基因实验的方法

这是一篇关于基因实验的方法的思维导图，总结了基因实验中常用的过表达、敲低和敲除KO方法，对每种方法下的具体技术进行了详细说明，并清晰列出了各自的优缺点和适用场景。

基因实验的方法

• 过表达
  • 质粒转染
    • 不永久
    • 快速简单
    • 缺点瞬时表达
    • Rescue，快速实验
  • 稳定转染
    • 永久
    • 优点：可长期使用
    • 缺点：耗时
    • 适用于需要稳定表达时
  • 慢病毒OE
    • 永久
    • 优点：最稳定，适合原代
    • 缺点：成本高
    • 适用于高分文章，动物实验
  • 腺病毒
    • 不永久
    • 优点：感染强
    • 缺点：暂时表达
    • 适合于动物短期表达
• 敲低
  • RNA干扰（siRNA/shRNA）：短双链RNA降解mRNA
  • CRISPRi：dCas9靶向启动子区抑制转录
  • Morpholino：反义寡核苷酸阻断翻译（用于胚胎）
  • 优点：
    • ✓ 快速（3-5天见效），周期短
    • ✓ 可逆（RNAi为瞬时效应）
    • ✓ 适合研究必需基因（不完全致死）
    • ✓ 成本低，操作简单
  • 缺点：
  • 不彻底（残留表达20-80%）
  • 脱靶效应（尤其是siRNA）
  • 易受代偿机制影响
  • 对长半衰期蛋白效果差
• 敲除KO
  • CRISPR-CAS9
    • 永久
    • 优点：永久主流
    • 缺点：单克隆困难
    • 适合于机制深度研究
  • CRISPR-CAS12a
    • 永久
    • 优点：特异性更高
    • 缺点;使用·少
    • 适合于多机制KO
  • CRISPRi
    • 不永久
    • 优点：可逆 特异
    • 缺点：不能KO
    • 适合于必需基因抑制
  • shRNA/siRNA(KD)
    • 不永久
    • 优点：快速便宜
    • 缺点：不是KO
    • 预实验