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组织学绪论
简要列出了组织学绪论的相关内容，包括学习组织学的意义、组织学研究中常见的显微镜、染色方法、切片方法以及检测技术
编辑于2022-01-25 16:08:45
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组织学绪论
组织学是研究机体缴细结构及其相关功能的学科
相关概念
组织
由形态和功能相同或相似的细胞 以及多少不等的细胞外基质构成
微细结构
光镜结构
光镜下能被分辨的微细结构 如细胞核、核仁、细胞质等
电镜结构 (超微结构)
电子显微镜下才能分辨的微细结构 如线粒体、内质网、核糖体等
意义
生物学的重要分支
基础医学的骨干学科
重要的医学基础课
研究方法和技术
光学显微镜术
标本制备
固定
用一定的化学试剂处理，使组织 内的蛋白质迅速凝固或沉淀
制片
涂片
将血液、体液、培养细胞等直接涂于载玻片上
铺片
将疏松结缔组织或肠系膜等撕成薄片，铺在载玻片上
磨片
硬组织(骨、牙等)磨成薄片
切片
石蜡切片法
取材：组织块具有一定的硬度
固定
脱水：酒精
透明：二甲苯
包埋：用融化的石蜡浸透
切片：用切片机切成5～10μm厚的组织切片
是组织学中的常规切片方法
火胶棉切片法
制作较大组织块(如眼球、脑)的切片
用火胶棉包埋
冷冻切片法
将组织块快速冷冻、变硬
用恒冷箱切片机
以保存酶活性和脂类物质
振动切片法
用振动切片机切片
防止石蜡切片的高温处理和冷冻切片的冰晶形成
常用于神经组织
染色
用天然或人工合成旳染料使组织切片上不同的微细结构染成不同的颜色
碱性染料
含碱性助色基因，在溶液中带负电
苏木精、甲苯胺蓝、碱性品红等
酸性染料
含有酸性助色基因，在溶液中带正电
伊红、橙黄G、亮绿等
常用染色法
HE染色法(苏木精和伊红染色法)
苏木精：使细胞核和细胞质中的核糖体等酸性物质染成紫蓝色
伊红：使细胞质和细胞外基质中的碱性成分染成淡红色
染色特性
嗜酸性：与酸性染料亲和力强、易被染色
嗜碱性：与碱性染料亲和力强、易被染色
中性：与两种染料的亲和力都不强
异染性：被染成分所着颜色与原染料颜色不同 [如肥大细胞的胞质颗粒用甲苯胺蓝(蓝色)染色呈紫红色]
亲银性：用硝酸银染色时，有些组织结构可直接使银离子还原为银颗粒而呈黑色
嗜银性：有些组织结构需加入还原剂才能显色
光学显微镜
普通光学显微镜
放大倍数：1000～1500倍
分辨率：0.2μm
荧光显微镜
结构：由光源、滤片系统和显微镜三部分构成
用途：用于观察组织、细胞中有自发荧光、诱发荧光或经荧光染料染色或标记的结构
原理：以紫外线或蓝紫光激发标本中的荧光物质，使之产生各种不同颜色的荧光，通过观察荧光的分布与强弱来测定被检物质
全内反射荧光显微镜
用途：可获得高质量的成像和可靠的观测数据，可观察和记录细胞内许多重要的生命活动过程，尤其适于观察细胞表面物质的动态
原理：利用光线全反射之后在介质另一面产生衰逝波的特性，激发荧光分子以观察荧光标定样品的极薄区域
相差显微镜
用途：主要用于观察细胞培养中活细胞的形态结构及生长变化情况
原理：光通过细胞内具有不同厚度或折射率的结构时，产生相位差，在物镜后焦面处的相位板将相位差转换为振幅差（明暗差）
暗视野显微镜
用途：观察反差太小或小于普通光学显微镜分辨率的微小颗粒
原理：光线斜照在标本上不直接进入物镜，故视野较暗；标本中的小颗粒产生的衍射光或散射光进入物镜，呈现为明亮小点
