细胞化学染色

细胞化学染色是细胞学和化学相结合而形成的一门科学，是以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学成分(如酶类、酯类、铁、蛋白质、核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。

细胞化学染色

• 细胞化学染色概述
  • 定义：细胞化学染色是细胞学和化学相结合而形成的一门科学，是以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学成分(如酶类、酯类、铁、蛋白质、核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。
  • 临床应用
    • 辅助判断急性白血病的细胞类型
    • 辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断
    • 观察疾病疗效和预后
    • 探讨发病机制
  • 步骤：①固定②显示③复染
• 常用的细胞化学染色方法
  • 过氧化物酶染色（POX）
    • 过氧化物酶广泛存在于生物体中，血细胞所含的过氧化物酶主要为髓过氧化物酶，它是人类中性粒细胞含量最多的一种蛋白质。
    • ICSH推荐方法：二氨基联苯胺法DAB（临床常用方法） 二盐酸联苯胺法、过氧化物酶氨基-甲基卡巴唑染色法
    • 染色反应
      • 粒细胞系：多呈（+）
        • 原始粒细胞
          • 分化差（-）
          • 分化好（+）
        • 成熟
          • 中性分叶核粒细胞（+）或强+
          • 嗜酸粒细胞（+）且最强
          • 嗜碱粒细胞（-）
      • 单核细胞系：多呈弱阳阳
        • 原始单核细胞（-）
        • 幼稚、成熟单核细胞多呈弱阳性
      • 淋巴细胞系、浆细胞、幼红细胞、巨核细胞（-）
    • 临床意义
      • 辅助诊断急性白血病类型首选、最重要的细胞化学染色方法。
      • 急性粒细胞白血病时，原始粒细胞呈阴性/阳性，多呈阳性
      • 急性淋巴细胞白血病时，原始淋巴细胞和幼稚淋巴细胞均呈阴性，阳性率<3%
      • 急性单核细胞白血病时，原始单核细胞、幼稚单核细胞多数呈阴性或弱阳性
  • 苏丹黑B染色（SBB）
    • 苏丹黑是一种脂溶性重氮染料，能溶解于细胞内的含脂结构(如中性脂肪、磷脂、糖脂和类固醇)中，使脂类物质呈棕黑色或深黑色而显示出来。脂类物质在粒细胞中含量丰富，在单核细胞中也有少量。
    • 临床意义
      • 与POX染色基本相似，不同之处在于
      • 特异性：POX染色高于SBB染色 敏感性：SBB染色高于POX染色
      • 对涂片新鲜度要求不同：SBB染色可用陈旧涂片，POX染色要求涂片新鲜。
  • 酯酶染色
    • 特异性酯酶
      • 氯乙酸AS-D茶酚酯酶（NAS-DCE)
    • 非特异性酯酶（根据pH值不同）
      • 酸性α-醋酸萘酚酯酶（ANAE）
      • 中性酯酶
        • a-醋酸茶酚酯酶（a-NAE）
        • 醋酸AS-D蔡酚酯酶(NAS-DAE)
      • 碱性酯酶(a-丁酸蔡酚酯酶；a-NBE)
    • 染色反应
      • NAS-DCE（粒、特异性）
        • 粒细胞系统
          • 原始粒细胞
            • 分化好（+）
            • 分化差（-）
          • 早幼粒细胞（+）
          • 成熟粒细胞
            • 中性粒细胞（+）
            • 嗜酸性粒细胞（+）/（-）
            • 嗜碱性粒细胞（+）
        • 其他细胞多（-）
      • α-NAE（中、非、特）/α-NBE/ANAE
        • 单核细胞系统
          • 原始单核细胞
            • 分化好（+）
            • 分化差（-）
          • 幼稚单核细胞、成熟单核细胞（+）
          • 阳性反应能被氟化钠抑制
        • 粒细胞系统、淋巴细胞系统、其他系统（-）/（+） 阳性反应不被氟化钠抑制
    • 临床意义
      • 白血病细胞α-NAE染色呈明显的阳性反应，且阳性产物能被氟化钠抑制时，应考虑为急单。
  • 酸性磷酸酶染色（ACP）
    • 多毛细胞（+）耐L-酒石酸，阳性不能被L-酒石酸抑制
    • 戈谢细胞（+）耐酒石酸 、尼曼匹克细胞（-）
    • 临床意义：诊断多毛细胞白血病、鉴别戈谢细胞和尼曼-匹克细胞
  • 糖原染色（PAS）又称碘酸-希夫反应
    • 染色反应
      • 粒细胞系统
        • 原始粒细胞
          • 分化好（+）
          • 分化差（-）
        • 成熟粒细胞
          • 中性粒细胞（+）
          • 嗜酸性粒细胞（+）在颗粒间
          • 嗜碱性粒细胞（+）在颗粒上
      • 红细胞系：均成（-）
      • 其他系（-）/（+）
    • 结果判断：阳性结果为胞质中出血红色颗粒、块状或呈弥漫状红色。
    • 临床意义
      • 红细胞系统
        • （+）：红血病、红白血病、骨髓增生异常综合症、严重缺铁性贫血、严重地中海贫血
        • （-）：巨幼细胞性贫血、再生障碍性贫血、其他溶血性贫血
  • 中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
    • NAP主要存在于中性成熟粒细胞，故中性成熟粒细胞呈阳性反应，其他细胞基本呈阴性。阳性反应表现在胞质中出现棕黑色或棕红色颗粒。
    • 阳性率：在油镜下，连续观察100个成熟中性粒细胞，记录其阳性反应细胞所占百分率。阳性率＜40%
    • 对所有阳性反应细胞逐个按其反应强度作出(+)～(++++)的分级，将各级所占的百分率乘以级数，然后相加，即为积分值 30-130分
    • 临床意义
      • 1.慢粒↓/0 类白↑2.PNH活性↓ 再障活性↑3.急粒↓ 急单↓ /正常 急淋↑4.细菌感染↑ 病毒感染（-）无变化
      • NAP积分增加：见于细菌性感染、类白血病反应、再生障碍性贫血、某些骨髓增殖性疾病、慢性粒细胞白血
      • NAP积分降低：见于慢性粒细胞白血病慢性期、阵发性睡眠性血红蛋白尿症、骨髓增生异常综合征、恶性组织细胞病等。
  • 铁粒染色
    • 细胞外铁主要存在于骨髓小粒的巨噬细胞中，细胞内铁主要存在于中幼红细胞、晚幼红细胞及红细胞中细胞内铁
    • 细胞外铁
      • 分为I型，II型，III型，IV型及环形铁粒幼红细胞
      • 环形铁粒幼红细胞是指幼红细胞胞质内含铁颗粒≥6粒，并环绕细胞核周排列1/3圈以上
    • 参考区间：细胞外铁(+)~(++)，细胞内铁阳性率12%~44%，以I型为主，少数为II型，无环形铁粒幼红细胞及铁粒红细胞
    • 临床意义
      • 缺fe贫
        • 外fe 阴
        • 内fe ↓/0
      • fe粒幼贫
        • 外fe↑
        • 内fe↑出现环铁红
      • NPS
        • 外fe↑
        • 内fe↑