溶血性贫血
红细胞丢失（失血）
血红蛋白测定
血红蛋白（Hb或HGB）是在人体有核红细胞及网织红细胞内合成的一种含色素辅基的结合蛋白质，是红细胞内的运输蛋白，每克血红蛋白可携带1.34ml氧，其主要功能是吸收肺部大量的氧，并将其输送到身体各组织。 血红蛋白测定即测定血液中各种血红蛋白的总浓度，用g/L表示。
检测原理与方法评价
氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法
WHO和ICSH推荐的参考方法。
原理：血红蛋白中的亚铁离子（Fe²＋）被高铁氰化钾氧化为高铁离子（Fe³＋），血红蛋白转化成高铁血红蛋白(Hi）。Hi与氰化钾中的氰离子反应生成HiCN。
十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）测定法
次选方法
质量控制
标本
器材及试剂
技术操作
废弃物的处理
HiCN转化液中氰化钾为剧毒品。氰化钾先以水1:1稀释废液，在向稀释后的废液中加入35ml次氯酸钠溶液，使CN－氧化为N2和CO2，或水解为CO3²－和NH4＋
参考值
成年：男性120～160g/L ，女性110～150g/L 。新生儿：170～200g/L
临床意义
血红蛋白测定的临床意义与红细胞计数相似，但判断贫血程度优于红细胞计数
轻度贫血：Hb＜120g/L（女性Hb＜110g/L）
中度贫血：Hb＜90g/L
重度贫血：Hb＜60g/L
极重度贫血：Hb＜30g/L
血细胞比容测定
血细胞比容（HCT）又称为红细胞压积（PCV）是指一定体积的全血中红细胞所占体积的相对比例。
检测原理
离心法
微量法
WHO推荐为常规方法，CLSI推荐的参考标准。
温氏法
应用广泛
质量控制
操作规范化
注意干扰因素
参考值
男性：0.40～0.50；女性：0.37～0.48。新生儿：0.47～0.67。儿童：0.33～0.42。
临床意义
HCT的临床意义与红细胞计数相似。
增高
红细胞数量绝对增加或血浆量减少所致
减低
诊断贫血的指标，若红细胞数量正常，血浆量增加，为假性贫血
应用价值
临床补液量的参考
真性红细胞增多症诊断指标
计算红细胞平均指数的基础
红细胞平均指数计算
红细胞平均指数包括红细胞平均体积（MCV），红细胞平均血红蛋白量（MCH）和红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）
检测原理
手工法
平均血细胞比容（MCV）
指的是每个红细胞的平均体积
参考值
成年人：82～100fl ；1～3岁：79～104fl；新生儿：86～120fl
平均红细胞血红蛋白量（MCH）
是指每个红细胞内所含血红蛋白的平均量
参考值
成年人：26～34pg；1～3岁：25～32pg；新生儿：27～36pg
平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）
是指平均每升血细胞当中所含有血红蛋白的浓度（g/L）
成年人：320-360g/L（32%～36%）；1～3岁：280～350g/L；新生儿：250～370g/L
血液分析仪法
临床意义
红细胞平均指数可用于贫血形态学分类及提示贫血的可能原因
网织红细胞计数
网织红细胞（RET）是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡细胞，略大于成熟红细胞（直径8.0～9.5um），其胞质中残存的嗜碱性物质RNA经碱性染料，如煌焦油蓝、新亚甲蓝等活体染色后形成蓝色或紫色的点粒状或丝网状沉淀物。
网织红细胞分型及特征
Ⅰ型：仅在正常骨髓
Ⅱ型：大量存在于骨髓，极少见于外周血液
Ⅲ型：少量存在于外周血液中
Ⅳ型：主要存在于外周血液中
检测原理
普通显微镜法
活体染料（新亚甲蓝或煌焦油蓝）
血液分析仪法
操作步骤
试管法
加染液
加血液
染液：血液＝1:1
制备涂片
观察
计数
Miller窥盘计数法：小格成熟RBC，大格网织红细胞数
计算
玻片法
质量控制
