导图社区 HPLC高效液相色谱法
HPLC高效液相色谱法——Hplc的特点有高压,高速,高效,高灵敏度。可用于分离高沸点,稳定性差,相对分子质量较大的有机物。导图中阐述了分离模式和高效液相色谱仪的详细内容。
气色气象色普法包括气象色谱仪;检测器的性能指标;气象色谱固定相;气象色谱条件的选择;毛细管柱气象色谱。
色谱分析法、又称层析法,色层法,层离法。是一种物理或 物理化学分离分析方法。是先将混合物中各 组分分离,而后逐个分析。其分离原理是利 用混合物中各组分在固定相和流动相中溶解、解析、吸附、脱附或其他亲和作用性能的微小差异,当两相作相对运动时,使各组 分随着移动在两相中反复受到上述各种作用 而得到分离。色谱法已成为分离分析各种复 杂混合物的重要方法,但对分析对象的鉴别 能力较差。
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HPLC高效液相色谱法
HPLC的特点
高压
液相色谱法以液体为流动相,必须对流动相施加高压
高速
所需时间较经典色谱法少的多
高效
分离效能很高,研究出很多新型固定相
高灵敏度
广泛采用高灵敏度的检测器
选择条件
可用于分离高沸点、稳定性差、相对分子质量较大(大于400以上)的有机物
液相色谱速率方程
忽略分子扩散项
分子在液体中扩散系数比在气体中小4~5个数量级
分离模式
分配色谱
液液分配色谱
固定相
担体
硅胶
固定液
氧二丙腈 ODPN
聚乙烯醇 PEG
十八烷 ODS
角鲨烷
流动相
氯仿、乙腈、乙醇、甲醇等
常用甲醇
紫外吸收小
挥发性好
对样品有适宜的溶解性
分配系数
分离顺序取决于分配系数的大小
分配系数大的组分保留值大
化学键合相色谱
将各种不同有机基团通过化学反应共价键合到硅胶(担体)表面的游离羟基上,代替机械涂渍的液体固定相,从而产生了化学键合固定相
分类
反相液-液色谱法
流动相极性大于固定相极性
正相液-液色谱法
流动相极性小于固定相极性
液固吸附色谱
氧化铝
氯仿
乙腈
乙醇
亲和色谱
相互间具有高度特异性亲和性的两种物质之一作为固定相,利用与固定相不同程度的亲和性,使成分与杂质分离的色谱法
离子交换色谱
排阻色谱
高效液相色谱仪
高压输液系统
溶剂贮存器
高压输液泵
恒压泵
恒流泵
梯度洗脱装置
改善分离选择性的方法
改变固定相的性质
改变流动相的种类和组成
定义
在同一个分析周期中,按一定程度不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱。
优点
提高柱效,改善检测器的灵敏度。
当样品中的一个峰的k值和最后一个峰的k值相差几十倍至几百倍时,使用梯度洗脱效果特别好。
梯度洗脱中为保证流速的稳定,必须使用恒流泵,否则难获重复结果。
梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。
与程序升温的异同
同:都是通过不断改变被分离组分的容量因子k和选择性因子,来提高分离效率
异:程序升温改变温度,梯度洗脱改变流动相的极性
进样系统
进样阀
注射器
分离系统
色谱柱
恒温室
连接管
检测系统
紫外光度检测器
可用于梯度洗脱
不适用于对紫外光完全不吸收的试样
荧光检测器
比紫外灵敏度高两个数量级
示差折光检测器
最常用
通用型浓度检测器
电导检测器
记录系统