分辨率：0.004~0.2µm
偏振光显微镜
用途：鉴定微细结构的光学显微镜，用于肌纤维、胶原纤维、细胞膜和纺锤体等的研究
原理：利用光的偏振现象，在正交检偏位（视野黑暗），若旋转镜台，视野始终黑暗，则被检物为各同向性；若镜台旋转一周，被检物4次隐没，4次明亮，则为各向异性
激光扫描共聚焦显微镜
用途：突破了普通光镜不能对细胞或组织内部进行定位检测的限制，实现了对细胞内部非侵入式光学断层扫描成像，可进行一系列亚细胞水平的结构和功能的研究
超分辨率显微镜
用途：利用荧光分子的可调控性，使光学显微镜的分辨率达到纳米级别
电子显微镜术
不同：1、用电子束代替可见光 2、用电磁场代替玻璃透镜
透射显微镜术
原理：用电子束穿透标本，经过电磁透镜的汇聚、放大后，在荧光屏上成像
分辨率：0.1~0.2nm
放大倍数：几千倍到几十万倍
制片
固定：将新鲜组织切成1mm³左右的小块，用双醛固定液（含多聚甲醛和戊二醛）和四氧化锇先后进行固定
包埋：用树脂包埋
切片：用超薄切片机切成50~80nm的超薄切片，贴附于载网上
染色：用重金属盐（如柠檬酸铅和醋酸铀）染色
用途
观察细胞骨架、各种细胞器的立体超微结构及其相互关系等
扫描电镜术
原理
细电子束在样品表面按顺序逐点移动扫描，使样品表面金属膜发射出二次电子。二次电子信号被探测器收集，经过放大，在荧光屏上成像。
制片
将小块组织(直径约3mm)固定、脱水和临界点干燥后，在其表面喷镀薄层碳膜和金属膜
用途
观察细胞、组织和器官表面的立体微细结构
组织化学和细胞化学技术
糖类：PAS反应(过碘酸-Schiff反应)
脂类：脂溶性染料(苏丹染料、油红O、尼罗蓝等)或四氧化锇(呈黑色)
核酸：显示DNA用福尔根反应 同时显示DNA和RNA用甲基绿-派若宁染色
酶类：用酶组织化学技术检测酶活性
免疫组织化学和免疫细胞化学技术
直接法
过程：标记某抗原的特异性抗体(又称第一抗体)，用标记的第一抗体孵育标本以检测其中的抗原成分。
特点：方法简单、特异性强、敏感性较差
间接法
过程：第一抗体不标记，标记第二抗体。染色时，先后以第一抗体和标记的第二抗体处理标本在抗原存在部位形成抗原-第一抗体-标记第二抗体复合物，以达到检测该抗原的目的。
特点：敏感性高
过氧化物酶-抗过氧化物酶法(PAP法)
过程：第一抗体和第二抗体均不标记；染色时，顺次以第一抗体，第二抗体和PAP复合物孵育标本，最后以过氧化氢和二氨基联苯胺为底物显示过氧化氢酶，即可检测标本中的抗原成分。
特点：避免了标记过程对抗体话性的影响，敏感性明显提高
亲和素-生物素-过氧化氢酶复合物法(ABC法)
过程：第一抗体不标记，第二抗体以生物素标记；染色时，顺次以第一抗体、第二抗体和ABC复合物孵育标本。
特点：敏感性高于PAP法
双重染色或多重染色
现象：如果两种抗原存在于不同细胞或同一细胞的不同区域，则分别呈现两种不同荧光的颜色；如果两种抗原存在于同一细胞，尤其是存在于同一细胞的相同区域，则呈现两种荧光的混合色。
原理：间接荧光法
原位杂交技术
原理：碱基互补配对原则
过程：用一条碱基序列已知、经特定标记的核苷酸链为探针与组织切片、细胞制备或染色体标本中的待检DNA和mRNA片段进行杂交，然后显示标记物，从而获得待检核酸的分布和含量等信息。
细胞组织培养术与组织工程
细胞培养一般在二氧化碳培养箱中进行，要求培养环境无菌、严防微生物污染，同时要有合适的温度，氧气和二氧化碳浓度、湿度等。
哺乳动物和人类细胞的培养温度为35～37℃，常通入含有95%的空气和5%二氧化碳的混合气体，相对湿度大于98%。