高敏HBVDNA在实验室检测中对于低于检测线性范围下限

这是一篇关于高敏HBVDNA在实验室检测中对于低于检测线性范围下限思维导图，主要内容包括：HBVRNA临床应用，解决方案，小于检测限结果原因，报告单4种报告结果。

高敏HBVDNA在实验室检测中对于低于检测线性范围下限，但有反应信号的结果，如何向临床提供建议和解释?

• 报告单4种报告结果
  • 1.未检出：解释为未检测到HBVDNA
  • 小于检测下限：解释为检测结果低于检测线，低于下限无法精确定量
    • 低于检测下限”不等于没有病毒，有可能是病毒数量维持在较低水平
  • 具体数量
  • 大于检测上线
• 小于检测限结果原因
  • HBV病毒的原因
    • HBV隐匿性感染（OBI）
      • 约0.1%-1%的HBsAg阴性人群血液或肝脏中仍存在极低水平的HBV DNA（通常<200 IU/mL）。
      • 这类患者因病毒整合至宿主基因组或宿主强烈的免疫应答导致病毒复制收到抑制而难以被常规检测发现
      • HBV cccDNA的表观沉默（如CpG岛甲基化）也可减少病毒转录，导致低水平病毒血症
      • OBI患者中约50%的病毒载量低于20 IU/mL，需依赖高敏或超敏检测试剂或肝组织活检。另外，病毒DNA可能间歇性出现于血清中，单次检测易漏诊。
    • 基因变异与重组
      • 核心启动子突变（A1762T/G1764A）减少病毒复制相关蛋白表达，使DNA载量波动于检测限附近
      • 核心启动子突变（A1762T/G1764A）减少病毒复制相关蛋白表达，使DNA载量波动于检测限附近
      • sP120T/sT126S突变的发生还会导致病毒颗粒分泌减少，肝内病毒复制仍活跃，但血清DNA载量下降
      • 而X基因缺失（如XΔ97）导致病毒复制能力下降，但保留部分转录活性，形成低水平感染。
    • 病毒复制动态变化和免疫逃逸
      • 抗病毒治疗可抑制病毒至<20 IU/mL，但未完全清除cccDNA，导致间歇性漏检。
  • 宿主的的原因
    • 宿主的免疫状态
      • 对于化疗/器官移植患者：免疫抑制剂（如糖皮质激素、抗CD20单抗）可解除对HBV的免疫控制，但病毒载量可能呈间歇性释放
      • HIV合并感染导致CD4+ T细胞耗竭，削弱对HBV的免疫监视。
      • 新生儿或免疫耐受期慢性HBV感染者（HBeAg阳性、ALT正常）病毒载量通常较高，但部分因病毒整合或cccDNA沉默导致DNA载量波动。
    • 抗病毒治疗后出现的
      • 长期核苷类似物（NAs）治疗可抑制病毒至极低水平，但部分患者仍存在LLV，常规检测易漏检。即使血清DNA阴性，肝细胞核内cccDNA仍可维持低水平复制。
    • 宿主基因多态性
      • 宿主基因变异可能通过影响免疫应答或病毒-宿主相互作用，间接导致DNA载量波动。如：APOBEC3B高表达可诱导HBV前基因组RNA编辑，导致缺陷病毒颗粒生成，血清DNA载量低于检测限。
  • 检测因素
    • 样本采集与处理
      • 样本的质量直接影响HBV DNA检测的准确性，不规范操作会导致乙肝DNA漏检的发生。延迟血清/血浆分离：全血样本在常温下放置时间过长（>6小时），血细胞裂解释放的核酸酶（如DNase I）可降解病毒DNA。反复冻融导致DNA断裂，对低载量样本（<50 IU/mL）影响显著。长期保存需-80℃
    • 样本质量
      • 血液中的内源性或外源性物质可能抑制PCR扩增，导致假阴性。溶血：红细胞破裂释放的血红蛋白可与DNA聚合酶结合，抑制扩增反应。脂血：乳糜微粒可包裹病毒颗粒，阻碍核酸释放。抗凝剂：肝素抗凝血浆可能抑制Taq酶活性，而EDTA抗凝血则更稳定。
    • 核酸提取效率低下是漏检的关键环节。如提取过程中未彻底去除肝素、胆盐等抑制剂。抑制剂残留可使PCR扩增效率下降
• 解决方案
  • 选择高灵敏检测技术：
    • 尤其适用于抗病毒治疗或免疫抑制人群。
  • 规范样本处理流程：
    • 采血后2小时内分离血清，-80℃保存避免降解。
  • 联合检测指标：
    • 结合HBV RNA、HBsAg定量及抗-HBc抗体水平综合判断。
  • 动态监测：
    • 高危人群（如OBI、LLV）建议定期复查。
• HBVRNA临床应用
  • 血清 HBV RNA 与肝组织内 cccDNA 的相关性：血 清 HBV RNA 主要由肝细胞核内的 cccDNA 模板转录而 来，故可用于反映 cccDNA 的拷贝数量及其转录活性。
  • 血清HBV RNA与其他病毒学指标的相关性：在未 经抗病毒治疗的慢性 HBV 感染者中，血清 HBV RNA 水 平 与 血 清 HBV DNA、HBsAg 和 HBV 核 心 相 关 抗 原 （hepatitis B core-related antigen，HBcrAg）定量均呈正 相 关
  • 血清 HBV RNA 在区分 HBV 感染自然史中的价 值：慢性 HBV感染自然史可分为免疫耐受、免疫清除、免疫 控制和再活动 4 期，且可用于预测 CHB 患 者的自然史分期