文献技术路线

概述了评估有害藻华群落对铜耐受性实验的方法和技术流程，从实验准备到数据分析，每个阶段的任务和操作都一目了然，有助于理解实验的整体架构和具体实施步骤。

《评估有害藻华群落对铜的耐受性》 实验方法技术

• 1 实验准备阶段
  • 1.1 选择实验场地
    • 选择一个0.3公顷的活性鲶鱼养殖池， 处理前池塘溶解态铜浓度为0.014±0.001mg/L铜
  • 1.2 安装浮氏PVC框架
    • 框架固定在池塘中央，支撑20个1300L围隔
  • 1.3 围隔预处理
    • 实验开始前一周，用周围池塘的水填充围隔（水无需过滤）
    • 实验前4天，向每个围隔中加入5.60g尿素（CH4N2O）和1.46g磷酸氢二钾（K2HPO4）
      • 提高氮和磷水平，模拟鲶鱼养殖池塘的条件
    • 每周以环境总氮和总磷的20%重复施肥
      • 维持浮游植物的生长
    • 每个围隔中加入168g碳酸氢钠（NaHCO3）
      • 调节碱度
  • 1.4 预处理样本（第0天）采样
    • ①取样前用大桨将水样混匀
    • ②用1.5米刚性管状采样器从每个围隔中采样，采样深度为0.5米
    • ③样品分装储存，用YSI探空仪测量每个围隔的溶解氧（DO）和pH值
• 2 实验处理阶段
  • 2.1 随机分组（每个围隔随机分配一个处理组）
    • ①标准剂量组（1.37 mg/L CuSO4·5H2O或0.35 mg/L总铜），8个重复
    • ②低剂量组（0.69 mg/L CuSO4·5H2O或0.17 mg/L总铜），8个重复
    • ③对照组，4个重复
  • 2.2 铜处理
    • ①配制CuSO4·5H2O水溶液储备溶液（25g CuSO4·5H2O + 1L蒸馏水）
    • ②按剂量将储备溶液加入围隔并混匀
• 3 监测采样阶段
  • 3.1 采样时间点
    • 第3/7/14/21/28天早上
  • 3.2 采样具体操作
    • ①取样前混匀水体
    • ②用A/E玻璃纤维过滤器过滤样品
    • ③样品保存
      • 滤膜储存在-10℃薄膜罐中，用于藻类色素、叶绿素a（总浮游植物）和藻蓝蛋白（蓝细菌）的提取
      • 滤液储存在4℃的酸洗塑料瓶中，用于总氨氮的分析
  • 3.3 现场测量
    • YSI探空仪测量每个围隔的溶解氧（DO）和pH值
• 4 实验室分析阶段
  • 4.1 藻类分析
    • ①叶绿素a（乙醇提取荧光法）→估算浮游植物总丰度
    • ②藻蓝蛋白（磷酸缓冲液提取，荧光测量）→估算蓝细菌丰度
    • ③显微分析
      • 1%卢戈氏碘液固定
      • 倒置显微镜计数
      • 生物体积测定
  • 4.2 毒性生物测定
    • ①配制铜梯度溶液（0，0.05，0.1，0.5，5，50，100，200和300mg/L）
    • ②3000 lux，25℃，将闪烁瓶用Cu浸泡1小时
    • ③暗适应15分钟后测量有效量子产率（QY）
    • ④Weibull模型计算EC50值
  • 4.3 水质分析
    • 水杨酸盐催化剂法分析总氨氮
• 5 数据分析阶段
  • 5.1 数据收集
    • 浮游植物生物体积测定
    • EC50值估算
  • 5.2 统计建模
    • ①“nlme”软件包
      • 完成了一系列双向重复测量方差分析（RM-ANOVA）
      • 评估了治疗效果、时间以及治疗与时间之间的相互作用
    • ②“emmeans”软件包 （出现显著差异（p＜0.05）时进行事后检验，从而进行多对比较，并进行Tukey校正）
      • 分析了不同处理随时间的平均差异
    • ③对数转换分析
      • 对群落耐性数据进行对数转换分析，使方差均匀化
  • 5.3 结果输出
    • EC50耐受性指标
    • 生物体积变化趋势