考研生化 分子生物学技术

临床医学考研--生化--分子生物学技术，如基因诊断有核酸分子杂交（最基本）、PCR(特异、快速)、DNA序列分析/测序(最直接、确切)、基因芯片（大规模）。

分子生物学技术

• 印渍技术
  • DNA印渍技术（Southern blotting）：DNA-DNA杂交分析
    • 记忆：SD序列（原核翻译—mRNA起始密码子上游的序列）
  • RNA印渍技术（Northern blotting）：检测RNA表达
  • 蛋白质（免疫）印渍技术（Western blotting）：检测蛋白质表达
• PCR
  • 反应系统
    • 耐热DNA聚合酶（Taq酶）、模板DNA、两种特异DNA引物、四种dTNP、缓冲溶液
  • 步骤
    • 变性 → 复性 → 延伸
  • PCR及其衍生技术的应用
    • DNA序列分析（测序）
    • DNA和RNA微量分析
    • 目的基因的克隆（扩增DNA）：获得目的基因
    • 基因突变分析检测（基因诊断）
    • 基因体外突变（体外改造目的基因）
    • 基因表达（RNA、蛋白质）分析检测
      • *研究基因表达的技术：Northern blotting、Western blotting、RtPCR
• 相互作用
  • 分析DNA-蛋白质相互作用
    • 电泳迁移率变动测定（凝胶阻滞实验）、染色质免疫沉淀
  • 分析蛋白质-蛋白质作用（记忆：双亲噬银）
    • 酵母双杂交
    • 亲和分离层析（eg.表浅蛋白沉淀）
    • 噬菌体显示系统筛选
    • FRET（荧光能量共振转移）
• 基因诊断
  • 核酸分子杂交（最基本）
    • Northern blotting、Western blotting、斑点杂交、原位杂交、荧光原位杂交（FISH）
  • PCR（特异、快速）
  • DNA序列分析 / 测序（最直接、确切）
  • 基因芯片（大规模）
• 基因治疗
  • 缺陷基因精确的原位修复（最理想）
    • 基因矫正、基因置换
  • 基因增补（最主要）
  • 基因沉默（失活 / 干预）
  • 自杀基因：诱发细胞死亡