导图社区 11种贸易术语
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2019年年中总结（闵利利）
细胞生物学的研究方法
显微镜技术
光学显微镜技术
普通光学显微镜
主要由聚光镜、物镜和目镜三部分组成
分辨率
能够区分相近两点的最小距离，两点的距离越小，显微镜的分辨率越高
是衡量显微镜的成像能力的主要指标
分辨率会随着放大倍数的增加而增加，但当放大倍数超过500时，继续增加放大倍数，分辨率不再增加
观察前的准备
固定：将组织放在固定液中，如甲醛或戊二醇，使之与蛋白质的游离氨基酸形成共价键交联起
包埋：用支持剂蜡或树脂进行包埋
切片：组织太厚时需在固定后制成薄切片，约1~10μm
染色：多数细胞总质量70%是水，基本透明，苏木精对负电荷分子有亲和力，显示核酸分布；伊红使细胞质染色；苏丹染料使脂肪着色
相差显微镜通常用于观察活细胞
需特殊光学系统，利用光的衍射和干涉效应
能够观察活细胞的运动，由于多数细胞运动缓慢，需借助显微电影摄影术或电视录像进行记录
暗视野显微镜通过散射光成像
可用于观察细胞运动，细胞轮廓，活细胞内细胞核和线粒体，液体介质中的真菌和细菌等
荧光显微镜可以呈现强反差的彩色图像
具有两组激光片和一个分光镜，成像反差强，检测灵敏度高
吖啶橙使DNA呈绿色，使RNA呈红色
共聚光激光扫描显微镜可以提供高清晰的彩色三维图像
单色激光，逐点扫描
共聚焦指物镜和聚光镜互相共焦点，保证了只有从标本焦发出的光线聚焦成像，焦面外的漫射光不参与成像
超分辨光学显微镜的分辨率达到纳米尺度
电子显微镜技术
用电子束作光源大大提高了显微镜的分辨率，电子运动越快，波长越短，电子显微镜下观察到的结构称为亚显微结构或超显结构
透射电子显微镜用于观察细胞的超微结构
扫描电子显微镜用于观察生物样品表面的立体结构：分辨率较低，多用于细胞组织的观察整体或组织的观察
冷冻电镜用于解析生物大分子的结构
其他显微镜技术
扫描隧道显微镜可直接观察到大分子的三维结构
具有高分辨率
原子力显微镜可对单个分子进行操控
细胞的分离与培养
细胞分离
实体组织细胞的分离
机械分散法
消化法
不同类型细胞的分离
离心分离法：密度梯度离心法
流式细胞术：流式细胞仪
免疫磁珠法
细胞培养
指的是在无菌条件下，从机体中取出组织或细胞模拟机体内正常生理状态下生存的基本条件
原代培养：第一次接种培养
传代培养：原代培养后分离接种培养
体外建立细胞系
细胞系：无限繁殖、传代
诱变正常细胞
培养原代癌细胞
细胞株
细胞组分的分离和纯化技术
细胞裂解
基本原则：保护各种亚细胞结构固有的功能和细胞功能分子的活性，需加入渗透压维持剂和蛋白酶抑制剂
去垢剂
离子剂
非离子剂
兼性离子剂
细胞器及组分的分级分离
差速离心法：分离体积和质量较大颗粒
速度沉降法：分离沉降系数不同的颗粒
平衡沉降法：分离密度不同的颗粒
蛋白质的分离和鉴定
层析法纯化蛋白质
离子交换层析
凝胶过度层析
疏水性层析
亲和层析
电泳法分析鉴定蛋白质
SOS聚丙烯酰胺凝胶电泳：根据相对分子质量大小
等电聚焦电泳：电点不同
双向电泳：效果更好
差速离心沉淀：纯化
凝胶电泳：鉴定
核算的分离纯化与鉴定
纯化：差速离心沉淀
鉴定：凝胶电泳
细胞化学和细胞内分子示踪技术
酶细胞化学技术
免疫细胞化学技术
放射自显影技术
放射性同位素
活细胞内分子示踪
离子探针：进行C内离子实时检测
绿色荧光蛋白：显示特定蛋白在C内定位
荧光共振能量转移：实时观察细胞间相互作用
单分子示踪：研究活C内大分子行为及功能
细胞功能基因组学研究技术
基因表达的定量分析
基因表达的上调和下调技术
蛋白质与核酸相互作用的研究技术
蛋白质相互作用技术
生物芯片技术
蛋白质组学技术
高通量测序技术
单细胞测序技术
模式动物个体水平的基因操作技术