选择合适的染料
煌焦油蓝
新亚甲蓝
WHO推荐使用。对RNA着色强、试剂稳定，Hb几乎不着色，便于识别
中性红
正确辨认网织红细胞
网织红细胞计数方法
参考值
成人、儿童：0.5%～1.5%；新生儿：2.0%～6.0%。成人绝对值： （24～84）×10^9/L
临床意义
网织红细胞计数是反映骨髓造血功能的重要指标。
评价骨髓增生能力，判断贫血类型
网织红细胞增多
骨髓红细胞增生旺盛
溶血性贫血
急性失血
某些贫血治疗后（补充维生素B12，叶酸）
网织红细胞减少
骨髓造血功能减低，如再生性障碍性贫血
评价疗效
放疗和化疗的监测
网织红细胞生成指数（RPI）
参考值：2
异常
大于3
溶血性贫血
急性失血性贫血
小于2
骨髓增生低下
再生障碍性贫血
红细胞沉降率测定
红细胞沉降率（ESR）简称血沉，指在规定条件下，离体抗凝全血中的红细胞自然下沉的速率。（mm/h）
检测原理
魏氏法
传统方法，为国内规范方法，ICSH参考方法。首选方法
自动血沉仪法
质量控制
ICSH规定的参考方法可用于验证其他方法的可靠性
魏氏法对抗凝剂血液标本及物理条件的要求
课本P35表2-28
质控方法
参考方法常作为常规试验的质控方法
血沉测定影响因素
课本P36表2-29
血浆当中各种蛋白的比例改变
红细胞数量和形状
参考值
魏氏法：男性0～15mm/h；女性0～20mm/h
临床意义
血沉增快
生理性
新生儿红细胞数量较高
儿童（＜12岁）红细胞数量生理性低下
女性由于纤维蛋白原含量高，血沉较男性快
孕3个月至产后3周妇女由于生理性贫血，纤维蛋白原含量增高
月经期
大于50岁
病理性
各种炎症疾病导致纤维蛋白原与免疫球蛋白增加（最常见）
组织损伤坏死
恶性肿瘤
血浆球蛋白增高
贫血
高胆固醇血症
自身免疫病
其他
血沉减慢
红细胞形态检查
检测原理
显微镜检查法
仪器法检测的复核方法，参考方法
计算机图像分析
血液分析仪法
需用显微镜法复检，血涂片
临床意义
正常红细胞形态
双凹圆盘形，直径7.2um
Wright染色淡粉红色
中央部位生理性淡染区
红细胞异常形态
大小异常
形状异常
血红蛋白含量异常
红细胞结构异常及排列异常
白细胞检验
白细胞计数
白细胞计数（WBC）即测定单位体积外周血中各种白细胞的总数
检测原理
手工法
仪器法
操作步骤
准备稀释液
采血和加血
充液
计数
低倍镜（10×）计数
计算
WBC/L＝N/4×10×20×10^6＝N/20×10^9
方法评价
显微镜计数法
WHO推荐参考方法，适用于基层医疗单位和分散检测
血液分析仪法
目前常规采用的筛检方法
质量控制
采血时间的影响
计数误差
两次重复计数误差不超过10%，每两个大方格计数不得相差8个以上
可通过增加技数室计数面积或技术更多的细胞来减少计数域误差
有核红细胞的影响
校正后白细胞数/L＝x×100/(100＋y)
经验控制
参考值
成人：（3.5～9.5）×10^9/L；儿童：（5～12）×10^9/L；6个月～2岁：（11～12）×10^9/L；新生儿：（15～20）×10^9/L
白细胞分类计数
检测原理
显微镜分类计数法
参考方法
血液分析仪法
血细胞形态分析仪
筛选首选
操作步骤
操作
采集血液
制备血涂片
血涂片染色
显微镜镜检
选择血涂片体、尾交界处细胞分布均匀、着色良好的区域
计算
报告方式
白细胞分类计数结果
幼稚或异常白细胞
分类报告，并包括在白细胞分类比值或百分率中。
有核红细胞
应逐个计数，但不列入白细胞总数之内。
寄生虫
发现疟原虫等报告
红细胞、血小板的形态
方法评价
显微镜分类法
参考方法
血液分析仪法
只能用于筛查
血细胞形态分析仪
子主题
质量控制
标本
血涂片制备和染色
镜检部位
体积较小的淋巴细胞在头、体部分布较多，尾部和两侧以中性粒细胞单核细胞较多，体尾交界处
镜检白细胞数量
一般要求计数100个白细胞
参考值
白细胞分类 中性杆状核粒细胞 0～5% 中性分叶状核粒细胞 40～75% 嗜酸性粒细胞 0.4～8.0% 嗜碱性粒细胞 0～1% 淋巴细胞 20～50% 单核细胞 3～10%
