第七章-层析

这是一篇关于第七章-层析的思维导图，包括：层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水性相互作用层析、亲和吸附层析。

第七章-层析

• 层析
  • 层析的原理与分析
    • 依据&原理
      • 溶质在不混溶两项间分配行为不同导致的移动速度不同
    • 应用
      • 分离纯化
      • 定量分析
    • 分类
      • 次级原理分
        • 吸附色谱
        • 离子交换层析
        • 疏水色谱
        • 亲和色谱
        • 反相色谱
        • 迁移色谱
        • 凝胶色谱
      • 流动相分
        • 气相层析法
        • 液相层析法
        • 超临界分析法
        • 子主题
      • 固相分
        • 纸层析法
        • 薄层层析法
        • 柱层析法
      • 特例
        • 径向流层析
  • 常用的层析介质
    • 概念&组成
      • 用于层析分离的分离介质，由基质和表面活性功能团组成
    • 要求/特点
      • 不溶于流动相
      • 化学性质稳定，机械强度高，热稳定性好，不易被生物降解
      • 表面积大，粒径均匀
    • 分类
      • 无机物
        • 氧化铝，硅胶（500度失活），活性炭（水吸非极）
      • 多糖
        • 琼脂糖（亲水），葡聚糖（凝胶过滤），纤维素（高效液相层析）
      • 人工合成
        • 聚丙烯酰胺凝胶（亲水，机械强度差）
  • 层析原理
    • 平衡模型
      • 特点
        • 流动相平推流
        • 分配平衡瞬间完成
      • 线性关系
      • 非线性关系
    • 理论板模型
      • 分配平衡需要一定的柱高
      • 理论版当量高度
        • 一个理论板层析柱高度
    • 轴向扩散模型
  • 分离度
    • 两种洗脱曲线相邻的溶质相互分离的程度
    • R>1,溶质分离度好
    • 容量因子
      • 固定相与流动相溶质分配量之比
    • 选择性
      • 洗脱峰相邻的两种溶质的容量因子之比
• 凝胶过滤层析
  • 原理
    • 溶质相对分子质量差别
      • 凝胶粒子为固定相
        • 液相层析
          • 体积排阻色谱
  • 操作
    • 洗脱峰间洗脱剂体积
    • 洗脱峰料液体积
      • V0-Vt
  • 凝胶过滤介质
    • 应用
      • 蛋白质分离
      • 除盐
    • 要求
      • 亲水
      • 稳定
      • 有孔径分布
      • 机械强度高
    • 类别
      • sephadexG
      • 琼脂糖凝胶sepharose
      • tsk凝胶
      • superdex凝胶
      • superose凝胶
  • 凝胶特性参数
    • 排阻极限
      • 凝胶孔隙能容纳的最大溶质的相对分子质量
        • 洗脱体积为V0
    • 分级范围
      • 能进入凝胶内部分离（凝胶阻滞）并相互可分离的溶质的相对分子质量
    • 溶胀率
      • 干凝胶所吸收水分的重量与干凝胶质量之比
        • sephadexG型号与其有关
    • 凝胶粒径
      • 用筛目或微米表示
    • 床体积
      • 1g干凝胶溶胀后体积
    • 空隙体积
      • 层析柱中凝胶空隙体积
        • 2000kD水溶性蓝色葡聚糖测量
  • 影响分离特性（分离度）因素
    • HETP
      • A-流动相线速度
      • B-料液体积
      • C-料液浓度
      • 凝胶粒径
    • 分子量
      • 分配系数
  • 应用
    • 分离纯化
      • 酶解产物分离
      • 青霉素纯化
    • 脱盐
    • 相对分子质量测定
  • 特性
    • 溶质与介质不反应，可恒定洗脱
    • 可循环操作
    • 脱盐方式凝胶过滤层析优先度高
    • 操作简便，容易工厂化放大
    • 选择性低
    • 产品经GFC被稀释
• 离子交换层析
  • 原理
    • 荷电溶质与离子交换剂静电相互作用力
    • 离子交换剂做固定相
  • 特性
    • 生化分离中这方式优先度高
    • 分辨率高，工作量大
  • 离子交换介质
    • 分类
      • 离子交换树脂
        • 阳离子交换树脂
          • CM
          • P
          • SP
        • 阴离子交换树脂
          • DEAE
          • QAE
      • 多糖类
      • 纤维素类
      • mono beads类
    • 常用弱型交换树脂
  • 洗脱方式
    • 线性梯度洗脱
      • 流动相离子强度线性增大
    • 逐次洗脱
      • 溶质浓缩
  • 影响因素
    • 蛋白质等电点
    • 电离常数
    • 全交换容量
    • pH
    • 离子强度
    • 操作形式
• 疏水性相互作用层析
  • 原理
    • 蛋白质与疏水性吸附剂的若疏水相互作用差别
    • 疏水性吸附剂为固定相
  • 方法
    • 线性梯度洗脱
    • 逐次洗脱
  • 疏水吸附剂
    • 苯基
    • 短链烷基
    • 烷氨基
    • 聚乙二醇
    • 聚醚
• 亲和吸附层析
  • 有偶联亲和配基的亲和吸附介质亲和吸附
  • 特异性高，选择性强，提纯效率高
  • 具体步骤
    • 配基M固相化
    • 亲和
    • 解离