基因工程

基因工程绪论思维导图，包括基因工程的诞生、基因工程的安全性及其管理、基因工程的应用三部分内容。

基因工程

• 定义
• 目的基因的获取
  • 工具
    • 限制酶
      • 特点
        • 识别特定核苷酸序列
      • 作用部位
        • 磷酸二酯键
      • 来源
        • 原核生物（在原核生物体内切割 外来DNA分子，保护自身安全）
      • EcoRI限制酶（黏性末端）
      • Smal限制酶（平末端）
      • 识别6个核苷酸 少数限制酶识别4 5 8等
    • DNA连接酶
      • 作用
        • 连接两个DNA片段（与DNA聚合酶区分）
      • E·coliDNA连接酶（来自大肠杆菌）
      • T4DNA连接酶
    • 载体
      • 种类
        • 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒
      • 要求
        • 一个至多个限制酶切割位点
        • 能在细胞中自我复制
        • 有特殊的标记基因（供重组DNA的鉴定和选择）
      • 质粒
        • 裸露，结构简单，独立于拟核DNA之外
        • 双链环状DNA分子
        • 用作载体的质粒经过人工改造
  • 方法
    • 从基因文库获取
      • 基因文库
        • 基因组文库
        • cDNA文库
    • PCR技术扩增
      • 在PCR合成 仪自动完成
      • 原理
      • 条件
        • 引物（一对）
        • 模板，Taq酶
        • 能量
        • 原料
        • 用dATP（提供能量和原料）
      • 过程
        • 90-95℃变性
        • 55-60℃退火
        • 70-75℃延伸
    • 人工合成
      • 反转录法
        • 相对分子质量较大 核苷酸序列未知
      • 化学合成法
        • 相对分子质量较小 核苷酸序列已知
      • 无非编码序列
  • 途径
    • 人工合成
    • 从生物材料分离
• 基因表达载体的构建
• 将目的基因导入受体细胞
• 目的基因的检测与鉴定