临床意义
白细胞总数与中性粒细胞
中性粒细胞增多
生理性
妊娠
剧烈运动
下午
新生儿
病理性
急性感染（最常见）
细菌感染（化脓性感染）
严重感染是不升反降
严重的组织损伤及大量血细胞破坏
外伤
手术
大面积烧伤
急性大出血
急性中毒
白血病
恶性肿瘤
中性粒细胞减少
感染
特别是革兰阴性菌的感染
某些病毒感染
某些原虫感染
血液系统疾病
再生障碍性贫血
白血病
巨幼细胞贫血
慢性理化损伤
射线，药物等
脾功能亢进
单核-吞噬细胞功能亢进
自身免疫疾病
系统性红斑狼疮
嗜酸性粒细胞（0.5-5%，0.05-0.5*10^9）
嗜酸性粒细胞增多
过敏性疾病
寄生虫病
皮肤病
湿疹，剥脱性皮炎
血液病
慢性粒细胞白血病
淋巴瘤
恶性肿瘤
某些传染病
嗜酸性粒细胞减少
伤寒/副伤寒初期
应激
嗜碱性粒细胞（0～1%）
增多
过敏性疾病
慢性粒细胞白血病
嗜碱性粒细胞性白血病
减少
多无临床意义
淋巴细胞（20～40%）
淋巴细胞增多
病毒感染
细菌感染
淋巴细胞减少
应用肾上腺皮质激素
放射线
单核细胞（3～8%）
增多
病理性增多
感染
血液病
单核细胞白血病
多发性骨髓瘤
减少
意义不大
白细胞形态检查
外周血正常白细胞形态
中性杆状核粒细胞 中性分叶状核粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 淋巴细胞 单核细胞
外周血异常白细胞形态
中性粒细胞核象变化
核左移
周围血中出现不分叶核粒细胞 （早幼粒，中幼粒，晚幼粒，杆状核粒细胞）的百分比增高超过5%
感染
急性化脓性感染
急性失血
急性溶血反应
核右移
中性粒细胞核出现5叶或者更多叶，百分率超过3%
巨幼细胞贫血
造血功能减退
中性粒细胞毒性变化
细胞大小不均
中毒颗粒
空泡形成
核变性
杜勒小体
中性粒细胞其他异常形态
巨多分叶核中性粒细胞
巨幼细胞贫血
抗代谢药物治疗
棒状小体
红色细杆状物质
急性白血病
淋巴细胞的异常形态
异型淋巴细胞
Ⅰ型
Ⅱ型
Ⅲ型
具有卫星核的淋巴细胞
常作为致畸、致突变的客观指标之一。
嗜酸性粒细胞计数
检验原理
显微镜直接计数法
血液分析仪法
操作步骤
加稀释液
采血及稀释
充池
技数
计算
嗜酸性粒细胞/L＝（N/10）×10×20×10^6/L＝0.2N×10^8/L
质量控制
标本采集时间
固定标本的采集时间（上午8时或下午3时），以免受日间生理变化的影响
稀释液
混匀
嗜酸性粒细胞形态
中性粒细胞一般不着色或着色较浅，胞质颗粒细小或不清。嗜酸性粒细胞颗粒比较大，染色较深
计数范围
完成时间
应在30分钟至1小时内计数完毕
参考值
（0.05～0.5）×10^9/L
血小板检测
血小板计数
血小板（PLT）是由骨髓造血组织中的巨核细胞产生，具有维持血管内皮完整性、粘附、聚集、释放、促凝和血块收缩等功能。
检测原理
普通显微镜直接计数法
血液分析仪法
流式细胞仪法
操作步骤
加稀释液
采血和加血
稀释静置
充池
计数
计算
每升血小板素＝五个中方格内血小板数×10^9/L
方法评价
普通显微镜直接计数法
草酸铵稀释液
首选稀释液
复方尿素稀释液
尿素易分解，不能完全破坏红细胞，现用现配
血液分析仪法
是目前常规筛减PLT的主要方法
流式细胞仪法
目前ICSH推荐的参考方法
参考值
（125～350）×10^9/L
临床意义
生理变化
病理变化
血小板减少是引起出血的常见原因。
（20～50）×10^9/L，轻度出血或手术出血
低于20×10^9/L，较严重出血
低于5×10^9/L，严重出血
超过400×10^9/L，血小板增多
血小板形态检查
正常血小板形态
两面微凸的圆盘状，直径1.5～3um
异常血小板形态
大小异常
大血小板
直径为4～7um，巨型血小板直径＞7um，主要在于原发性免疫性血小板减少症（ITP）
小血小板
直径＜1.5um
形态异常
不规则和畸形的血小板比值超过10%时才有临床意义
聚集性和分布异常
血小板卫星现象
是血液分析仪血小板计数假性减少的原因之一
血小板片状聚集
血小板减少
血小板功能异常