导图社区 基因工程
基因工程:包含限制性内切核酸酶,来源:原核生物真菌类,识别序列:回文数列,偶数个碱基对,常用载体:入噬菌体衍生物,动植物病毒,质粒等等
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建筑隔热与通风
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第三章 建筑分类和耐火等级
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生态学形成和发展
【068】福建省物业管理条例2018第二章 _业主大会和业主委员会
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家庭装修预算表
软件工程-需求分析
基因工程
工具
限制性内切核酸酶
来源:原核生物真菌类
作用于磷酸二酯键
识别序列:回文数列,偶数个碱基对
载体
常用载体:入噬菌体衍生物,动植物病毒,质粒
条件
能在受体细胞中自我复制并稳定保存
具有一到多个酶切位点
具有标记基因
质粒能与目的基因结合
DNA连接酶
形成磷酸二酯键
对作用序列不做要求
分类
E.coli DNA连接酶
连接粘性末端
T4DNA连接酶
可以连接粘性末端,也可以连接平末端,连接粘性末端效率高
操作流程
目的基因的筛选和获取
从基因文库中提取(CDNA文库)
人工化学合成
逆转录法
化学合成:序列已知且短小
PCR聚合酶链式反应
变性–复性–延伸
引物:DNA
成对存在,彼此不能互补
引物自身不能互补
不能太长太短
依据:扩增的DNA片段的两端序列
酶:TaqDNA聚合酶
基因表达载体的建立(核心步骤)
目的基因导入受体细胞
植物细胞
花粉管通道法
农杆菌转化法,单子叶植株需要提供信号
基因枪法
动物细胞
显微注射法:受精卵
在特定器官中表达:加上启动子
微生物细胞
Ca处理
目的基因检测和鉴定
抗原抗体杂交
检测DNA RNA
PCR.
分子杂交
实验
DNA粗提取和鉴定
原料
动物:猪血猪肝. 不可取哺乳动物血细胞
植物: 香蕉洋葱
DNA在氯化钠中溶解度
柠檬酸钠:防止血液凝固
两次过滤
第1次去除不溶于氯化钠的杂质
第2次去除溶于氯化钠的杂质
预冷:降低酶活性